藏藥印度獐芽菜石油醚部位化學成分及體外活性研究

尤蓉蓉+陳雪晴+何丹丹+黃長高+金陽+錢士輝+鞠建明+范君婷

[摘要] 采用各種柱色譜以及重結晶等方法對印度獐芽菜石油醚萃取部位進行化學成分研究。通過理化性質和波譜數據分析鑒定了15個化合物，包括8個酮，2個三萜，1個裂環烯醚萜，1個香豆素和3個其他類化合物，分別為1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮（1）、1-羥基-3，7，8-三甲氧基酮（2）、1，8-二羥基-3，5，7-三甲氧基酮（3）、1-羥基-3，5，7，8-四甲氧基酮（4）、1，5，8-三羥基-3-甲氧基酮（5）、1-羥基-3，7-二甲氧基酮（6）、1，8-二羥基-3，7-二甲氧基酮（7）、1-羥基-3，5-二甲氧基酮（8）、古柯二醇（9）、齊墩果酸（10）、（±）-龍膽內酯（11）、東莨菪內酯（12）、芥子醛（13）、丁香醛（14）、β-谷甾醇（15）。其中化合物3，4，9，11～14為首次從該植物中分離得到，化合物9和12為首次從獐芽菜屬中發現。對5個量大酮1，2，5，7，8進行體外活性測試，結果顯示其在最高濃度50 μmol·L-1對胰腺癌細胞SW1990和BxPC-3的增殖和過氧化氫（H2O2）誘導的人臍靜脈融合細胞EA.hy926氧化應激損傷均無明顯作用。

[關鍵詞] 印度獐芽菜； 酮； 石油醚部位； 化學成分； 胰腺癌細胞； 氧化應激損傷

[Abstract] The present work is to study the chemical constituents from petroleum ether fraction of Tibetan medicine Swertia chirayita by column chromatography and recrystallization. The structures were identified by physical and chemical properties and spectral data as swerchirin （1）， decussatin （2）， 1，8-dihydroxy-3，5，7-trimethoxyxanthone （3）， 1-hydroxy-3，5，7，8-tetramethoxyxanthone （4）， bellidifolin （5）， 1-hydroxy-3， 7-dimethoxyxanthone （6）， methylswertianin （7）， 1-hydroxy-3，5-dimethoxyxanthone （8）， erythrodiol （9）， oleanolic acid （10）， gnetiolactone （11）， scopoletin （12）， sinapaldehyde （13）， syringaldehyde （14）， and β-sitosterol （15）. Compounds 3， 4， 9， 11-14 were isolated from S. chirayita for the first time. Compounds 9 and 12 were firstly isolated from the genus Swertia. The cytotoxic activities of compounds 1， 2， 5， 7 and 8 against human pancreatic cancer cell lines SW1990 and BxPC-3，and the protective effects of these compounds against hydrogen peroxide （H2O2）-induced oxidative stress in human endothelium-derived EA.hy926 were investigated in vitro. The results showed no obvious effect at the high concentration of 50 μmol·L-1

[Key words] Swertia chirayita； xanthone； petroleum ether fraction； chemical constituents； pancreatic cancer cells； oxidative stress damage

印度獐牙菜Swertia chirayita （Roxb. ex Fleming） H. Karst.，藏語名“甲蒂”，為龍膽科植物印度獐牙菜的干燥全草，主要分布在克什米爾至不丹的喜馬拉雅溫帶地區，主產于印度、尼泊爾和不丹，是藏醫藥治療肝膽疾病的首選藥物，在印度傳統醫藥中也廣泛應用^[1]。藏藥經典著作《月王藥診》、《四部醫典》、《晶珠本草》及《藍琉璃·論說續》等均收載其清肝利膽、退諸熱的功效，臨床上用于治療肝炎，肝硬化，膽囊炎，膽結石等疾病^[2]。目前印度獐牙菜化學成分研究很少，主要報道了酮、環烯醚萜及少量三萜、甾醇等^[3-5]。現代藥理作用研究表明其具有抗肝炎、抗腫瘤、抗氧化、抗菌、降血糖等作用^[6-8]。為了進一步闡明其藥效物質基礎，本研究應用現代分離分析技術，對其85%乙醇提取物的石油醚萃取部位進行化學成分分離，得到并鑒定15個化合物，包括8個酮，表明酮類是石油醚部位的主要成分。另外，7個化合物從該種首次分離，2個化合物從獐芽菜屬首次分離。本研究還對其中5個主要酮進行體外腫瘤細胞毒和抗氧化應激損傷的活性篩選，結果發現無明顯作用。

