復方降血脂丸質量標準研究

于士龍 ，張漢道 ，程 越 ，韓瑞貝 ，汪 宇

（1.中國人民解放軍第四六三醫院，遼寧 沈陽 110042； 2.中國人民解放軍沈陽軍區空軍七 五醫院，遼寧 沈陽 110040； 3.沈陽藥科大學，遼寧 沈陽 110046）

復方降血脂丸質量標準研究

于士龍1，張漢道2，程 越2，韓瑞貝3，汪 宇1

（1.中國人民解放軍第四六三醫院，遼寧 沈陽 110042； 2.中國人民解放軍沈陽軍區空軍七 五醫院，遼寧 沈陽 110040； 3.沈陽藥科大學，遼寧 沈陽 110046）

目的建立復方降血脂丸的質量標準。方法對方中丹參、決明子、何首烏、山楂等進行薄層色譜（TLC）鑒別；采用高效液相色譜（HPLC）法對方中君藥決明子所含藥效成分大黃酚進行含量測定。結果TLC法斑點顯色清晰，重復性、分離度均較好；大黃酚質量濃度在 1.91～122.28 g／mL 范圍內與峰面積線性關系良好，r＝0.999 6（n＝7）；平均加樣回收率為 108.01% ，RSD 為 1.16% （n＝6）。結論該研究中確立的定性、定量檢測方法簡便易行，重復性好，結果準確可靠，可用于復方降血脂丸的質量控制。

復方降血脂丸；丹參；決明子；何首烏；山楂；大黃酚；薄層色譜鑒別法；高效液相色譜法；含量測定；質量標準

復方降血脂丸為中國人民解放軍沈陽軍區空軍七○五醫院研制的院內制劑，由決明子、丹參、何首烏、山楂等中藥組方，具有清肝明目、滋陰降火、消食解郁功效，臨床主要用于降低血膽固醇、三酰甘油水平和降血壓。但該制劑的現有質量標準未對其質量進行有效控制，為加強制劑的質量控制，確保患者用藥安全有效，筆者對方中全部成分進行了薄層鑒別研究，最終選取了5種分離度高、重復性好的成分列入質量標準。此外還建立了君藥決明子中大黃酚含量的測定方法，作為本制劑的定量指標。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260型高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器（DAD），Chemstation工作站（安捷倫公司）；KX －1730型超聲清洗器（北京科璽超聲波清洗機有限公司，功率為 40 kHz）；MS105DU型電子分析天平（Mettler Toledo公司，精度為0.1 mg）；JA5003型電子分析天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司，精度為 0.01 mg）；EYELA N－2100型旋轉蒸發儀（日本東京理化株式會社）。

1.2 試藥

大黃酚對照品（批號為110773－201313）、山楂對照藥材（批號為120947－201210）、決明子對照藥材（批號為 120945－201206）、何首烏對照藥材（批號為120925－201107）、丹參對照藥材（批號為 121204－201302）均購自中國食品藥品檢定研究院；復方降血脂丸（水丸，中國人民解放軍沈陽軍區空軍七○五醫院自制，批號分別為 20160901，20160915，20161012）；乙腈、磷酸為色譜純（國藥試劑），水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 何首烏[1－2]

取復方降血脂丸5 g，粉碎后加入50 mL乙醇，超聲提取60 min，過濾后水浴濃縮至3 mL，作為供試品溶液。另取何首烏對照藥材2 g，粉碎后加20 mL乙醇，同法制得對照藥材溶液。按制劑各成分比例取除何首烏藥材飲片外的其余藥材共5 g，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。取以上3種溶液各20 μL，點于硅膠H薄層板上，分別以二氯甲烷－甲醇（15∶3和20∶1）為展開劑展開，展距分別為3.5 cm和7 cm，在365 nm波長紫外光燈下檢視。供試品溶液色譜中，與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同熒光斑點，陰性對照無干擾。詳見圖1。

圖1 何首烏薄層色譜圖

2.1.2 決明子[3－4]

取復方降血脂丸5 g，粉碎后加入30 mL正己烷，超聲提取30 min，過濾后水浴濃縮至3 mL，作為供試品溶液。另取決明子對照藥材粉末2 g，加15 mL正己烷超聲提取30 min，同法制得對照藥材溶液。另取何首烏的陰性對照藥材、決明子陰性藥材和決明子、何首烏雙陰性對照藥材各5 g，分別加30 mL正己烷超聲提取30 min，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。將上述5種溶液各取20 μL，點于硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯 －甲酸（10∶1∶1）為展開劑的有機相展開，在365 nm波長紫外光燈下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同熒光斑點，陰性對照無干擾。詳見圖2。

