新疆地區維漢民族多囊卵巢綜合征患者中醫證型分析及與CYP17候選基因多態性的相關性分析*

吳苗敏,蘆艷麗, 韓 璐

新疆維吾爾自治區中醫藥研究院(烏魯木齊830000)

·臨床報道·

新疆地區維漢民族多囊卵巢綜合征患者中醫證型分析及與CYP17候選基因多態性的相關性分析*

吳苗敏,蘆艷麗, 韓 璐Δ

新疆維吾爾自治區中醫藥研究院(烏魯木齊830000)

目的：探討新疆地區維漢民族多囊卵巢綜合征患者中醫證型分析及與CYP17基因多態性的相關性。方法：選擇多囊卵巢綜合征的患者360例，其中漢族260例，維吾爾族100例；記錄多囊卵巢綜合征患者與100例維族多囊卵巢綜合征患者的中醫證型分布狀況并進行分析；對兩組患者CYP17、LH、IRS、HLA基因多態性進行檢測并對比檢測結果。結果：維、漢民族中醫證型占比不同，漢族以脾虛痰濕所致痰濕凝滯多見，維吾爾族以腎虛肝郁所致肝郁化火多見。CYP17是多囊卵巢綜合征的易感基因之一；新疆地區維漢兩族的CYP17基因多態性無顯著差異。結論:新疆維漢兩族多囊卵巢綜合征患者應根據不同的中醫證型辨證施治； CYP17對于多囊卵巢綜合征的診治有著重要的意義。

多囊卵巢綜合征會造成患者內分泌系統紊亂，嚴重威脅患者身心健康[1]。多囊卵巢綜合征屬于多基因相關的遺傳性疾病，因受到環境因素和多個致病基因共同的影響所致，但目前多囊卵巢綜合征確切的遺傳方式及其分子機制尚不明確[2]。Bachanek等對漢族多囊卵巢綜合征女性患者的研究結果顯示基因THADA、DENND1A和LHCGR均具有和多囊卵巢綜合征相關的SNP位點[3]。Ha等通過研究確定了LHCGR基因SNPrs13405728在我國寧夏回族女性多囊卵巢綜合征的作用[4]。本次研究主要研究了新疆地區維漢民族多囊卵巢綜合征患者的中醫證型及與CYP17基因多態性的相關性，現報告如下。

對象與方法

1 研究對象 納入研究2014年1月至2015年12月之間確診為多囊卵巢綜合征的患者360例，其中漢族260例，維吾爾族100例。所有納入研究的患者年齡均在26～35歲之間，平均年齡(30.31±5.11)歲，所有患者近3個月內均未接受激素治療，均排除其他內分泌疾病。

診斷標準:多囊卵巢綜合征中醫辨證標準參考我國國家中醫臨床研究基地單病種多囊卵巢綜合征診療方案和臨床路徑診斷標準分型[5]。中醫證型根據中醫證候分級量化表進行分型：脾虛痰濕者表現為面色晦暗、性欲淡漠、肢倦神疲、小便清長、大便溏薄、腰膝酸軟、舌淡苔白、脈沉細或沉遲，月經停閉數月，婚久不孕等。腎虛肝郁者表現為心煩失眠、咽干口燥、行經前胸脅不舒、乳房脹痛、精神抑郁、少腹脹痛、煩躁易怒、大便秘結、皮膚多毛與痤瘡、舌質暗紅、舌苔薄白舌質暗紅、脈弦，月經期不固定且量多少不定，月經色暗，久婚不孕[6]。

