T淋巴細胞亞群與四肢骨折感染的相關性研究

胡居正，石展英，楊成志

(柳州市工人醫院創傷中心，廣西柳州 545005)

T淋巴細胞亞群與四肢骨折感染的相關性研究

胡居正，石展英，楊成志

(柳州市工人醫院創傷中心，廣西柳州 545005)

四肢；骨折，開放性；感染；T淋巴細胞亞群；Th1細胞；Th2細胞

四肢開放性骨折是臨床上最為常見的骨折類型之一。此外，由于開放性骨折的皮膚黏膜損傷使骨折端與外界環境接觸，加之患者骨折創面常常受到污染，導致四肢開放性骨折患者的感染率居高不下[1]。而四肢開放性骨折患者發生感染會加大臨床治療的難度，甚至會導致嚴重的不良預后[2]。因此,研究四肢開放性骨折感染的相關因素，從而提出預防措施具有重要的臨床價值。但是，目前的研究多集中在住院時間等臨床資料中[3]，而對于T淋巴細胞亞群等免疫指標是否與四肢開放性骨折發生感染具有相關性，罕見報道。因此，本研究對223例四肢開放性骨折患者的感染情況、T淋巴細胞亞群及輔助性T淋巴細胞(Th)1/Th2的變化情況進行分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2014年1月1日至2015年1月1日于本院骨科進行手術治療的223例四肢開放性骨折患者為研究對象。納入標準：(1)均經臨床及影像學等檢查明確診斷為四肢開放性骨折；(2)未伴有其他器官創傷；(3)傷后24 h內來院就診。排除標準：(1)伴有免疫性疾病的患者；(2)近期使用過免疫抑制劑、糖皮質激素或其他對免疫功能及炎性介質釋放有影響的藥物；(3)伴有其他器官嚴重疾患的患者；(4)拒絕參加本研究的患者。將出現感染相關癥狀，相應組織或分泌物細菌培養陽性的34例患者納入感染組，其中男20例、女14例，平均年齡(26.97±3.78)歲，平均傷后至手術時間(28.90±11.98)h，上肢骨折22例、下肢骨折12例，骨折原因：交通意外16例、摔傷8例、砸傷3例、其他7例；未出現感染的189例患者納入未感染組，其中男102 例、女87例，平均年齡(26.53±3.43)歲，平均傷后至手術時間(29.78±11.53)h，上肢骨折106例、下肢骨折83例，骨折原因：交通意外89例、摔傷43例、砸傷12例、其他45例。另選擇同期來本院體檢中心進行健康體檢的30例健康體檢者為健康對照組，其中男18例，女12例，平均年齡(28.93±4.53)歲。3組患者一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。所有研究對象均簽署知情同意書，本研究通過醫院倫理委員會審批。

1.2方法 四肢開放性骨折患者均于全身麻醉下行切開復位內固定，且均由同一組醫師實施。在入院時、術后第1天采集患者肘部靜脈血，其中健康對照組在體檢過程中采取靜脈血，均進行相關指標檢測。(1)T淋巴細胞亞群：采用美國BD公司FACSCalibur流式細胞儀進行T淋巴細胞亞群分析，試劑盒采用美國BD Biosciences公司提供的Simultest IMK雙色淋巴細胞亞群檢測試劑盒；(2)Th細胞亞群：采用熒光激活細胞分離儀(FACS)常規分離淋巴細胞,經刺激劑佛波二酯、依諾霉素和細胞轉運抑制劑Monensin處理后加入CD4+單克隆抗體，使用FACS計數細胞，試劑盒由上海復星長征醫學科學有限公司提供。上述操作均由本院檢驗科經驗豐富的醫師按試劑盒說明進行操作。

2 結 果

2.1各組T淋巴細胞亞群變化情況 未感染組與感染組患者入院時CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值均明顯低于健康對照組，而CD8+細胞百分比明顯高于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；感染組患者入院時及術后1 d CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值均明顯低于未感染組，CD8+細胞百分比明顯高于未感染組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2各組Th1/Th2細胞變化情況 未感染組與感染組入院時Th1細胞百分比和Th1/Th2比值均明顯低于健康對照組，Th2細胞百分比明顯高于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；感染組患者入院時及術后1 d Th1細胞百分比和Th1/Th2比值明顯低于未感染組，而Th2細胞百分比明顯高于未感染組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表1 各組T淋巴細胞亞群水平比較

