鏈球菌2型對恩施黑豬致病性的研究

譚仕旦

摘要：為研究豬鏈球菌2型對恩施黑豬的致病性，采用分組試驗法，選取同窩8頭恩施黑豬，隨機分組，試驗組（6頭）注射豬鏈球菌2型菌液進行攻毒試驗，對照組（2頭）正常飼喂，觀察記錄50 h的試驗情況。結果表明，試驗組豬全部發病，體溫升高、呼吸迫促、敗血癥和神經癥狀；剖檢病（處）死豬尸體可見不同程度的腦膜充血淤血、關節炎、心肌炎、肺淤血、出血性炎癥等病理變化，對照組無異常。證實了豬鏈球菌2型對恩施黑豬有很強的致病性。

關鍵詞：豬鏈球菌2型；恩施黑豬；致病性；攻毒試驗

中圖分類號：S858.28；S855.1+1 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2017）010-0007-02

豬鏈球菌病（Swine streptococcosis）是由豬鏈球菌引起豬的一種發病急、死亡率高的細菌性傳染病，被列入我國動物傳染病中的二類病，人畜共患病，嚴重地威脅著我國養豬業的發展和人類食品公共衛生安全，引起了人們的高度重視。近年來，依據鏈球菌莢膜抗原的不同，人們將其分為 35 個血清型（1～34型和1/2 型）[1]。其中豬鏈球菌 2型（Strptococcus suis type 2， 簡稱SS2）被認為是豬鏈球菌 35個血清型中分布最廣致病性最強的一個血清型，人感染后可引起化膿性關節炎、腦膜炎、心內膜炎和中毒性休克綜合癥等[2]。1998年江蘇海安縣暴發豬鏈球菌病，25人感染，死亡14人；2005年7月四川省資陽市暴發豬鏈球菌病，并見有人感染而引起死亡的報道[1]。

近年來，因恩施黑豬的肉質好，養殖效益高，恩施黑豬養殖量日益增加，但在養殖生產過程中，時常發生疑似鏈球菌混合感染的病例。為了有效防控黑豬鏈球菌病的發生，特開展本次試驗。

1 材料與方法

1.1 菌株

豬鏈球菌2型菌株[3]來源于長江大學動物科學院實驗室分離制備的菌液。

1.2 試劑

TSA、TSB購自上海生工生物工程股份有限公司，按說明書制備培養基；生化鑒定試劑購自杭州天河微生物有限公司；豬鏈球菌2型高免血清由長江大學動物科學院制備并保存[4]。

1.3 試驗動物

試驗豬選取90日齡、體重25 kg左右的同窩恩施黑豬，購自恩施咸豐尖山鄉某農戶。

選擇豬群采食量正常，試驗前用滅菌拭子采集鼻腔、扁桃體樣本檢測SS2為陰性，同時對頸靜脈采血，用ELISA方法檢測其SS2抗體均為陰性。

1.4 菌種的復蘇與菌液的制備

室溫下解凍菌種，在無菌條件下，用接種環挑取少許菌種，以分區劃線法接種在TSA平板上，37 ℃恒溫培養24 h。眼觀復蘇菌種在TSA平板上的菌落大小、邊緣整齊度、濕潤度、隆起度、表面光滑度、顏色等。挑選單個可疑菌落作標記后，挑取少許按常規方法進行革蘭氏染色，觀察革蘭氏染色后細菌在顯微鏡下的狀態。取鏡檢后確認的細菌按常規方法接種于TSA平板中，37 ℃恒溫培養24 h備用。挑取單菌落接種THB培養基中，37 ℃培養18 h。各菌平板法計數后，調整菌液濃度至1×109 CFU/mL，備用。

1.5 試驗豬的感染與臨床觀察

本試驗分A、B兩個組，A組為6頭恩施黑豬，B組為2頭恩施黑豬。試驗前將A、B兩組分別飼養在獨立的欄中，預試期7 d。攻毒試驗前測量每頭豬的體溫。

取“1.4”中制備好的菌液，對A組豬采用頸部肌肉注射，每頭注射6 mL，為試驗組。B組不注射為對照組。攻毒后，保障充足的飼料和飲水，每天觀察豬的臨床表現，如飲食情況、體溫變化、跛行和神經癥狀等。每4 h測量全部豬的直腸溫度。

1.6 試驗豬的病料采集與處理

死后立即解剖、拍照，無菌收集其肝臟、脾臟、心血、腦脊液、胃大小彎水腫液、腸淋巴結等，分別放入液氮罐和甲醛中固定，觀察記錄病死豬的病理學變化。對未死的試驗豬50 h后進行人工處死，記錄各器官的病理變化，進行細菌涂片、染色及鏡檢，并在TSA平板上劃線分離培養。

1.7 病料細菌培養計數

尸體剖檢取實質器官，淋巴結、肝、脾、肺、腎稱重后按10 mL/g加滅菌生理鹽水，充分研磨，倍比稀釋至10-8、10-9、10-10、10-11、10-12、10-13稀釋度。每個稀釋度取10 μL涂布法接種3個TSA平板，37 ℃恒溫箱培養24 h，檢驗平板。