2 研究方法

2.1 兩組患者中醫證型對比：按照中醫辨證法記錄兩組患者不同的中醫證型的分布，并研究分析兩組的差異。

2.2 兩組患者CYP17基因多態性檢測：在月經的第3天至第5天或者閉經患者的任意時期抽取外周靜脈血，分離出血清后應用酶聯免疫吸附法(ELISA)對患者的血清T進行測定。PCR擴增：將300微升全血抗凝處理后用于提取基因組DNA，操作嚴格按照試劑盒說明。引物及GenBank序列合成如下所示，P1:5’-CATTCCCA CTCTG-GAGTC-3’,P2： 5’-AGGCTCTTGGGGTA CTTG-3’。擴增CYP17基因包含有多態位點-34bp的一小段DNA,DNA片段大小為419bp。該反應總體系為20微升，體系內包含有引物、模板DNA、氯化鎂、4種脫氧核糖三磷酸和Taq DNA聚合酶。CYP17基因擴增條件為5 min 94℃預變性、95℃ 1 min、61.7℃ 1 min、72℃ 1 min，35個循環，最后72℃ 1 min、延伸10 min。CYP17基因多態性檢測：將含有緩沖液、PCR擴增產物、內切酶MspA1I、乙酰基內切酶MspA1I超純水的20微升MspA1I酶切總體系混合均勻后放置于37℃的恒溫水環境下消化4h。將酶切產物放置于含有溴化乙錠的20 g/L的瓊脂糖凝膠中進行電泳實驗，電流為70微安，電壓為100V，應用紫外線透射儀進行觀察并攝像保存。基因頻率=該基因型頻數/總患者例數；等位基因頻率=每種等位基因出現的頻數/總等位基因數。

結 果

1 兩組多囊卵巢綜合征患者中醫證型分布狀況比較 本次調查結果顯示漢族和維吾爾族多囊卵巢綜合征患者中痰瘀互結證、腎虛血瘀證患者的例數差異無統計學意義(χ2=3.414，P>0.05；χ2=2.162，P>0.05)；漢族多囊卵巢綜合征患者以脾虛痰濕所致痰濕凝滯多見(χ2=16.562，P<0.05)，維吾爾族多囊卵巢綜合征患者以腎虛肝郁所致肝郁化火多見(χ2=49.540，P<0.05),見表1。

表1 兩組多囊卵巢綜合征患者中醫證型分布狀況 (例)

2 兩組患者CYP17基因多態性比較 兩組患者CYP17基因頻率和等位基因頻率經比較統計學意義差異(χ2=0.003，P>0.05)。兩組多囊卵巢綜合征患者的CYP17 A2A2型的基因型間睪酮T水平均顯著高于A1A2型和A1A1型(P<0.05)；但兩組間差異無統計學意義(χ2=0.050，P>0.05),見表2，表3。

表2 兩組患者CYP17基因頻率和等位基因頻率對比 (例)

注：組內比較*P<0.05；組間比較P>0.05

表3 兩組CYP17 A2A2型的基因型間睪酮T水平對比 (μg/L)

注： 組間比較P>0.05

討 論

多囊卵巢綜合征是較為常見的婦科疾病，育齡婦女的患病率大約為5%～10%[7]。根據美國國立衛生研究院的標準，多囊卵巢綜合征的發病率在6%～10%之間，根據鹿特丹標準則高達15%[8]。活質量和身心健康。本論文主要探討分析了新疆地區維漢民族多囊卵巢綜合征患者中醫證型分析及與CYP17基因多態性的相關性。