1 材料

Agilent Technologies 6410 Triple quad LC/MS液質聯用儀（美國Agilent公司）；BRUKER AVANCE Ⅲ-600型核磁共振儀（德國Bruker 公司）；SGW-1型自動旋光儀（上海儀電物理光學儀器有限公司）；LNC自動純化系統（美國LNC）；Sephadex LH-20（美國Pharmacia公司）；MCI填充材料（Wharton Scientific，南京元寶峰醫藥科技有限公司）；薄層色譜硅膠GF254（青島海洋化工廠）；柱色譜硅膠（青島美高集團有限公司）；旋轉蒸發儀RE-52A （上海亞榮生化儀器廠）；DMEM（美國Hyclone公司）；MTT（美國Thermo公司）；胎牛血清（以色列Biological industries公司）；Multiskan FC全自動酶標儀（美國Thermo公司）；細胞株SW1990細胞、BxPC-3細胞和EA.hy926細胞購自中科院上海細胞生物學研究所。常規試劑均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）。

印度獐芽菜購自西藏多雄拉藏藥有限公司（批號201411011），經江蘇省中醫藥研究院錢士輝研究員鑒定為龍膽科植物印度獐牙菜S. chirayita的干燥全草。藥材標本存放于江蘇省中醫藥研究院標本室。

2 提取與分離

印度獐芽菜的干燥全草30 kg，粉粹后用10倍量的85%乙醇回流提取2次，每次3 h，提取液經減壓回收乙醇，濃縮得浸膏約3 kg。將浸膏混懸于水中，分別用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑濃縮得到石油醚部位52 g、醋酸乙酯部位432 g、正丁醇部位1 094 g。其中石油醚部位浸膏（52 g），經硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（100∶1～0∶1）梯度洗脫，得到18個組分（Fr.1～Fr.18）。Fr.10（7.4 g）經硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（20∶1～0∶1）梯度洗脫，得到13個組分（Fr.10.1～Fr.10.13）。Fr.10.10（1.0 g）經甲醇重結晶后，得到化合物1（610 mg），母液減壓濃縮（0.3 g）經硅膠柱色譜，石油醚-二氯甲烷（3∶1）等度洗脫，得到化合物7（50 mg）和8（80 mg）。Fr.10.11（0.35 g），經硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（15∶1～0∶1）梯度洗脫，得到化合物15（35 mg）。Fr.10.13（20 mg）經Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物6（8 mg）。Fr.12（2.3 g）經硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（60∶1～10∶1）梯度洗脫，得到14個組分（Fr.12.1～Fr.12.14）。Fr.12.9（1.2 g）經MCI樹脂柱色譜，甲醇-水（40∶60～100∶0）梯度洗脫，得到15個組分（Fr.12.9.1～Fr.12.9.15）。Fr.12.9.4（0.4 g）經硅膠柱色譜，二氯甲烷-醋酸乙酯（6∶1～0∶1）梯度洗脫，得到化合物2（25 mg）和9（5 mg）。Fr.13（0.3 g）經MCI樹脂柱色譜，甲醇-水（40∶60～100∶0）梯度洗脫，得到4個組分（Fr.13.1～Fr.13.4）。Fr.13.2（50 mg）為甲醇-水（60∶40）流分，經硅膠柱色譜，石油醚-二氯甲烷（3∶1～1∶1）梯度洗脫，得到化合物3（8 mg）和4（10 mg）。Fr.13.3（0.1 g）為甲醇-水（80∶20）流分的白色絮狀物，過濾干燥得到化合物10（20 mg）。Fr.15（2.8 g）經MCI樹脂柱色譜，甲醇-水（0∶100～100∶0）梯度洗脫后，得到6個組分（Fr.15.1～Fr.15.6）。Fr.15.4（0.7 g）經硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（10∶1～0∶1）梯度洗脫，得到化合物5（120 mg）。Fr.16（1.1 g）經硅膠柱色譜，石油醚-醋酸乙酯（50∶1～1∶1）梯度洗脫，得到3個組分（Fr.16.1～Fr.16.3）。Fr.16.2（0.2 g）經Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物14（10 mg）。Fr.16.3（0.1 g）經硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（5∶1～1∶1）洗脫，得到化合物13（5 mg）。Fr.17（0.5 g）經MCI樹脂柱色譜，甲醇-水（0∶100～100∶0）梯度洗脫后，得到9個組份（Fr.17.1～Fr.17.9）。Fr.17.1（150 mg）經硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（0∶1～1∶1）洗脫，得到3個組份（Fr.17.1.1～Fr.17.1.3）。Fr.17.1.2（56 mg）經硅膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（5∶1）等度洗脫，得到化合物11（7 mg）。Fr.17.7（35 mg）經Sephadex LH-20凝膠柱色譜，二氯甲烷-甲醇（1∶1）洗脫，得到化合物12（10 mg）。