1.8 免疫器官的病理學觀察

將試驗豬主要病變組織按常規技術進行細胞病理學及組織病理學檢驗，并記錄結果。

2 結果與分析

2.1 臨床癥狀

對照組的豬飲食、體溫等均正常，無明顯的臨床癥狀。試驗組的豬接種豬鏈球菌2型菌液均出現臨床癥狀和病理變化，接種3 h后出現了如扎堆、精神委頓、食欲不振或廢食、結膜潮紅、樹枝狀充血，流淚，可見黏液樣鼻涕流出。仔細觀察黑豬的皮膚色澤，可見頸部、耳廓、腹下及四肢下端皮膚發紺，有出血點，整個試驗過程豬喜臥，皮膚肌肉顫抖，糞便干燥，便秘且個別糞便夾血，有個別豬拉稀。病情嚴重的臨死前出現共濟失調、角弓反張等神經癥狀。其中有兩頭豬在接種后35～48 h內死亡。攻毒后體溫上升。

2.2 病理變化

對照組進行剖檢，眼觀和顯微鏡下觀察組織切片均為正常組織狀態，無病變。

對試驗組已經死亡的豬及瀕死期處死的病豬進行剖檢，病變主要表現為敗血癥癥狀（圖1），病豬腹部皮下有出血點，血液凝固不良；腎臟有點狀出血點，被膜難剝離，腎皮質彌散性出血；肝臟腫大，表面有出血點，質度變脆；肺臟水腫，淤血；全身淋巴結腫大、出血，尤其頜下淋巴結、腹股溝淋巴結和腸系膜淋巴結表現最為明顯；心臟內膜有出血點，心肌質地變軟；脾臟腫大、出血；扁桃體腫大，有出血點；胃內膜出血。endprint

2.2.1 心臟病變 試驗組豬心肌組織結構破壞，閏盤消失；心肌細胞顆粒變性，腫大，胞漿中見大量紅色蛋白性顆粒（圖2）；心肌細胞水泡變性，腫脹、淡染，有的細胞呈空泡狀。對照組豬心肌結構清晰（圖3）。

2.2.2 肝臟病變 試驗組豬肝小葉結構被破壞，索狀結構消失，肝竇擴張，充滿紅細胞和其他血細胞（圖4）；細胞核凝固溶解，肝細胞腫脹，出現空泡樣變性，中央靜脈發生淤血。對照組豬肝細胞索明顯可見。

2.2.3 脾臟病變 試驗組豬脾臟可見大面積出血，紅白髓混亂，脾小結不明顯，嗜中性粒細胞浸潤，淋巴細胞減少；壞死性脾炎，出血壞死部分細胞脫落。

2.2.4 肺臟病變 試驗組豬肺臟可見間質性肺炎，肺泡隔充血、水腫，炎性細胞浸潤，間隔明顯增寬，肺泡縮小；有的在肺泡間質可見大量纖維素滲出物和少量中性炎性粒細胞，脫落的肺泡上皮細胞。對照組豬肺泡壁薄、肺泡腔內沒有黏液等異物。

2.2.5 腎臟病變 試驗組豬腎小球體積腫大，充滿整個腎小囊；腎小管上皮細胞腫脹、出血（圖5），管壁增厚，局部腎小管上皮細胞開始脫落。對照組豬腎小球、腎小管清晰可辨，未見異常。

2.3 細菌分離鏡檢

取實質器官淋巴結、肝、脾、肺、腎病料培養的菌落進行細菌染色、鏡檢，病料中培養出了與攻毒株SS2形態特征完全相同的細菌菌落。

3 小結與討論

以鏈球菌2型對恩施黑致病性的臨床觀察和組織病理學觀察得出結論，豬鏈球菌2型對恩施黑豬具有很強的致病性。從試驗的組織病理學觀察結果可見，感染豬呈現多器官組織出血為主的急性敗血癥變化，特別是肺臟、淋巴結、脾臟和腎臟出血較為嚴重，此外也可見腦膜炎、心肌炎和關節炎等病變，這與崔立等[5]用SPF巴馬小型豬研究結果一致。本次試驗用豬鏈球菌2型菌株對恩施黑豬進行攻毒成功復制了該病，其臨床癥狀和病理變化已基本清楚，但由于豬鏈球菌的血清型多，致病性復雜多變，關于豬鏈球菌2型感染動物的致病機制雖有一些國內外學者做了一定的研究，但仍不完全清楚，還有待于繼續深入研究。

參考文獻：

[1] 鄭世軍，宋清明.現代動物傳染病學[M].北京：中國農業出版社，2013.316.

[2] TANG J，WANG C，FENG Y，et al. Streptococcal toxic shock syndrome caused by streptococcus suis serotype 2[J].PLoSM ed，2006，3（5）：151.

[3] 劉國平，梁雄燕，李江華，等.豬鏈球菌2型昆明鼠動物病理模型的建立[J].中國獸醫學報，2008，28（7）：795-798.

[4] 劉國平，胡利群，楊小林，等.豬鏈球菌2型高免血清的制備及臨床應用[J].黑龍江畜牧獸醫，2008（10）：86-88.

[5] 崔 立，朱建國，華修國，等.豬鏈球菌2型四川株與江蘇株對SPF豬的致病性[J].上海交通大學學報，2006，24（1）：54-57.endprint