高效液相色譜法測定黃連上清膠囊中連翹苷含量

周憶新，鐘水生

（江蘇省蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測研究中心，江蘇 蘇州 215000）

高效液相色譜法測定黃連上清膠囊中連翹苷含量

周憶新，鐘水生

（江蘇省蘇州市藥品檢驗(yàn)檢測研究中心，江蘇 蘇州 215000）

目的建立測定黃連上清膠囊中連翹苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Boston C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為乙腈 －水 －冰醋酸（25∶75∶1），流速為 1.0 mL／min，檢測波長為270 nm。結(jié)果連翹苷進(jìn)樣量在 0.723 0～7.230 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好（r＝0.999 9），平均回收率為99.34%，RSD為1.16%（n＝6）。結(jié)論該方法簡便、快速、重復(fù)性好，可用作黃連上清膠囊的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；黃連上清膠囊；連翹苷；質(zhì)量控制

黃連上清膠囊為復(fù)方中成藥，其配方起源于黃連上清丸[1]，由大黃、連翹、菊花等17味中藥組方，功效為清熱瀉火、散風(fēng)止痛[2]。據(jù)報(bào)道，黃連上清軟膠囊可以治療牙周炎、玫瑰糠疹，且毒副作用小、療效好[3－5]。連翹是其主要成分之一，連翹苷是連翹的有效成分[6]。本研究中通過高效液相色譜法測定連翹苷含量，進(jìn)一步對黃連上清膠囊進(jìn)行質(zhì)量控制?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

e2695型高效液相色譜儀（美國 Waters公司）；XS105DU型Mettler Toledo電子天平（梅特勒托利多儀器公司）。

1.2 試藥

連翹苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，含量為96.8%，批號(hào)為 201112）；黃連上清膠囊（市售，批號(hào)分別為 20150104，20150402，20151002）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Boston C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈 －水 －冰醋酸（25∶75∶1）；檢測波長：270 nm；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL ／min；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，理論板數(shù)按連翹苷峰計(jì)算可達(dá)10 000以上。

2.2 溶液制備

對照品溶液：稱取連翹苷對照品 7.23 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，稀釋至刻度，得每1 mL含0.144 6 mg的溶液，即得。

供試品溶液：在室溫條件下，取本品20粒（約8 g），置研缽中研細(xì)，精密稱取樣品，精密稱定，置具塞錐形瓶中，再精密量取甲醇50 mL，置錐形瓶中，稱定質(zhì)量，浸漬過夜，每隔5～10 min超聲處理樣品，共60 min，稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，溶液過濾，精密吸取續(xù)濾液5 mL，置沸騰水浴鍋上，蒸發(fā)至近干時(shí)，加0.5 g氧化鋁攪拌均勻，轉(zhuǎn)移至中性氧化鋁柱（100～120目，1 g，內(nèi)徑1 cm），70%乙醇100 mL洗脫，收集續(xù)濾液，至水浴蒸干，加50%甲醇溶解，再轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照品溶液：取按樣品制備工藝制備的缺連翹陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，進(jìn)樣測定。結(jié)果陰性對照品溶液在對照品溶液及供試品溶液色譜相應(yīng)位置處無連翹苷峰出現(xiàn)，表明陰性對照無干擾，專屬性良好。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察：精密吸取2.2項(xiàng)下對照品溶液5，10，20，30，50 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定峰面積。以對照品溶液的峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y＝920 76 X－630 16，r＝0.999 9（n＝5）。結(jié)果表明，連翹苷進(jìn)樣量在0.723 0 ～ 7.230 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果連翹苷峰面積的 RSD為0.27%（n＝5），表明儀器精密度良好。

圖1 黃連上清膠囊高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于12 h內(nèi)每隔2 h進(jìn)樣1次，共檢測6次。結(jié)果連翹苷含量的 RSD為0.38%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批(批號(hào)為2150104)樣品5份，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果連翹苷平均含量為 69.92 μg／g，RSD ＝1.07% （n ＝ 5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取6份已知含量的樣品（批號(hào)為 20150104）約 4 g，分別加入連翹苷對照品溶液1.5，2.0，2.5 mL，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測定