2.1.3 山楂[5－7]

取復方降血脂丸5 g，加入20 mL無水乙醇，超聲提取30 min，過濾后有機相水浴蒸干，殘渣用1 mL無水乙醇溶解，作為供試品溶液。另取山楂藥材粉末2 g，按供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液。按制劑各成分比例取除山楂藥材飲片外的其余藥材共5 g，同法制成陰性對照品溶液。取上述3種溶液各20 μL點于硅膠G薄層板上，以甲苯 －乙酸乙酯－甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，取出并揮干溶劑后噴以硫酸乙醇（10%）顯色劑，加熱顯色。分別在365 nm波長紫外光燈和日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上相同熒光斑點，陰性對照無干擾。詳見圖3。

圖2 決明子薄層色譜圖

圖3 山楂薄層色譜圖

2.1.4 丹參[8－9]

取復方降血脂丸5 g，粉碎后加入70%乙醇30 mL，超聲提取30 min，過濾并水浴蒸干，殘渣加入15 mL水并用稀鹽酸調pH至2，水相用乙酸乙酯振蕩萃取（3次，每次15 mL），有機相水浴蒸干，殘渣用1 mL無水乙醇溶解，作為供試品溶液。取丹參藥材粉末2 g，按供試品溶液制備方法制得對照藥材溶液。按制劑各成分比例取除丹參藥材飲片外的其余藥材共5 g，同法制得陰性對照品溶液。取上述3種溶液各20 μL點于硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（8∶10∶1）為展開劑展開，取出并揮干溶劑后，用3%三氯化鐵乙醇溶液顯色。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同熒光斑點，陰性對照無干擾。詳見圖4。

2.2 大黃酚含量測定[9－10]

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 －1 mL ／L 磷酸溶液（72 ∶28）；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL ／min。

圖4 丹參薄層色譜圖

2.2.2 溶液制備

對照品溶液：取大黃酚對照品約2.5 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混勻，即得大黃酚對照品溶液（244.56 μg ／mL）。

供試品溶液：取本品丸劑（批號為20160901）1.5 g粉碎，精密稱定，置茄型瓶中，加入50 mL甲醇，稱定總質量，將茄型瓶于70℃下加熱回流2 h，室溫冷卻，用甲醇補足減失的質量，搖勻后過濾，取25 mL濾液，30℃下減壓濃縮至干，向瓶中加入30 mL稀鹽酸，并于100℃加熱回流1 h，冷卻，向瓶中加入30 mL氯仿，于80℃加熱提取30 min，冷卻后分液，水相用氯仿萃取（每次30 mL，共4次），合并有機相并減壓濃縮至干，殘渣加甲醇溶解并定容至10 mL容量瓶中，即得。

陰性對照品溶液：取復方降血脂丸處方中缺決明子的其他藥材，按本制劑的制法制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗：取 2.2.2 項下 3 種溶液各 10 μL，注入液相色譜儀，色譜圖見圖5。結果供試品溶液在與對照品溶液相同保留時間（21 min）處，有相應的色譜峰出現，而陰性對照品溶液無此色譜峰出現，陰性對照無干擾。

線性關系考察：按對照品溶液制備方法制得對照品貯備液（244.56 μg ／mL），精密量取 2.5 mL，置 5 mL 容量瓶中定容，制得標準溶液1；精密量取2.5 mL標準溶液1，置5 mL容量瓶中定容，制得標準溶液2；以此類推，同法制得標準溶液 3，4，5，6，7。標準溶液質量濃度依 次 為 122.28，61.14，30.57，15.29，7.64，3.82，1.91 μg ／mL。分別取各標準溶液 10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標、質量濃度（X）為橫坐標建立線性回歸方程，得 Y＝38 076 X ＋74.16，r＝0.999 6（n＝7）。結果表明，大黃酚質量濃度在 1.91 ～122.28 μg／mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

圖5 大黃酚含量測定高效液相色譜圖

精密度試驗：精密吸取2.2.2項下同一對照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件連續進樣 6次，測定。結果的RSD為0.17%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取復方降血脂丸樣品，依法制備供試品溶液，室溫下于 0，1，2，6，12，24 h 時進樣 4 次，記錄色譜圖，計算大黃酚峰面積。結果的 RSD為 1.50%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下24 h內穩定性較好。

