結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗在結(jié)核性胸膜炎診斷中的應(yīng)用與研究

●鄒曉穎 王柏欣

結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗在結(jié)核性胸膜炎診斷中的應(yīng)用與研究

●鄒曉穎 王柏欣

目的：探討結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗（T-SPOT.TB）在結(jié)核性胸膜炎診斷中的臨床應(yīng)用價值。方法：選取牡丹江市康安醫(yī)院診治的胸腔積液患者45例，根據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)分為結(jié)核性胸膜炎組（A組）與惡性胸腔積液組（B組），所有患者在入院后均行外周血T-SPOT.TB試驗、胸水腺苷脫氨酶（ADA）檢測及胸水結(jié)核桿菌培養(yǎng)，進而分別對三個不同檢驗方法的檢驗指標(biāo)進行評價。結(jié)果：經(jīng)臨床診斷：A組34例、B組11例。外周血T-SPOT.TB試驗、胸水ADA檢測、胸水結(jié)核桿菌培養(yǎng)的敏感性分別是91.1%、64.7%%、14.7%，特異性分別是：90.9%、27.3%、100%。外周血T-SPOT.TB試驗的敏感性高于胸水ADA的敏感性（P＜0.05），且高于胸水結(jié)核菌培養(yǎng)的敏感性（P＜0.05）。外周血T-SPOT.TB試驗的特異性高于胸水ADA的特異性（P＜0.05），但與胸水結(jié)核菌培養(yǎng)的特異性無明顯區(qū)別（P＞0.05）。結(jié)論：外周血T-SPOT.TB試驗可作為臨床診斷結(jié)核性胸膜炎的有效方法。

結(jié)核感染T細(xì)胞斑點試驗；結(jié)核性胸膜炎；診斷；療效

結(jié)核病作為發(fā)病率和死亡率最高的傳染病之一，在我國，約30%人口感染過結(jié)核分枝桿菌，而這其中約15%的人口將會發(fā)展為結(jié)核病。近年來，佳木斯市的結(jié)核桿菌感染率呈上升趨勢[1]。結(jié)核性胸膜炎、胸腔惡性腫瘤、胸膜腔感染均可形成胸腔積液，在我國，結(jié)核性胸腔積液可占到滲出性胸腔積液的50.0%-53.5%[2]。結(jié)核性胸膜炎作為最常見的肺外結(jié)核病[3-4]，其診斷需要根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)、胸腔積液的生化檢查，必要時還要行胸膜活檢等有創(chuàng)檢查進行綜合判斷。傳統(tǒng)的檢驗手段（如結(jié)核菌素試驗）的敏感性及特異性較低，胸腔積液結(jié)核菌培養(yǎng)時間長且陽性率低，對于合并肺結(jié)核的結(jié)核性胸膜炎患者，痰培養(yǎng)雖然也具有一定的診斷價值[5]，但這些方法均不能在臨床上做出快速的診斷。胸膜活檢作為結(jié)核性胸膜炎診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，大大提高了其確診率，但因其是有創(chuàng)檢查，并發(fā)癥較多，大多數(shù)患者難以接受，且陽性率僅為62.2%-69.7%[6-7]，因此不適合作為常規(guī)檢查。作為這一種新型結(jié)核菌感染的診斷手段，酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)（ELISPOT）已經(jīng)被世界衛(wèi)生組織列為結(jié)核菌感染的標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法，近年來，基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展有力地推動了臨床檢驗的水平，使其從細(xì)胞水平擴展到分子水平。

1 方法

1.1 研究對象

選取2014年3月至2016年3月牡丹江市康安醫(yī)院診治的胸腔積液患者45例，排除漏出液后(測胸水LDH與血LDH的比值，大于0.6則為滲出性胸腔積液)，按臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)分為結(jié)核性胸膜炎組(A組)和惡性胸腔積液組（B組），所有受試者均行外周血T-SPOT.TB試驗、胸水ADA檢驗及胸水中結(jié)核桿菌培養(yǎng)。對于A組進行抗結(jié)核治療12周后再次進行外周血T-SPOT.TB試驗。

1.2 分組方法

（1）A組診斷依據(jù)∶①有消瘦、地?zé)岬冉Y(jié)核菌中毒癥狀;②B超提示有胸腔積液；③胸水為滲出液（胸水中ADA≥45U/L）;④抗結(jié)核治療后可見胸腔積液吸收，且癥狀明顯好轉(zhuǎn);⑤胸水中癌細(xì)胞檢查陰性;⑥痰中結(jié)核分枝桿菌涂片陽性或胸膜活檢(如結(jié)核性肉芽腫等)明確診斷為結(jié)核病變;符合①一⑤或⑥[8-9]。

（2）B組診斷標(biāo)準(zhǔn)∶病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查診斷為惡性胸腔積液，末經(jīng)過治療，既往無結(jié)核病病史與接觸史，無活動性肺結(jié)核。

所選患者均無HIV感染。

1.3 試驗方法

（1）T-SPOT.TB試驗步驟∶采集4-6ml血液標(biāo)本（使用肝素鈉抗凝管），實驗室提取外周血單個核細(xì)胞并計數(shù);分別加入陽性對照孔（a孔），結(jié)核特異性抗原ESAT-6（b孔）和抗原CFP-10（c孔），空白對照孔（d孔）。放入37度恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)16-24 h。后加入酶和顯色劑，使得測試孔顯色產(chǎn)生斑點。根據(jù)斑點數(shù)判斷結(jié)果∶a孔＜5時，b孔、c孔、或d孔的斑點數(shù)≥6時為陽性;如不符合以上要求，且陽性孔未見異常則為陰性。