*：P<0.05，與健康對照組比較；#：P<0.05，與同組入院時比較；△：P<0.05，與未感染組比較

表2 各組Th1/Th2細胞水平比較

*：P<0.05，與健康對照組比較；#：P<0.05，與同組入院時比較；△：P<0.05，與未感染組比較

2.3四肢骨折感染相關因素多因素Logistic回歸分析 以是否并發感染為因變量，以上述有統計學意義的因素為自變量進行多因素Logistic回歸分析，將CD4+細胞百分比、CD8+細胞百分比、CD4+/CD8+比值、Th1細胞百分比、Th2細胞百分比和Th1/Th2比值等因素帶入多元Logistic回歸分析模型進行分析，結果顯示：四肢骨折感染與術后1 d CD4+細胞百分比、 CD4+/CD8+比值、Th1細胞百分比和Th1/Th2比值密切相關，見表3。

表3 四肢骨折與免疫功能的相關性分析

3 討 論

在機體抗感染過程中細胞免疫發揮著極其重要的作用，而T淋巴細胞亞群是細胞免疫功能的重要組成部分之一[4]。T淋巴細胞根據表面分化抗原的不同分為CD4+亞群和CD8+亞群。機體內不同的T淋巴細胞亞群發揮著不同而又相互聯系的免疫功能，既相互協作也相互制約，從而促使機體維持正常的免疫應答平衡。CD4+亞群是Th，在體內可促進B淋巴細胞、T淋巴細胞及機體其他免疫細胞的增殖與分化,從而促進機體的免疫應答；而CD8+亞群的功能與CD4+亞群相反，主要包括抑制性T細胞(Ts)和細胞毒性T細胞(Tc)/殺傷T細胞(Tk)，具有抑制體液及細胞免疫的功能，同時能有效地抑制B淋巴細胞及CD4+細胞活性，從而對機體的免疫反應發揮負調節作用[5]。CD4+/CD8+平衡狀態是反映機體免疫功能是否平衡的重要指標之一，機體嚴重創傷或者發生骨折后會發生免疫功能的紊亂，表現為細胞免疫抑制，特別是T淋巴細胞亞群介導的細胞免疫功能明顯下降，主要表現為CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值明顯下降，機體自然殺傷細胞(NK細胞)及其他細胞因子激活機體殺傷細胞的能力明顯下降[6-7]。本研究結果顯示，四肢骨折患者入院時CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值均明顯低于健康對照組，而CD8+細胞百分比明顯高于健康對照組，這種情況切開復位內固定后更為明顯。此外，術后1 d CD4+細胞百分比、CD4+/CD8+比值與四肢骨折感染關系密切， 這說明四肢骨折對機體是一種嚴重的應激性刺激，可以導致患者的免疫功能發生紊亂，而手術可能加重免疫功能的紊亂，并且感染組患者更為嚴重。因此，四肢骨折患者感染的發生與自身外周血T淋巴細胞免疫功能嚴重降低密切相關，四肢開放性骨折外周血T淋巴細胞亞群變化，尤其CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值是四肢開放性骨折患者發生感染的重要指標。

與四肢開放性骨折感染密切相關的CD4+亞群又可以分為Thl、Th2細胞亞群，其中Thl細胞主要產生白細胞介素(IL)-2、干擾素-γ(IFN-γ)等細胞因子從而增強機體的細胞免疫應答，而Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細胞因子，在機體發揮調節體液免疫的作用[8-9]。相關研究顯示，創傷、手術等應激性刺激均會導致Thl、Th2細胞平衡破壞，出現以Th2細胞為優勢的克隆轉換，Thl型細胞因子分泌則會受到明顯的抑制，出現Th1/Th2細胞平衡紊亂，表現為抗炎性細胞因子占優勢的免疫抑制[10]。本研究結果同樣顯示，骨折后發生Th1/Th2細胞平衡紊亂，Th1細胞百分比下降，而Th2細胞百分比升高，導致產生的細胞因子種類和數量變化,從而影響正常的免疫功能，導致四肢骨折感染的發生。多因素Logistic回歸分析同樣顯示，術后Th1細胞百分比和Th1/Th2比值與四肢骨折感染密切關系。

綜上所述，入院初期及術后四肢開放性骨折患者外周血CD4+/CD8+及Th1/Th2細胞平衡紊亂是發生感染的危險因素之一，應引起臨床重視。

[1]Hull PD，Johnson SC，Stephen D，et al．Delayed debridement of severe open fractures is associated with a higher rate of deep infection[J]．Bone Joint J，2014，96(3)：379-384．

[2]Parmaksizoglu F，Cansü E，Unal MB，et al．Acute emergency tibialization of the fibula:Reconstruction of a massive tibial defect in a type ⅢC open fracture[J]．Strategies Trauma Limb Reconstr，2013，8(2)：127-131.

