幾種HIV抗體檢測的方法學比較

韓 丹

（重慶市開州區(qū)婦幼保健院檢驗科，重慶 405499）

幾種HIV抗體檢測的方法學比較

韓 丹

（重慶市開州區(qū)婦幼保健院檢驗科，重慶 405499）

目的比較分析幾種艾滋病病毒（HIV）抗體檢測的方法學。方法選擇6種血清盤來評價三種類型HIV抗體檢測方法的診斷試劑的精密度、分析特異性、分析靈敏度、特異性和敏感性等指標。結果6種試劑評估基礎血清盤的特異性均大于97.5%，敏感性均為100.0%。結論快速診斷試劑和ELISA診斷試劑的特異性和敏感性較高，抗原抗體檢測試劑的敏感性相對較高，可以將其當成抗體篩查試劑。4種ELISA試劑的板內精密度存在較大差別。

艾滋病病毒；抗體檢測；方法學

在HIV檢測技術快速完善和更新的過程中，也有效縮短了HIV檢測的窗口期，提高了檢測結果的準確率[1]。現階段臨床中在進行HIV檢測時，常用的試劑包括酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、快速檢測試劑、蛋白印跡試驗（WB）、反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）等。我室為HIV初篩實驗室，常用的實驗方法為酶聯免疫吸附試驗（ELISA）和快速檢測，本研究主要比較分析幾種艾滋病病毒（HIV）抗體檢測的方法學，現做如下總結。

1 資料與方法

1.1 一般資料

①血清盤：1）10支美國病理學家協會的能力驗證血清盤，其中HIV抗體陽性共8支，HIV抗體陰性共2支。2）選擇美國SeraCare公司的10套商業(yè)陽轉血清盤。3）3支參比室精密度質控品組成的精密度血清盤，低、中、高3個HIV抗體滴度。4）經3組強陽性混合樣本倍比稀釋系列組成的線性稀釋系列血清盤。5）由10份HCV抗體陽性樣本、15份梅毒抗體陽性樣本和15份HBsAg抗體陽性樣本組成的干擾樣本血清盤。6）由40分陰性樣本和40份陽性樣本組成的基礎血清盤。

②試劑：試劑共包括3類，分別為酶聯免疫法、膠體金法/膠體硒法、重組免疫印跡法/蛋白印跡法。

1.2 方法

①評估方法：選擇基礎血清盤來對試劑的特異性和敏感性進行評估；在評估試劑分析特異性時，應通過干擾血清盤來完成；在評估試劑診斷線性范圍時，則通過線性稀釋系列血清來完成；在評估ELISA試劑的板內精密度時則通過精密度血清盤來完成，并將變異系數（CV%）當成評價指標；選擇商業(yè)陽轉血清盤來對試劑的分析靈敏度進行評估；選擇CAP能力驗證血清盤來進行質量控制。

②質量控制：嚴格根據試劑盒說明書來開展實驗操作，對結果進行判定。選擇國家參比實驗室所提供的室內質控品。

1.3 統(tǒng)計學分析

選用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件對本研究資料進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間室比較采取t檢驗，計數資料以n（%）表示，組間比較采取x2檢驗，設P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 特異性和敏感性分析

HIV抗體檢測試劑、HIV抗原抗體檢測試劑、HIV快速診斷試劑的特異性均大于97.5%（39/40），敏感性均為100.0%（40/40），國產抗原抗體診斷試劑存在1例假陽性，其他試劑則均為100.0%。

2.2 分析靈敏度觀察

各試劑檢測結果的陽性率如表1所示。

表1 陽轉血清盤的陽性率觀察

2.3 分析特異性

2種HIV快速檢測試劑和4種HIV ELISA檢測試劑的特異性均為100.0%。

2.4 板內精密度

精密度血清盤各個試劑的變異系數如表2所示。

表2 變異系數觀察（CV%）

2.5 線性范圍

4種HIV ELISA檢測試劑平行檢測3個線性稀釋系統(tǒng)，檢測結果處于線性范圍內的個數如表3所示。

表3 線性稀釋血清盤檢測結果

3 討 論

現階段臨床中在進行HIV抗體檢測時，常用的試劑主要包括WB、PCR、ELISA以及HIV快速檢測等[2]。HIV快速檢測時通過免疫層析分析技術和特異性抗體抗原反應來對血液中有無HIV1/2抗體進行定性檢測。HIV快速檢測的技術水平要求不高、操作簡單方便、檢測價格低、穩(wěn)定性理想等，適合應用于基層實驗室[3]。

ELISA檢測試劑盒是在固相載體表面有效固定待測抗體或者抗原，對抗原或抗體進行酶標記，并和已固定的抗原或者抗體形成特異性反應，在加入酶底物反應后則會出現不同的顏色，利用分光光度計來觀察分析檢測結果，為半定量檢測技術[4]。在HIV抗體確證中，蛋白印跡試驗的應用非常廣泛。蛋白印跡試驗的檢測原理是在硝酸纖維膜上固定HIV的主要抗原，待檢測標本中如果存在HIV特異性抗體，即可和纖維膜上相應位置的抗原出現反應，形成條帶，而且能通過肉眼進行觀察辨別。重組免疫印跡試驗不需要利用電泳來分離特異性抗原，直接將其將在固相膜上，通過顯色條帶能對血清中的吸附抗原的特異性抗體進行有效提示。除此之外還能通過條帶的顯色情況來對抗體效價進行大致估計。

總之，每一種檢測試劑均具有自身的優(yōu)點和不足，在實際的臨床應用中應結合地域人群和感染情況，選擇合理的檢測方法，進而來對HIV感染進行有效預防和控制。

[1] 賀 敏.研究酶聯免疫法與金標法用于受血者HIV抗體檢測中的臨床效果[J].大家健康(中旬版),2016,10(10):55-55.

[2] 史兆駒.HIV抗體檢測陽性結果專業(yè)告知服務機制的效果評估[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2016,13(12):145-148.

[3] 馬永娟,王 紅,周 迪,等.HIV抗體檢測確證試驗結果分析[J].黑龍江醫(yī)藥科學,2016,39(4):79-80,82.

[4] 楊 瀲.HIV抗體檢測產生不確定結果的特點及隨訪情況分析[J].大家健康(中旬版),2016,10(12):56-56,57.

R512.91

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ISSN.2095-8242.2017.054.10535.02

本文編輯：吳 衛(wèi)