3 結構鑒定

化合物1 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 287 [M-H]-。1H-NMR （CDCl3，600 MHz） δ： 11.92 （1H，s，1-OH），11.33 （1H，s，8-OH），7.16 （1H，d，J=8.9 Hz，H-6），6.65 （1H，d，J=8.9 Hz，H-7），6.48 （1H，d，J=2.0 Hz，H-4），6.28 （1H，d，J=2.0 Hz，H-2），3.89 （3H，s，5-OCH3），3.82 （3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR （CDCl3，150 MHz） δ： 161.8 （C-1），96.9 （C-2），166.4 （C-3），92.1 （C-4），156.7 （C-4a），144.3 （C-4b），138.8 （C-5），119.2 （C-6），108.3 （C-7），153.0 （C-8），107.1 （C-8a），101.8 （C-8b），183.5 （C-9），55.0（3-OCH3），56.3（5-OCH3）。以上數據與文獻報道^[9-10]對比，鑒定為1，8-二羥基-3，5-二甲氧基酮。

化合物2 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 303 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 13.19（1H，s，1-OH），7.26（1H，d，J=9.2 Hz，H-6），7.09（1H，d，J=9.2 Hz，H-5），6.26（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.23（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.93（3H，s，8-OCH3），3.86（3H，s，7-OCH3），3.80（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 164.0（C-1），97.0（C-2），166.6（C-3），92.2（C-4），157.3（C-4a），151.1（C-4b），113.0（C-5），120.5（C-6），149.4（C-7），149.0（C-8），115.9（C-8a），104.2（C-8b），181.4（C-9），56.0（3-OCH3），57.3（7-OCH3），62.0（8-OCH3）。以上數據與文獻報道^[9]對比，鑒定為1-羥基-3，7，8-三甲氧基酮。

化合物3 黃色粉末。ESI-MS m/z 319 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 11.97（1H，s，1-OH），11.57（1H，s，8-OH），7.03（1H，s，H-6），6.50（1H，d，J=2.1 Hz，H-4），6.33（1H，d，J=2.1 Hz，H-2），3.97（3H，s，-OCH3），3.95（3H，s，-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 162.8（C-1），97.7（C-2），167.5（C-3），92.9（C-4），157.9（C-4a），139.3（C-4b），139.1（C-5），108.0（C-6），142.0（C-7），143.4（C-8），108.2（C-8a），102.5（C-8b），184.9（C-9），57.5（-OCH3），56.0（-OCH3），57.8（-OCH3）。以上數據與文獻報道^[11-12]對比，鑒定為1，8-二羥基-3，5，7-三甲氧基酮。

化合物4 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 333 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 13.20（1H，s，1-OH），6.98（1H，s，H-6），6.47（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.32（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），4.01（3H，s，8-OCH3），3.95（3H，s，5-OCH3），3.93（3H，s，7-OCH3），3.87（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 163.6（C-1），97.4（C-2），166.4（C-3），92.1（C-4），156.9（C-4a），141.5（C-4b），148.7（C-5），105.2（C-6），141.1（C-7），144.5（C-8），116.1（C-8a），104.2（C-8b），181.1（C-9），55.8（3-OCH3），56.9（5-OCH3），57.7（7-OCH3），61.9（8-OCH3）。以上數據與文獻報道^[13]對比，鑒定為1-羥基-3，5，7，8-四甲氧基酮。