[3]王韜，晏新，扶世杰，等．開放性骨折患者醫院感染臨床分析及預防措施[J]．中華醫院感染學雜志，2015，25(10)：2291-2293．

[4]Dimitropoulou D，Karakantza M，Tsamandas AC，et al．T-Lymphocyte subsets in peripheral blood and liver tissue of patients with chronic hepatitis B and C[J]．In Vivo，2011，25(5)：833-840．

[5]Grotzke JE，Lewinsohn DM．Role of CD8+T lymphocytes in control of Mycobacterium tuberculosis infection[J]．Microbes Infect，2005，7(4)：776-788.

[6]姚曉聰．不穩定骨盆骨折患者外周血T淋巴細胞亞群的動態變化及臨床意義[J/CD]．中華危重癥醫學雜志(電子版)，2013，6(3)：26-28．

[7]李友軍，黃增峰，方作春．嚴重創傷患者APACHE評分和T淋巴細胞亞群變化特點及與預后的關系[J]．廣東醫學，2015，53(11)：1700-1702．

[8]Shayghannejad V，Bagherpour B，Gharagozloo MA，et al．Th1,Th2 and Th17 cytokine profile in patients with multiple sclerosis following treatment with rapamycin[J]．Iran J Immunol，2016，22(3)：413-414.

[9]Malaiyan J，Ramanan PV，Subramaniam D，et al．Analysis of serum Th1/Th2 cytokine levels in patients with acute mumps infection[J]．J Glob Infect Dis，2016，8(2)：87-92.

[10]Wang SY，Li TY，Zheng YQ．Effects of cardiopulmonary bypass on plasma pentraxin-3 level and the balance of Th1/Th2 function in children with congenital heartmalformations[J]．Zhonghua Yi Xue Za Zhi，2009，89(15)：1024-1027.

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.29.038

廣西壯族自治區衛生廳自籌經費科研基金資助項目(Z2013625)。

胡居正(1975-)，副主任醫師，碩士，主要從事臨床創傷研究。

目的探討外周血T淋巴細胞亞群與四肢開放性骨折感染的關系。方法選取2014年1月1日至2015年1月1日于該院骨科進行手術治療的223例四肢開放性骨折患者，根據是否感染分為感染組(34例)與未感染組(189例)。另選取同期體檢健康者30例作為健康對照組。患者于入院時、術后1 d，健康對照組于體檢過程中采靜脈血，以流式細胞法檢測外周血T淋巴細胞亞群及輔助性T淋巴細胞(Th)1/Th2比值并進行比較，同時采用多因素Logistic回歸分析T淋巴細胞亞群及Th1/Th2平衡與四肢開放性骨折感染的關系。結果感染組與未感染組患者入院時CD4+細胞百分比、CD4+/CD8+比值、Th1細胞百分比、Th1/Th2比值均明顯低于健康對照組，CD8+細胞百分比和Th2細胞百分比明顯高于健康對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；并且感染組患者入院時及術后1 d CD4+細胞百分比和CD4+/CD8+比值、Th1細胞百分比、Th1/Th2比值均明顯低于未感染組，而CD8+細胞百分比和Th2細胞百分比明顯高于未感染組，差異均有統計學意義(P<0.05)；多因素Logistic回歸分析顯示，四肢骨折感染與術后1 d CD4+細胞百分比、CD4+/CD8+比值、Th1細胞百分比及和Th1/Th2比值明顯相關(P<0.05)。結論入院初期及術后四肢開放性骨折患者外周血CD4+/CD8+及Th1/Th2細胞平衡紊亂是發生感染的危險因素之一，應引起臨床重視。

R683

B

1671-8348(2017)29-4153-03

2017-03-20

2017-06-18)