1 新疆地區維漢民族多囊卵巢綜合征患者中醫證型分析 多囊卵巢綜合征的中醫辨證分型通常較為復雜，作為中醫學核心的內容，辨證論治中的“證”的理論對于疾病的診斷和治療有著重要的意義[9]。中醫辨證論治認為多囊卵巢綜合征的病機主要以肝、脾、腎功能失常為本，以痰濕阻滯、氣滯血瘀為標[10]。脾虛則會造成痰濕內生，阻滯氣機，導致多囊卵巢綜合征的發生；肝郁則氣郁血滯，血行受阻也會導致多囊卵巢綜合征的發生[11]。韓延華等在多囊卵巢綜合征的病位證候要素分布研究中發現腎發病的幾率最高，其次為肝，然后為脾，證明了多囊卵巢綜合征的病變臟腑主要為肝、脾、腎；在病性證候要素分布研究中，發病幾率最高的為氣虛，其次為痰濕，再次為血瘀，證明多囊卵巢綜合征的常見發病因素為氣虛、痰濕、血瘀[12]。多囊卵巢綜合征和肝郁導致的氣郁血滯以及痰濕導致的經脈阻滯均有著一定的相關性。本次研究結果顯示維、漢民族中醫證型占比不同，漢族以脾虛痰濕所致痰濕凝滯多見，維吾爾族以腎虛肝郁所致肝郁化火多見。林琳等在研究中指出新疆漢族與維族的飲食習慣和多囊卵巢綜合征的發生有著一定的關聯性[13]。因此，對于多囊卵巢綜合征的治療除了考慮藥物之外，還需要對患者給于科學、合理的飲食指導。

2 新疆地區維漢民族多囊卵巢綜合征與CYP17等基因多態性的相關性 CYP17包括8個外顯子和7個內含子，位于人染色體的10q24.3區域，目前CYP17基因單核苷酸多態位點主要有三個：CT突變位點(位于內含子的5471堿基上)、CA(位于其編碼區5’上游的47堿基上)、T C(位于其編碼區5’的34堿基上)。T C多態位點也叫做rs743572位點，該多態性位點的存在會導致CYP17編碼區5’出現CCAACC啟動子位點，該啟動子位點的出現會改變CYP17基因的轉錄，進而影響雌激素的水平，A2A2型基因或和多囊卵巢征雄性激素增高有關，且CYP17基因一直以來就被作為多囊卵巢綜合征發病相關的候選基因。本結果顯示100例維族多囊卵巢綜合征患者A1型為10%，A1A2基因型為56%，A2A2基因型為34%；260例漢族多囊卵巢綜合征患者A1A1基因型為10%，A1A2基因型為57.31%，A2A2基因型為32.70%；兩族各種基因型頻數分布沒有顯著差異。兩族多囊卵巢綜合征患者的A2A2基因型的血清T水平均顯著高于A1A1基因組和A1A2基因組，其原因或是因為CYP17基因-34bp所處的TC堿基置換導致了該基因的表達出現異常，造成多囊卵巢綜合征高雄性激素血癥的形成，且含A2等位基因可能對CYP17基因翻譯有著一定的調節作用，同時影響多囊卵巢綜合征患者體內雄性激素水平(升高)，其機制是應為CYP17基因5’端調節區含有4個CCACC Spl識別位點，由于調節區轉錄因子識別組間數目和該基因啟動子區域活性有一定的關聯性，而-34bp的處T C堿基置換導致新的splt識別組件(CCACT CCACC)的產生，進而導致該區域轉錄活性的升高，同時提升P450c17a酶的活性，促進雄性激素合成的增多。本次研究結果顯示：兩組患者CYP17基因頻率和等位基因頻率經比較無顯著差異；兩組多囊卵巢綜合征患者的CYP17 A2A2型型的T水平均顯著高于A1A2型和A1A1型，進一步驗證了以上機制。雖然本次研究結果顯示新疆地區維漢兩族的CYP17基因多態性無顯著差異，但由于多囊卵巢綜合征臨床表現通常存在多樣性，難以用某一種基因異常解釋其復雜的臨床表現，另外研究結果是否受限于樣本量的選取，仍然有待于進一步研究。

綜上所述，新疆維漢兩族多囊卵巢綜合征患者應根據不同的中醫證型辨證施治； CYP17對于多囊卵巢綜合征的診治有著重要的意義，兩者皆有重要的研究價值。

[1] 徐曉航，陳圓輝，王 倩，等. 多囊卵巢綜合征診治新進展[J]. 國際生殖健康/計劃生育雜志，2015，34(2)：160-164.

[2] 杜 靜，王 澤，張江濤，等.INSR基因rs2252673位點單核苷酸多態性與多囊卵巢綜合癥發病的關系[J].中華婦產科雜志，2014,49(12)919-921.

