高效液相色譜法測定玄參百貝散中哈巴俄苷含量

封海霞

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121）

高效液相色譜法測定玄參百貝散中哈巴俄苷含量

封海霞

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶 401121）

目的建立測定玄參百貝散中哈巴俄苷含量的高效液相色譜法。方法采用伊利特Hypersil ODS2－C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動相為乙腈（A）－0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脫，流速為1 mL／min，檢測波長為280 nm，柱溫為30℃，理論板數按哈巴俄苷峰計算應不低于5 000。結果哈巴俄苷質量濃度在 23.14～138.80 g／mL范圍內與峰面積線性關系良好，回歸方程為 Y＝32 470 X ＋120 163，r＝0.999 2(n＝5)，平均回收率為 97.92% ，RSD ＝2.01% （n＝6）。結論該方法簡便、快速、重復性好、專屬性強，可為制訂玄參百貝散質量標準和有效控制其內在質量提供技術參考。

玄參百貝散；哈巴俄苷；高效液相色譜法；含量測定

玄參百貝散是在編輯《長江三峽天然藥用植物志》時收集民間名醫處方過程中獲得的藥方[1]，為下川東地區名老中醫治療慢性喉痹的經驗方。中醫學認為，慢性喉痹多因外邪侵犯，邪久滯不去，臟腑虧損，耗傷陰液，虛火上炎于咽喉所致，病因病機主要為陰虛，以致津液不能上布咽喉，咽喉失于濡養。該散劑由玄參、麥冬、百合、桔梗、浙貝母、甘草等10味中藥組方，民間將這些中藥制成散劑治療慢性喉痹，療效良好。為有效控制其內在質量，確保臨床療效穩定可靠，筆者采用高效液相色譜法對其中滋陰降火的成分玄參所含哈巴俄苷的含量進行了測定[2－6]，為進一步制成醫院制劑提供依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC－20A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；CP224S型分析天平（Sartorius公司）、SD3200型超聲波清洗器、CS203B型電熱干燥箱（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

哈巴俄苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為 111730－200605）； 樣 品 （ 批 號 為 20170610，20170612，20170614，自制）；乙腈為色譜純；水為超純水；磷酸、甲醇及其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Hypersil ODS2－C18柱（伊利特公司，250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相 A 為乙腈，流動相 B為 0.05%磷酸水溶液，按表 1進行梯度洗脫；流速：1 mL／min；檢測波長：280 nm。在此條件下，理論板數按哈巴俄苷計算均應不低于5 000。色譜圖見圖1。

表1 流動相梯度洗脫表

2.2 溶液制備

對照品溶液：稱取經五氧化二磷容器中干燥（室溫放置24 h）至恒重的哈巴俄苷10.8 mg，精密稱定，加入30%甲醇定容至 100 mL，制成每 1 mL含 0.108 mg的溶液，即得。

供試品溶液：將供試品研磨成粉末（過3號篩），稱取7 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，浸泡1h，超聲處理（功率為500 W，頻率為40 kHz）50 min，放冷，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，過微孔濾膜，取續濾液，即得。

陰性對照品溶液：取不含玄參的陰性樣品研磨成粉末（過3號篩），稱取6 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，密塞，稱定質量，浸泡1 h，超聲處理（功率為 500 W，頻率為 40 kHz）50 min，放冷，再稱定質量，用50%甲醇補足減失的質量，搖勻，過微孔濾膜，取續濾液，即得。

圖1 哈巴俄苷含量測定高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察：取經五氧化二磷容器中干燥（室溫放置 24 h）至恒重的對照品哈巴俄苷 2.7 mg，精密稱定，用50%甲醇定容至25 mL容量瓶中，配成質量濃度為 138.80 μg／mL 的對照品貯備液，吸取該貯備液，用50% 甲 醇 稀 釋 成 質 量 濃 度 為 69.40，46.27，27.76，23.14 μg／mL 的系列標準溶液，分別測定峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標、對照品溶液的質量濃度（X，μg／mL）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y＝32 470 X＋120 163，r＝0.999 2(n＝5)。結果表明，哈巴俄苷質量濃度在 23.14 ～138.80 μg／mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密量取哈巴俄苷對照品溶液（每1 mL含哈巴俄苷 138.8 μg），按 2.1 項下色譜條件，分次進樣20 μL，共5次，記錄峰面積值。結果峰面積平均值為1 681 348，RSD ＝2.67%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗：精密稱取本品（批號為 20170610）5份，每份1 g，依法制備供試品溶液，按色譜條件進樣，依法測定哈巴俄苷的含量。結果的 RSD＝0.12%(n＝5)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：分別精密稱取已知含量的樣品0.5 g，置錐形瓶中，各精密加入哈巴俄苷對照品0.15 mg，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣，計算回收率。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果(n＝6)