重復性試驗：取批號為20160915的復方降血脂丸樣品 5份，每份約 1.5 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制成5份樣品溶液，濾過，分別精密吸取濾液10 μL，測定大黃酚含量。結果的 RSD 為 0.46%（n ＝5），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：精密量取質量濃度為 7.7 μg／mL的樣品5 mL，共6份，置10 mL容量瓶中，分別加入質量濃度為 30.57 μg／mL 的大黃酚對照品溶液 1 mL，用甲醇定容至10 mL，制成供試品溶液，各精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 大黃酚加樣回收試驗結果（n＝6）

2.2.4 樣品含量測定

取 3批樣品各 1.5 g，精密稱定，按 2.2.2項下方法制備供試品溶液，進樣測定。結果批號為20160901，20160915，20161012的樣品中大黃酚的含量依次為8.28，7.05，8.90 μg ／g。

3 討論

高脂血癥因體內脂質代謝紊亂引起，可直接引起一些嚴重危害人體健康的疾病。傳統中醫認為，高脂血癥屬于中醫“污血”病范疇。污血者，不潔之血，乃飲食水谷之濁氣、水谷不化之痰濕、癖滯不通之血液結于脈中而成[11－12]。

復方降血脂丸為純中藥制劑，由決明子等4味藥材組方。現代研究顯示，蒽醌類化合物是決明子的主要成分之一，此類成分能有效抑制腸道吸收膽固醇，增加其排泄，并通過反饋調節低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）代謝的方式，達到降低血清膽固醇水平的目的[13－14]。故本研究中選擇決明子中的蒽醌類成分大黃酚作為定量檢測指標，以實現對本制劑的質量控制。此外，方中何首烏也含有蒽醌類成分，按常規方法進行鑒別，陰性對照干擾較嚴重。因此，參考文獻[15]及藥典所載清腦降壓片中決明子的鑒別方法，采用雙陰性對照的方法進行鑒別，在有效排除何首烏干擾的同時，可同時鑒別何首烏和決明子2味藥材，大大提高了效率。

在鑒別丹參的過程中，首先參照2015年版《中國藥典(一部)》，對其中的丹參酮ⅡA進行鑒別，但由于丹參酮ⅡA穩定性較差，在加熱提取過程中會造成分解損耗，導致鑒別結果重復性較差。因此參考文獻[8]選用丹參中另一成分原兒茶醛進行特征鑒別，通過調整展開劑比例，鑒別結果符合要求。

綜上所述，本研究中對中藥復方降血脂丸處方中4種成分（決明子、丹參、何首烏和山楂）進行了定性鑒別，同時采用高效液相色譜（HPLC）法對君藥決明子中的大黃酚進行了定量分析，操作簡便、快速，檢測結果符合要求，結合原有質量標準可更好地實現對復方降血脂丸的質量控制。

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Quality Standard of Fufang Jiangxuezhi Pills

Yu Shilong1， Zhang Handao2， Cheng Yue2， Han Ruibei3， Wang Yu1
（ 1.Hospital 463 of PLA， Shenyang， Liaoning， China 110042； 2.No.705 Hospital of Shenyang Military Area Air Force Command of PLA， Shenyang，Liaoning，China 110040； 3.Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang， Liaoning，China 110046）

Objective To establish the quality standard of Fufang Jiangxuezhi Pills.Methods TLC method was adopted for the qualitative identification of Salvia miltiorrhizae， Catsia tora， Fallopia multiflora and Crataegus pinnatifida.HPLC method was adopted to determine chrysophanolin Catsia tora.Results TLC spotswere clearwith good reproducibility and separation.The linearrelationship of chrysophanol content was good in the range of 1.91 － 122.28 μg ／mL， r＝ 0.999 6(n ＝ 7），the average recovery was 108.01% ，and the RSD was 1.16% （n ＝ 6）.Conclusion The qualitative and quantitative method is simple，accurate and reliable，which can be used for quality control of Fufang Jiangxuezhi Pills.

Fufang Jiangxuezhi Pills；Salvia miltiorrhizae； Catsia tora； Fallopia multiflora； Crataegus pinnatifida；chrysophanol；TLC；HPLC；content determination；quality standard

R284.1；R285.5

A

1006－4931(2017)20－0025－04

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.007

于士龍，男，滿族，碩士研究生，主管藥師，研究方向為藥物分析，（電話）024－28845262（電子信箱）264305216＠qq.com。

汪宇，女，漢族，博士研究生，主任藥師，研究方向為藥學，（電話）024 － 28845259（電子信箱）ysl.ufo＠ qq.com。

2017－05－10；

2017－06－28)