米非司酮對子宮肌瘤組織中表皮生長因子及Cx43表達的影響

符吉芬，符澤美，王愛麗，李麗娟

(海口市中醫院婦產科，海南 海口 570216)

米非司酮對子宮肌瘤組織中表皮生長因子及Cx43表達的影響

符吉芬，符澤美，王愛麗，李麗娟

(海口市中醫院婦產科，海南 海口 570216)

目的探討米非司酮對子宮肌瘤組織中表皮生長因子(EGF)及上調間隙連接蛋白Cx43表達的影響。方法從海口市中醫院婦產科2015年1～12月收治的子宮肌瘤患者中選取符合入組條件的子宮肌瘤患者92例，按隨機數表法分為對照組和觀察組，每組46例。另選取同期在我院因卵巢腫瘤行手術治療的40例正常子宮肌組織作為正常組。觀察組于術前5 d開始予以米非司酮25 mg，2次/d，口服，連續服用5 d，停藥后立即行手術治療。正常組與對照組在確診后立即行全子宮切除術。治療結束后，比較三組受檢者子宮肌瘤組織及正常子宮肌組織中EGF及Cx43的表達情況。結果①對照組在增生期子宮肌瘤組織的EGF mRNA為(0.31±0.27)，與正常組增生期的(0.27±0.14)比較差異無統計學意義(P＞0.05)；②對照組在分泌期子宮肌瘤組織的EGF mRNA為(1.45±0.43)，與正常組分泌期的(0.53±0.25)比較差異有統計學意義(P＜0.05)；③觀察組在增生期子宮肌瘤組織的EGF mRNA為(0.26±0.11)，與對照組增生期的(0.31±0.27)、正常組增生期的(0.27±0.14)比較差異無統計學意義(P＞0.05)；而觀察組在分泌期子宮肌瘤組織中EGF mRNA為(0.54±0.23)，與對照組分泌期的(1.45±0.43)比較，差異有統計學意義(P＜0.05)；④對照組增生期子宮肌瘤內Cx43蛋白表達與分泌期比較，差異具有統計學意義(P＜0.05)；正常組患者增生期子宮肌內Cx43蛋白表達與分泌期比較，差異無統計學意義(P＞0.05)；⑤觀察組增生期子宮肌瘤Cx43蛋白表達與對照組比較，差異無統計學意義(P＞0.05)；而分泌期觀察組子宮肌瘤內Cx43蛋白表達與對照組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。結論米非司酮能夠明顯抑制子宮肌瘤的生長，對臨床診治具有指導意義。

米非司酮；子宮肌瘤；表皮生長因子；Cx43

子宮肌瘤(uterine myoma)是女性生殖器最常見的良性腫瘤，由平滑肌及結締組織組成[1]。本病臨床表現為月經量增多或者經期延長、下腹部包塊、白帶增多、腫瘤壓迫膀胱或者直腸出現相應的壓迫癥狀[2]。本病多發于中年婦女，據調查統計[3]，我國子宮肌瘤患者的發病率從2000年的14%上升至2013年的31%，并有逐年上升的趨勢。子宮肌瘤與女性性激素有密切關系，肌瘤組織局部對雌激素的高敏感性是肌瘤發生的重要因素。此外相關研究證實，孕激素能夠促進肌瘤的有絲分裂活動，刺激肌瘤的生長，這也為抗孕激素治療子宮肌瘤奠定了基礎[4]。本文通過觀察表皮生長因子(EGF)及上調間隙連接蛋白Cx43的表達水平，探究米非司酮治療子宮肌瘤的可能機理。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～12月海口市中醫院婦產科收治的子宮肌瘤患者92例，按隨機數表法分為對照組和觀察組，每組46例。另選取同期在我院因卵巢腫瘤行手術治療的40例正常子宮肌組織作為正常組。觀察組患者中增生期和分泌期均23例，平均年齡(40.6±12.4)歲；對照組患者中增生期和分泌期均23例，平均年齡(41.2±11.7)歲。正常組中增生期和分泌期均為20例，平均年齡(41.1±10.7)歲。患者病程3個月～3年。三組患者的一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 子宮肌瘤診斷標準 月經量增多或者經期延長、下腹部包塊、白帶增多、腫瘤壓迫膀胱或者直腸出現相應的壓迫癥狀等為臨床癥狀；婦科檢查可捫及明顯包塊；彩超、宮腔鏡、腹腔鏡、影像等檢查可明確診斷[5]。

1.3 納入與排除標準 (1)納入標準：符合子宮肌瘤的診斷標準；年齡23～66歲；患者自愿參與本實驗，并簽署知情同意書；經所在單位倫理學相關機構的批準。(2)排除標準：心、肝、腎嚴重疾病；其他惡性腫瘤；患有艾滋病、肺結核病毒性肝炎等傳染病患者；血液性疾病，神志異常以及近3個月來服用激素藥物治療的患者。