[3] Bachanek M,Abdalla N, Cendrowski K,etal. Value of ultrasonography in the diagnosis of polycystic ovary syndrome literature rewiew[J]. J Ultrason,2015,15(63):410-422.

[4] Ha L, Shi Y, Zhao J,etal. Association study between polycystic ovarian syndrome and thesusceptibility genes polymorphisms in Hui Chinese Women [J].PLOS One ,2015,10(5):e126505.

[5] 彭昌樂，侯麗輝.多囊卵巢綜合征合并代謝綜合征的中醫證型特征研究 [J].天津中醫藥，2015，35(5)：264-266.

[6] 喬世聰，侯麗輝，王 鑫,等.多囊卵巢綜合征患者人體測量學指標與中醫證型相關性的研究[J].實用醫學雜志，2015，31(1)：14-149.

[7] 王 旺，趙可寧.補腎調周法聯合達英-35治療腎虛型多囊卵巢綜合征的臨床研究[J].陜西中醫，2014，35(7)：773-775.

[8] Fauser B C, Tarlatzis B C, Rebar R W,etal.Consensus on women’s health aspects of polycystic ovary syndrome(PCOS): the Amsterdam ESHRE/ASRM-Sponsored 3rd PCOS consensus workshop Group[J].Fertil Steril,2012,97(1):28-38.

[9] 尹曉丹，何軍琴.多囊卵巢綜合征中醫證型的發病因素及與性激素相關性的研究 [J].遼寧中醫雜志,2015,42(6):1379-1381.

[10] 金春蘭，吳中朝，趙吉平.從肝論治多囊卵巢綜合征探析[J].遼寧中醫雜志,2015,42(6):1379-1381.

[11] 張 霞，馮艷奇. 多囊卵巢綜合征中醫證型與超生指數的相關性研究[J].河南中醫，2015，35(12)：3131-3133.

[12] 韓延華，王雪蓮，張雪芝，等.婦科名家診治多囊卵巢綜合征經驗臨床研究[J].遼寧中醫雜志，2017，44(1)：100-103.

[13] 林 琳，楊 靜，丁 巖，等.新疆維、漢族多囊卵巢綜合征發病相關因素分析[J].海南醫學院學報，2014，20(5)：680-683.

AnalysisofthecorrelationofTCMsyndromeandthecorrelationofCYP17genepolymorphismbetweenUighurethnicandtheHannationalityPCOSpatientsinXinjiangarea

Wu Miaomin,Lu Yanli,Han Lu .

Xinjiang Uygur Autonomous Region Traditional Chinese Medicine Institut (Urumqi 830000)

Objective:To analyze the correlation of TCM Syndrome and the correlation of CYP17 Gene polymorphism between Uighur ethnic PCOS patients and the Han nationality PCOS patients in Xinjiang area. Methods: 360 cases PCOS patients included 260 Han nationality and 100 Uygur nationality were chosen , the TCM syndrome type distribution were written and analyzed；To detect and compare the CYP17 Gene polymorphism of the patients in these two group . Results: There was difference of TCM Syndrome between the PCOS patients of Uygur ethnic group and Han nationality group, spleen deficiency caused by phlegm dampness phlegm dampness stagnation always happened in Han nationality group and pathogenic fire derived from stagnation of liver-QI caused by kidney deficiency and liver depression always happened in Uygur ethnic group. Conclusion:The PCOS patients of Uygur ethnic group and Han nationality group should be treated with different treatment of TCM Syndrome;There is important significant of CYP17 in the diagnosis and treatment of PCOS patients .

Stein-Leventhal syndrome TCM syndrome type CYP17 Gene polymorphism Correlation

*新疆維吾爾自治區自然科學基金資助項目(2014211C097)

Δ通訊作者

多囊卵巢綜合征 中醫證型 CYP17 基因多態性 相關性

R711.75

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.10.001

(收稿：2017-03-10)