（2）胸腔積液中腺苷脫氨酶(ADA)檢測∶采用速率法檢測，采集5ml胸腔積液樣本,2000r/min離心10分鐘后，再上清液，應(yīng)用TBA-40FR生化分析儀進行分析，結(jié)果判斷∶當(dāng)ADA＞45U/L時為陽性，反之則為陰性。

（3）胸腔積液結(jié)核菌培養(yǎng)∶取5ml胸水于試管中進行消化處理，取0.5ml胸水，然后分別放入培養(yǎng)基內(nèi)進行培養(yǎng)，培養(yǎng)陽性者均以鑒別培養(yǎng)基對其菌種進行鑒別，將非結(jié)核菌排除。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，p＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

（1）A組34例患者均行外周血T-SPOT.TB試驗、胸水ADA檢測、胸水結(jié)核菌培養(yǎng)三種檢驗方法檢測，其結(jié)果如下∶在A組34例患者中，外周血T-SPOT.TB試驗∶陽性患者31例，陰性患者3例；胸水ADA檢測∶陽性患者22例，陰性患者12例；胸水結(jié)核菌培養(yǎng)∶陽性患者5例，陰性患者29例，對于A組患者，外周血T-SPOT.TB試驗的敏感性為91.1%（3134）,胸水ADA檢測的敏感性為64.7%（2234），胸水結(jié)核菌培養(yǎng)的敏感性為14.7%（534）。外周血T-SPOT.TB試驗與其他兩種檢驗方法的敏感性比較如表1。

表1 外周血T-SPOT.TB試驗與其他兩種檢驗方法敏感性比較

由表1可知∶外周血T-SPOT.TB試驗的敏感性高于胸水ADA（P＜0.05）；外周血T-SPOT.TB試驗的敏感性高于胸水結(jié)核菌培養(yǎng)（P＜0.05）。

（2）B組11例患者均行外周血T-SPOT.TB試驗、胸水ADA檢測、胸水結(jié)核菌培養(yǎng)三種檢驗方法檢測，其結(jié)果如下∶在A組11例患者中，外周血T-SPOT.TB試驗∶陽性患1例，陰性患者10例；胸水ADA檢測∶陽性患者8例，陰性患者3例；胸水結(jié)核菌培養(yǎng)∶陽性患者0例，陰性患者11例。對于B組患者外周血T-SPOT.TB試驗的特異性為90.9%（1011）;胸水ADA檢測的特異性為27.3%（311）；胸水結(jié)核菌培養(yǎng)的特異性為100%（1111），外周血T-SPOT.TB試驗與其他兩種檢驗方法的特異性比較如表2。

表2 外周血T-SPOT.TB試驗與其他兩種檢驗方法特異性比較

由表2可知∶外周血T-SPOT.TB試驗的特異性高于胸水ADA（P＜0.05）；外周血T-SPOT.TB試驗的特異性與胸水結(jié)核菌培養(yǎng)無明顯區(qū)別（P＞0.05）。

3 結(jié)論

T-SPOT.TB試驗是在2001年由Lalvani等人發(fā)明，并在4年后被美國食品藥品管理局視作結(jié)核菌感染的快速診斷方法，近來已經(jīng)在美國、歐洲等國家得到了一致認(rèn)可。T-SPOT.TB試驗原理基于以下2點∶(1)ESAT-6和CFP-10可刺激人體T淋巴細(xì)胞成為效應(yīng)T細(xì)胞，進而產(chǎn)生γ因子；(2)T-SPOT.TB檢測是由ELISPOT（一種新型的酶聯(lián)免疫技術(shù)）發(fā)展而來的，通過此項技術(shù)檢測產(chǎn)生γ干擾素的單個T細(xì)胞，進而判斷機體是否處于結(jié)核菌感染狀態(tài)。本實驗結(jié)果顯示，對于外周血T-SPOT.TB試驗，無論是斑點形成數(shù)目還是陽性率，A組均高于B組。

Lee等對45例胸腔積液患者(其中20例確診為結(jié)核性胸膜炎)的胸腔積液和外周血分別進行了T-SPOT.TB試驗，胸腔積液T-SPOT.TB試驗的敏感性、特異性分別為94.5%、80.7%，外周血T-SPOT.TB試驗的敏感性、特異性分別為78.8%、89.5%，本實驗的敏感性高于Lee等的研究結(jié)果，特異性與Lee等的研究結(jié)果相類似。Lois等認(rèn)為胸腔積液中的單核細(xì)胞比外周血中的單核細(xì)胞更加具有診斷價值，但外周血T-SPOT.TB試驗作為一種非創(chuàng)傷性檢驗手段，仍有其存在價值。

研究顯示，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞伴隨著結(jié)核菌存在或消失，因此檢查效應(yīng)T淋巴細(xì)胞也能判斷人體有沒有結(jié)核菌，進而進行治療效果評定。因本實驗實驗對象較少，希望將來有更多的實驗進一步支持。

綜上所述，對于外周血T-SPOT.TB試驗的優(yōu)點總結(jié)如下∶(1)體外試驗，非創(chuàng)傷性；（2）檢測快速，檢測全過程只需24一48h;(3)特異性高，不受卡介苗接種的影響，交叉反應(yīng)較少;(4)敏感性高，可以從100 0000個細(xì)胞因子分泌細(xì)胞中檢測出單個細(xì)胞。因此外周血T-SPOT.TB試驗在結(jié)核性胸膜炎的診斷中具有較高的臨床應(yīng)用價值。

（作者單位：佳木斯大學(xué)）

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鄒曉穎（1973～），女，在讀研究生。

王柏欣（1969～），男，佳木斯大學(xué)碩士研究生導(dǎo)師，副教授，碩士。