1.4 治療方法 正常組與對照組診斷明確后，在全麻下行全子宮切除術；觀察組于術前5 d開始予以米非司酮25 mg，2次/d，口服，連續服用5 d，停藥后，在全麻下行全子宮切除術。術中子宮標本離體15 min內選取肌瘤組織，所有標本采集后立即保存在-70℃低溫冰箱中。

1.5 觀察指標及檢測方法

1.5.1 EGF表達 采用RT-PCR法測定子宮肌瘤和正常子宮肌組織內EGF mRNA含量。一步法提取子宮肌瘤及子宮肌組織內總RNA，并以RNA為模板反轉錄合成cDNA，以cDNA為模板行體外擴增，以2.0%凝膠電泳一個小時后，于紫外線照射下觀察，并用激光密度掃描儀計算吸光度值。并與β-action條帶光密度值比較。目的基因引物序列如表1所示。

表1 目的基因的實時定量RT-PCR引物序列

1.5.2 Cx43表達 標本甲醛固定后，石蠟包埋制片，采用免疫組化法測定Cx43表達含量，試劑盒由賽馳生物公司提供，并且嚴格按照說明書操作。以濃度為2.5 μg/mL的兔抗Cx43(美國Zymed公司產)為一抗，切片使用蘇木素復染色。空白對照用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗。陽性細胞判定標準：陽性細胞＜5%時為陰性(-)；當陽性細胞5%～50%時為陽性(+)；當陽性細胞＞50%時為強陽性(++)。

1.6 統計學方法 應用SPSS19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，等級資料比較采用秩和檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 三組患者不同月經周期EGF mRNA含量比較 對照組在增殖期子宮肌瘤組織與正常組子宮肌中EGF mRNA的含量比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；分泌期對照組子宮肌瘤組織中EGF mRNA較正常組明顯增高，差異有統計學意義(P＜0.05)；觀察組增生期子宮肌瘤組織中EGF mRNA與對照組、正常組EGF mRNA含量比較差異均無統計學意義(P＞0.05)；而分泌期觀察組子宮肌瘤組織中EGF mRNA含量明顯低于對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 三組患者不同月經周期EGF mRNA含量比較(±s)

表2 三組患者不同月經周期EGF mRNA含量比較(±s)

注：治療后，與正常組同時間段比較，aP＜0.05(P=0.042，t=2.203)；治療后，與對照組同時間段比較，bP＜0.05(P=0.038，t=2.213)。

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2.2 不同月經周期中子宮肌瘤與正常子宮肌Cx43蛋白表達比較 對照組增生期子宮肌瘤內Cx43蛋白表達明顯高于分泌期，差異具有統計學意義(P＜0.05)；正常組患者增生期子宮肌內Cx43蛋白表達與分泌期比較差異無統計學意義(P＞0.05)，對照組和正常組的增生期子宮肌瘤內Cx43蛋白表達比較差異有統計學意義(P＜0.05)，且兩組分泌期的差異亦有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 不同月經周期中子宮肌瘤與正常子宮肌Cx43蛋白表達比較(例)

2.3 觀察組與對照組患者子宮肌瘤內Cx43蛋白表達比較 經過米非司酮治療后，觀察組增生期子宮肌瘤Cx43蛋白表達與對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)；而分泌期，經米非司酮治療后的觀察組子宮肌瘤內Cx43蛋白表達明顯高于未用藥物治療的對照組，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表4。

表4 觀察組與對照組患者子宮肌瘤內Cx43蛋白表達比較(例)

3 討 論

子宮肌瘤是最常見的一種生殖器激素依賴性良性腫瘤,主要發生于30～50歲中年婦女。據統計，至少有20%的育齡婦女有子宮肌瘤[6]。子宮肌瘤早期無明顯癥狀，當肌瘤逐漸增大時可有腫瘤壓迫癥狀、或月經、白帶異常等臨床表現。子宮肌瘤生長的主要原因是雌激素受體和孕激素受體的增多和過度表達[7]。相關研究證實，孕激素在子宮肌瘤發生的機制中起著重要的作用[8]。