穩定性試驗：精密稱取同一批（批號為20170610）供試品，共6份，每份1 g，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件，每隔2 h進樣20 μL，測定哈巴俄苷含量。結果的RSD為0.29%(n＝6)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.4 樣品含量測定

精密稱取不同批次的樣品1.0 g，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣，測定哈巴俄苷含量。結果見表 3。制劑中哈巴俄苷平均含量為 0.366 4 mg／g，根據通用含量限度確定方法（±15%），確定本品的含量限度不得低于 0.311 4 mg ／g。

表3 樣品含量測定結果（mg／g）

3 討論

根據處方所含成分的特性和成分之間的相互影響，選擇處方中滋陰降火的君藥玄參中的有效成分哈巴俄苷作為控制產品質量的指標。方法學考察結果表明，陰性對照無干擾，目標色譜峰與相鄰峰達到基線分離。通過試驗確定了線性回歸方程，考察了精密度、穩定性、重復性、加樣回收率等，結果表明，所建立的含量測定方法符合定量分析的要求。

本研究中對處方中作為臣藥、佐藥和使藥的麥冬[7]、百合[8－9]、桔梗[10－11]、何首烏[12－13]、浙貝母[14－15]、甘草[16－17]等所含的主要化學成分亦進行了初步的含量測定研究，但重復性欠佳。應進一步對處方中非君藥所含成分進行分析，為制訂玄參百貝散質量標準，更好地控制產品質量，開發為具有重慶地方特色的醫院自制制劑提供技術支撐。

[1]陳紹成，譚 君，戴傳云.長江三峽天然藥用植物志[M].重慶：重慶大學出版社，2017：553 －597.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015：117.

[3]胡瑛瑛，黃 真.玄參的化學成分及藥理作用研究進展[J].浙江中醫藥大學學報，2008，32（2）：268 － 270.

[4]師 怡，許 暉，闕慧卿，等.玄參化學成分的藥理作用和分析方法[J].海峽藥學，2006，18（4）：58 －61.

[5]謝小艷，夏春森.中藥玄參的化學成分及藥理研究進展[J].亞太傳統醫藥，2010，6（5）：121 － 124.

[7]陳 屏，徐東銘，雷 軍.麥冬化學成分及藥理作用的研究現狀[J].長春中醫學院學報，2004，20（1）：35 － 36.

[8]曲偉紅，周日寶，童巧珍，等.百合的化學成分研究概況[J].湖南中醫藥導報，2004，10（3）：75 － 76.

[9]楊林莎，孫艷紅，方曉艷.中藥百合的研究進展[J].河南中醫藥學刊，2002，17（1）：74 －76.

[10]劉振華，梁 波，田景奎.桔梗屬植物的化學和藥理學研究進展[J].亞太傳統醫藥，2006，2（7）：59 － 63.

[11]金在久.桔梗的化學成分及藥理和臨床研究進展[J].時珍國醫國藥，2007，18（2）：506 － 509.

[12]管淑玉，蘇薇薇.何首烏的化學成分和藥理作用研究進展[J].中南藥學，2008，6（4）：454 －455.

[13]高淑紅，蘇珍枝，肖學鳳.制首烏化學成分及藥理作用研究進展[J].山西中醫學院學報，2012，13（2）：74 － 77.

[14]張明發，沈雅琴.浙貝母藥理研究進展[J].上海醫藥，2007，28（10）：459 － 461.

[16]劉清華.甘草的化學成分和藥理作用的概述[J].中國中醫藥現代遠程教育，2011，9（13）：84.

[17]孫 鵬 .甘草化學成分研究[J].中國醫藥指南，2010，8（30）：226 － 227.

Content Determination of Harpagoside in Xuanshen Baibei Powder by HPLC

Feng Haixia
（ Chongqing Institute of Food and Drug Control， Chongqing， China 401121）

Objective To establish an HPLC method for content determination of habazoside in Xuanshen Baibei Powder.Methods Hypersil ODS2－ C18column （250 mm× 4.6 mm，5 μm），the flow phase was acetonitrile （A） － 0.05% phosphate （B） for the flow phase gradient elution，the flow rate was 1 mL／min，the detection wavelength was 280 nm，the column temperature was 30 ℃.The number of theoretical plates should be no less than 5 000 according to the calculation of habbucoside.Results The quality concentration of habbucoside was good in the linear range of 23.14 －138.80 μg／mL，the regression equation wasY＝32 470 X＋ 120 163， r＝ 0.999 2（n ＝5），the average recovery rate was 97.92% ，RSD＝2.01% （n ＝6）.Conclusion The method is simple，rapid，reproducible and specific，which can provide technical reference for formulating the quality standard and effective quality control of Xuanshen Baibei Powder.

Xuanshen Baibei Powder；habazoside；HPLC；content determination

R284.2；R289.5

A

1006－4931(2017)20－0041－03

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.011

封海霞(1978－)，女，大學本科，主管中藥師，研究方向為中藥質量標準，(電子信箱)searayf＠163.com。

2017－07－16)