化合物5 黃色粉末。ESI-MS m/z 273 [M-H]-。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz） δ： 11.88（1H，s，1-OH），11.05（1H，s，8-OH），9.68（1H，s，5-OH），7.24（1H，d，J=8.8 Hz，H-6），6.62（1H，d，J=8.8 Hz，H-7），6.58（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.37（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.88（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz） δ： 161.9（C-1），97.5（C-2），167.1（C-3），93.0（C-4），157.4（C-4a），143.4（C-4b），137.3（C-5），123.8（C-6），109.5（C-7），151.8（C-8），107.5（C-8a），102.1（C-8b），184.1（C-9），56.2（3-OCH3）。以上數據與文獻報道^[14]對比，鑒定為1，5，8-三羥基-3-甲氧基酮。

化合物6 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 273 [M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.88（1H，s，1-OH），7.61（1H，d，J=3.0 Hz，H-8），7.37（1H，d，J=9.1 Hz，H-5），7.31（1H，dd，J=9.1，3.0 Hz，H-6），6.43（1H，d，J=2.1 Hz，H-4），6.36（1H，d，J=2.1 Hz，H-2），3.91（3H，s，7-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 163.4（C-1），97.0（C-2），166.6（C-3），92.5（C-4），157.8（C-4a），156.0（C-4b），119.0（C-5），124.9（C-6），150.8（C-7），105.2（C-8），120.9（C-8a），103.7（C-8b），180.6（C-9），55.8（3-OCH3），55.9（7-OCH3）。以上數據與文獻報道^[15]對比，鑒定為1-羥基-3，7-二甲氧基酮。

化合物7 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 289[M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.09（1H，s，8-OH），11.95（1H，s，1-OH），7.25（1H，d，J=9.0 Hz，H-6），6.83（1H，d，J=9.0 Hz，H-5），6.37（1H，d，J=2.2 Hz，H-4），6.31（1H，d，J=2.2 Hz，H-2），3.93（3H，s，7-OCH3），3.89（3H，s，3-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 162.9（C-1），97.2（C-2），167.4（C-3），92.9（C-4），158.1（C-4a），149.6（C-4b），105.6（C-5），120.3（C-6），142.9（C-7），150.1（C-8），107.7（C-8a），102.3（C-8b），185.0（C-9），55.9（3-OCH3），57.0（7-OCH3）。以上數據與文獻報道^[9，16]對比，鑒定為1，8-二羥基-3，7-二甲氧基酮。

化合物8 黃色針晶（氯仿）。ESI-MS m/z 273[M+H]+。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 12.82（1H，s，1-OH），7.80（1H，br d，J=7.9 Hz，H-8），7.29（1H，t，J=7.9 Hz，H-7），7.22（1H，br d，J=7.9 Hz，H-6），6.55（1H，d，J=1.8 Hz，H-4），6.35（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），4.02（3H，s，3-OCH3），3.88（3H，s，5-OCH3）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ：163.3（C-1），97.5（C-2），166.7（C-3），92.8（C-4），157.5（C-4a），146.2（C-4b），148.2（C-5），115.6（C-6），123.6（C-7），116.7（C-8），121.5（C-8a），103.9（C-8b），180.8（C-9），55.3（3-OCH3），56.4（5-OCH3）。以上數據與文獻報道^[17]對比，鑒定為1-羥基-3，5-二甲氧基酮。

化合物9 白色粉末。ESI-MS m/z 443 [M+H]+，487.4 [M+COO]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.19（1H，t，J=3.4 Hz，H-12），3.55（1H，d，J=11.0 Hz，H-28a），3.21（1H，d，J=11.0 Hz，H-28b），3.21（1H，m，H-3），1.16（3H，s，H-27），0.99（3H，s，H-24），0.94（3H，s，H-26），0.93（3H，s，H-25），0.89（3H，s，H-30），0.87（3H，s，H-29），0.79（3H，s，H-23）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 38.6（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），38.8（C-4），55.1（C-5），18.3（C-6），32.5（C-7），39.8（C-8），47.6（C-9），36.9（C-10），23.5（C-11），122.4（C-12），144.2（C-13），41.7（C-14），25.5（C-15），22.0（C-16），36.9（C-17），42.3（C-18），46.4（C-19），30.9（C-20），34.1（C-21），31.0（C-22），28.1（C-23），15.6（C-24），15.5（C-25），16.7（C-26），25.9（C-27），69.7（C-28），33.2（C-29），23.6（C-30）。以上數據與文獻報道^[18]對比，鑒定為古柯二醇。