本研究顯示，對照組在增殖期子宮肌瘤組織與正常組子宮肌中EGF mRNA的含量差異無統計學意義(P＞0.05)；分泌期對照組子宮肌瘤組織中EGF mRNA較正常組明顯增高(P＜0.05))；觀察組增生期子宮肌瘤組織中EGF mRNA與對照組、正常組EGF mRNA含量差異無統計學意義(P＞0.05)；而分泌期觀察組子宮肌瘤組織中EGF mRNA含量明顯低于對照組(P＜0.05)。月經周期增生期中主要是雌激素起主導作用，進入分泌期時，雌激素和孕激素共同發揮作用。本實驗結果中，處于增生期的子宮肌瘤患者中的EGF mRNA含量無明顯差異，而處于分泌期的子宮肌瘤組織中的EGF mRNA含量對照組明顯高于正常組，推斷在EGF表達中孕激素具有主要的調控作用。米非司酮是孕激素受體拮抗劑，能夠抑制孕激素受體基因的表達，使轉錄活化因子不能被激活，基因不能表達，無法發揮孕酮作用，從而抑制EGF表達，因此米非司酮治療后分泌期患者子宮肌瘤組織中EGF mRNA含量明顯低于未使用藥物治療的對照組[10-12]。

本研究還顯示，對照組增生期子宮肌瘤內治療Cx43蛋白表達與分泌期比較差異有統計學意義(P＜0.05)；正常組患者增生期子宮肌內Cx43蛋白表達與分泌期比較差異無統計學意義(P＞0.05)；觀察組經過米非司酮治療后，觀察組增生期子宮肌瘤Cx43蛋白表達與對照組比較差異無統計學意義(P＞0.05)；而分泌期，觀察組子宮肌瘤內Cx43蛋白表達與對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。子宮的協調收縮需要間隙連接蛋白的表達，Cx43是間隙連接蛋白的最重要的成員，對細胞的代謝、增殖、分化和凋亡起到重要的調控作用。雌激素是促進肌瘤生長的主要因素，高雌激素狀態可通過雌激素受體上調子宮肌瘤組織中的Cx43 mRNA和蛋白的表達，形成間隙連接。增生期Cx43蛋白表達增強，能夠有效的抑制細胞有絲分裂，組織細胞惡化[13]。孕激素能夠通過孕激素受體直接抑制Cx43蛋白表達，分泌期一定水平孕激素亦能抑制雌激素受體的表達，間接抑制Cx43蛋白表達下調，導致肌瘤有絲分裂增強，促進肌瘤增長[14]。米非司酮能夠直接抑制孕激素受體基因表達或者對抗孕酮活性，削弱孕激素對Cx43蛋白表達影響，增強間隙連接蛋白的表達[15]。

綜上所述，米非司酮能夠抑制分泌期孕激素受體基因的表達，抑制孕酮活性，從而下調子宮肌瘤組織中表皮生長因子的表達；并能夠通過上調間隙連接蛋白Cx43表達，增強細胞間接接觸的生長作用，抑制肌瘤細胞的有絲分裂活動，最終抑制子宮肌瘤的生長。

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Effect of mifepristone on expression of epidermal growth factor and Cx43 in uterine fibroids.

FU Ji-fen,FU
Ze-mei,WANG Ai-li,LI Li-juan.Department of Obstetrics and Gynecology,Haikou Hospital of Traditional Chinese Medicine,Haikou 570216,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the effect of mifepristone on epidermal growth factor(EGF)and up-regulation of connexin43(Cx43)in uterine fibroids.MethodsNinety-two patients with uterine fibroids in Department of Obstetrics and Gynecology in our hospital from January 2015 to December 2015 were randomly divided into control group and observation group,with 46 cases in each group.Forty patients undergoing surgical treatment for ovarian tumor were selected as the normal group.The observation group

mifepristone 25 mg for 5 consecutive days before surgery,two times per day.The control group and the normal group received hysterectomy immediately after confirmed diagnosis.After treatment,the expression of EGF and Cx43 in uterine fibroids and normal uterine muscle were compared between the three groups.Results①There was no significant difference in the level of EGF mRNA in the proliferative phase between the control group and the normal group,(0.31±0.27)vs(0.27±0.14),P＞0.05.② The EGF mRNA level in progestational stage was(1.45±0.43)in the control group,versus(0.53±0.25)in normal group(P＜0.05).③ The level of EGF mRNA in proliferative stage in the observation group was(0.26±0.11),versus(0.31±0.27)in the control group and(0.27±0.14)in normal group(P＞0.05);the EGF mRNA level in progestational stage was(0.54±0.23)in the observation group,significantly lower than(1.45±0.43)in the control group(P＜0.05).④ The difference in Cx43 between in proliferative stage and in progestational stage was significant in the control group(P＜0.05),but not significant in normal group(P＞0.05).⑤ The level of Cx43 protein in proliferative stage in the observation group showed no significant difference with that in the control group(P＞0.05),but the level in progestational stage showed statistically significant difference between the two groups(P＜0.05).ConclusionMifepristone can significantly inhibit the growth of uterine fibroids.

Mifepristone;Uterine fibroids;Epidermal growth factor;Connexin43(Cx43)

R737.33

A

1003—6350（2017）20—3297—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.010

符澤美。E-mail：hainan007004@126.com

2017-02-20)