取黃連上清膠囊3批，依法檢測。結(jié)果批號(hào)為20150104，20150402，20151002的3批樣品中連翹苷含量分別為 69.68，72.31，70.75 μg ／g。

3 討論

黃連上清膠囊成分多達(dá)17種，提取分離較困難。本試驗(yàn)中參考相關(guān)文獻(xiàn)及資料，嘗試了 Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），Galaksil EF － C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），Boston C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm），Intersil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）等品牌的色譜柱，發(fā)現(xiàn)Boston C18柱分離效果最好，穩(wěn)定性強(qiáng)，基線和柱效明顯優(yōu)于另外幾根柱子，符合連翹苷的含量測定要求。

黃連上清膠囊組分比較多，試驗(yàn)中曾嘗試中藥常用提取方法，如超聲處理、加熱回流等方法，但效果不太好，故采用孟建生等[7]選取的提取方法?；诖耍梢运伎寄芊駥S連上清膠囊的含量測定采用一測多評(píng)的方法，同時(shí)測定黃芩苷、連翹苷、梔子苷的含量，以黃芩苷為內(nèi)參物[8]。許多試驗(yàn)結(jié)果可與本試驗(yàn)比較，以相互印證結(jié)果，這是本試驗(yàn)帶給黃連上清膠囊有效成分測定的最大啟發(fā)，也是下一步深入研究的方向。

[1]田 軍，蔣珠芬，孫 備，等.黃連上清膠囊的臨床研究[J].中藥藥理與臨床，1999，15（3）：41 － 42.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：1475－1476.

[3]田 軍，蔣珠芬，楊士友.黃連上清膠囊藥理作用的研究[J].中藥藥理與臨床，1998，14（2）：9 － 11.

[4]趙春暉，張 黎，江崇英，等.黃連上清軟膠囊治療上焦風(fēng)熱證（牙周炎）的臨床分析[J].齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，28（6）：648 － 650.

[5]鄭優(yōu)成.黃連上清膠囊治療玫瑰糠疹的療效觀察[J].安徽醫(yī)藥，2010，14（4）：455 － 456.

[6]李 雙，王東強(qiáng)，李志軍.連翹主要有效成分的提取與藥理作用[J].黑龍江中醫(yī)藥，2011，40（2）：46 － 47.

[7]孟建生，何 波，蔣建春.高效液相色譜法測定黃連上清片中梔子苷的含量[J].中國藥業(yè)，2013，22（21）：30 － 31.

[8]張振巍，張娜娜，白丹丹.一測多評(píng)法測定清熱解毒口服液中 4 種成分的含量 [J].中國藥房，2013，24（28）：2676－2678.

Content Determination of Phillyrin in Huanglianshangqing Capsule by HPLC

Zhou Yixin，Zhong Shuisheng
（Suzhou Institute for Drug Control，Suzhou，Jiangsu，China 215000）

Objective To establish an HPLC method for content determination of phillyrin in Huanglianshangqing Capsule.Methods The Boston C18column （250 mm ×4.6 mm，5 μm） was adopted with the mobile phase of acetonitrile－ water－glacial acetic acid（25 ∶75 ∶1）， the flow rate was 1.0 mL ／min，the detection wavelength was 270 nm.Results Phillyrin showed the linear relationship within the range of 0.7230 －7.230 μg（r＝ 0.999 9），and the average recovery was 99.34% ， RSD ＝1.16% （n ＝ 6）.Conclusion The method is simple，rapid and accurate，which can be used for the quality control of Huanglianshangqing Capsule.

HPLC；Huanglianshangqing Capsule；phillyrin；quality control

R284.1

A

1006－4931(2017)20－0044－02

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.012

2017－07－10)