化合物10 白色粉末。ESI-MS m/z 455 [M-H]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.21（1H，t，J=3.1 Hz，H-12），3.15（1H，dd，J=11.3，4.1 Hz，H-3），2.75（1H，dd，J=13.6，3.6 Hz，H-18），1.06（3H，s，H-27），0.91（3H，s，H-23），0.86（3H，s，H-30），0.84（3H，s，H-25），0.83（3H，s，H-29），0.70（3H，s，H-24），0.68（3H，s，H-26）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 38.6（C-1），27.3（C-2），79.2（C-3），38.9（C-4），55.4（C-5），18.5（C-6），32.6（C-7），39.4（C-8），47.8（C-9），37.3（C-10），23.1（C-11），122.8（C-12），143.8（C-13），41.8（C-14），27.9（C-15），23.6（C-16），46.7（C-17），41.1（C-18），46.1（C-19），30.9（C-20），34.0（C-21），32.8（C-22），28.3（C-23），15.8（C-24），15.5（C-25），17.3（C-26），26.1（C-27），183.8（C-28），33.3（C-29），23.8（C-30）。以上數據與文獻報道^[19]對比，鑒定為齊墩果酸。

化合物11 無色方晶（氯仿），[α]27D 0.0（c 0.1，CHCl3）。ESI-MS m/z 211 [M-H]-。1H-NMR（CDCl3，600 MHz） δ： 5.25（1H，br d，J=16.4 Hz，H-3a），5.02（1H，dt，J=16.4，3.0，H-3b），4.53（1H，m，H-7a），4.48（1H，m，H-7b），3.57（1H，s，9-OH），2.83（1H，m，H-6a），2.66（1H，m，H-6b），1.87（1H，dq，J=14.8，7.5 Hz，H-8a），1.73（1H，dq，J=14.8，7.5 Hz，H-8b），1.01（3H，t，J=7.5 Hz，H-10）； 13C-NMR（CDCl3，150 MHz） δ： 172.8（C-1），66.9（C-3），119.9（C-4），153.7（C-5），22.8（C-6），66.8（C-7），31.0（C-8），72.4（C-9），7.9（C-10），161.8（C-11）。以上數據與文獻報道^[20]對比，鑒定為（R）-（-）-龍膽內酯和（S）-（+）-龍膽內酯的混晶[（±）-龍膽內酯]。

化合物12 白色粉末。ESI-MS m/z 191 [M-H]-。1H-NMR（CD3OD，600 MHz） δ： 7.85（1H，d，J=9.4 Hz，H-4），7.11（1H，s，H-5），6.76（1H，s，H-8），6.20（1H，d，J=9.4 Hz，H-3），3.90（3H，s，6-OCH3）； 13C-NMR（CD3OD，150 MHz） δ： 164.1（C-2），112.6（C-3），146.1（C-4），112.6（C-4a），109.9（C-5），147.1（C-6），152.9（C-7），103.9（C-8），151.4（C-8a），56.8（6-OCH3）。以上數據與文獻報道^[21]對比，鑒定為東莨菪內酯。

化合物13 白色無定型粉末。ESI-MS m/z 207 [M-H]-。1H-NMR （C5D5N，600 MHz） δ： 9.87（1H，d，J=7.8 Hz，H-9），7.54（1H，d，J=15.7 Hz，H-7），7.14（2H，s，H-2，H-6），6.97（1H，dd，J=15.7，7.8 Hz，H-8），3.87（6H，s，3-OCH3，5-OCH3）； 13C-NMR（C5D5N，150 MHz） δ： 125.5（C-1），107.7（C-2，6），149.8（C-3，5），142.0（C-4），154.7（C-7），127.0（C-8），194.0（C-9），56.9（3-OCH3，5-OCH3）。以上數據與文獻報道^[22]對比，鑒定為芥子醛。

化合物14 白色粉末。ESI-MS m/z 181 [M-H]-，183 [M+H]+。1H-NMR（CD3OD，600 MHz） δ： 9.74（1H，s，H-7），7.22（2H，s，H-2，6），3.91（6H，s，3-OCH3，5-OCH3）； 13C-NMR（CD3OD，150 MHz） δ：129.2（C-1），108.2（C-2，6），149.6（C-3，5），143.7（C-4），56.8（3-OCH3，5-OCH3），192.9（C-7）。以上數據與文獻報道^[23]對比，鑒定為丁香醛。

化合物15 白色粉末，易溶于氯仿，難溶于甲醇，熔點mp136～138 ℃，TLC鑒定，在3種溶劑系統下與β-谷甾醇對照品在相同Rf處呈現相同的斑點，10%硫酸乙醇溶液顯紫紅色斑點，混合熔點不下降，鑒定為β-谷甾醇。

4 體外抗腫瘤活性

MTT法考察化合物1，2，5，7，8對胰腺癌細胞SW1990和BxPC-3的增殖的影響。取對數生長期的胰腺癌SW1990或BxPC-3細胞按照每孔約5×103個接種于96孔培養板中，每孔100 μL，置于37 ℃，5% CO2培養箱培養24 h。待細胞貼壁后棄去舊培養基，設置3組：①溶劑對照組：加入含有0.1% DMSO的DMEM培養基；②陽性對照組：阿霉素；③給藥組：加入含有終濃度為1，5，10，25，50 μmol·L-1的各化合物的培養基，每組6個復孔。置于37 ℃，5% CO2培養箱培養48 h后，每孔加入20 μL終濃度為5 g·L-1的MTT溶液，置于培養箱孵育4 h，小心吸出孔內的上清液，每孔加入150 μL DMSO，水平搖床輕度振蕩10～15 min，待孔內藍紫色甲臜結晶完全溶解后，用酶標儀以570 nm波長為檢測波長，測定各孔吸光度（A），重復實驗3次，按公式計算細胞增殖抑制率：抑制率（IR）=（對照組A-給藥組A）/對照組A×100%。結果顯示化合物1，2，5，7，8對胰腺癌細胞SW1990和BxPC-3在所測試的終濃度范圍內均無抑制作用（IR<50%）。

5 細胞氧化應激損傷

MTT法考察化合物1，2，5，7，8對H2O2誘導的EA.hy926細胞氧化應激損傷的影響。按照文獻[24]建立H2O2誘導的EA.hy926細胞過氧化損傷模型，設置對照組和H2O2組篩選出最佳造模濃度為300 μmol·L-1和造模時間為24 h（細胞存活率為54.1%）。取對數生長期的EA.hy926細胞按照每孔約1×104個接種于96孔培養板中，每孔100 μL，培養24 h，設置3個組：①溶劑對照組：含0.1% DMSO的DMEM培養基；②H2O2模型組：含300 μmol·L-1 H2O2的培養基；③給藥組：含300 μmol·L-1H2O2和不同濃度的化合物（1，5，10，25，50 μmol·L-1）的培養基。按照4項所述MTT法，測定各孔吸光度（A），按公式細胞存活率=（實驗組A /對照組A）×100%，計算EA.hy926細胞存活率。結果顯示化合物1，2，5，7，8對H2O2誘導的EA.hy926細胞氧化應激損傷無明顯影響。

6 討論

本研究對藏藥印度獐芽菜85%乙醇提取物的石油醚萃取部位進行分離純化，得到15個化合物，其中8個為酮類化合物，表明酮類化合物是石油醚部位的主要化學成分，可能是其具有保肝，降血糖等藥理活性的物質基礎^{[4-5，25-26]}。本研究中對5個量大酮進行體外抗腫瘤和抗氧化應激損傷活性篩選，發現其在最高濃度為50 μmol·L-1時均無明顯作用。因此，有關酮類化合物的其他藥理活性有待進一步研究。

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[責任編輯 丁廣治]