乙型肝炎患者T細(xì)胞亞群、IL—32水平的變化及其臨床意義分析

熊勛爵

【摘要】 目的：對(duì)不同程度乙型肝炎患者血液中的T細(xì)胞亞群、IL-32水平進(jìn)行測(cè)定，比較其變化情況并探討其對(duì)血清免疫細(xì)胞的影響。方法：選取2016年3-12月來(lái)本院就診的120例不同程度乙型肝炎患者，同期40例健康體檢的志愿者作為對(duì)照組，采用流式細(xì)胞儀對(duì)T細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定IL-32細(xì)胞因子的水平，分別比較不同組別的變化情況。結(jié)果：乙型肝炎患者血液中CD4+T細(xì)胞的百分比及CD4+/CD8+比值均低于對(duì)照組，而CD8+T細(xì)胞亞群的百分比高于對(duì)照健康組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不同程度乙型肝炎組血清中IL-32的水平均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：乙型肝炎患者細(xì)胞免疫功能呈現(xiàn)紊亂狀態(tài)，IL-32的水平明顯增高可能是參與免疫應(yīng)答，T細(xì)胞亞群比例異常與肝臟的炎癥損傷程度具有相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】 乙型肝炎； T細(xì)胞亞群； IL-32水平

【Abstract】 Objective：To study the changes of T cell subsets and IL-32 levels in blood of different degrees hepatitis B patients，to compare and explore their effect on serum immune cells.Method：From March to December 2016，120 different degrees hepatitis B patients who were treated in our hospital were selected as observation group，40 healthy volunteers were selected as the control group.Test T cells subsets by flow cytometry instrument，and levels of IL-32 cytokines were measured by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA），and the changes of different groups were compared.Result：The percentage of CD4+T cells and CD4+/CD8+ ratio in the blood of patients with hepatitis B were lower than those of control group，while the percentage of CD8+ T cells in the blood of patiensts with hepatitis B was higher than that of control group，the differences were statistically significant（P<0.05）；the serum IL-32 levels of different degrees hepatitis B patients were higher than those in cases of control group，the differences were statistic significant（P<0.05）.Conclusion：The cellular immune function of hepatitis B virus patients is in a disorder state，the increase of IL-32 levels may be related to the severity of inflammatory response，and the degree of T cell subsets ratio anomalies associated with inflammation damage degree of liver.

【Key words】 Hepatitis B； T-cell subsets； IL-32

First-authors address：Jingshan Renhe Hospital of Hubei Province，Jingmen 431899，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.25.031

乙型肝炎主要是由肝炎病毒群的雙螺旋環(huán)狀封閉DNA病毒引起的，是導(dǎo)致死亡最為常見(jiàn)的原因之一。該病具有病程較長(zhǎng)久且易復(fù)發(fā)性等特點(diǎn)，發(fā)病率逐年呈現(xiàn)出大幅度增長(zhǎng)趨勢(shì)，患病人群較廣，本病對(duì)患者正常生活及身心健康造成較嚴(yán)重影響[1]。有報(bào)道稱(chēng)發(fā)揮關(guān)鍵的細(xì)胞是活化的Th細(xì)胞，目前較新發(fā)現(xiàn)的Th型細(xì)胞可能在肝炎發(fā)病進(jìn)程中扮演重要作用，其被異常活化后釋放出大量的相關(guān)細(xì)胞因子主要包括IL-32及IL-23等，有研究報(bào)道其患者血清中Th細(xì)胞分泌炎癥細(xì)胞因子IL-32水平發(fā)生變化是引發(fā)肝炎的重要因素[2-3]。乙型肝炎病患者由于在機(jī)體內(nèi)的免疫功能呈現(xiàn)低下?tīng)顟B(tài)、持續(xù)復(fù)制病毒可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生各種細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)及宿主免疫病理反應(yīng)復(fù)雜作用，進(jìn)一步最終造成大塊肝組織、肝細(xì)胞壞死，發(fā)展成重型乙型肝炎甚或肝功及多臟器能衰竭，病亡率較高，有報(bào)道稱(chēng)可達(dá)到40%～60%，且預(yù)后性較差[4]。但其對(duì)肝細(xì)胞的損傷并不是直接的，間接性經(jīng)過(guò)誘發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行損傷。CD4+及CD8+是近來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一種調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。可能包含免疫學(xué)作用機(jī)制，與機(jī)體T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的異常免疫反應(yīng)相關(guān)，研究報(bào)道肝炎病患者的外周血T淋巴細(xì)胞中包含CD4+、CD8+，隨著乙型肝炎嚴(yán)重程度不同，細(xì)胞水平不斷變化，對(duì)外周血中的T細(xì)胞亞群及其比例可較佳地反映機(jī)體免疫應(yīng)答的變化，進(jìn)行研究具有一定價(jià)值[5-6]。因此，以T淋巴細(xì)胞作用部位作為研究的關(guān)鍵靶點(diǎn)是目前的研究熱點(diǎn)。因此，本文也對(duì)患者治療后體內(nèi)血清中T細(xì)胞亞群、IL-32水平的變化進(jìn)行了測(cè)定。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院在2016年3-12月住院的乙型肝炎攜帶患者120例，其中男66例，女54例，平均年齡（53.5±5.7）歲，經(jīng)臨床診斷及病理報(bào)告顯示均符合《病毒性肝炎防治方案》及2010年《乙型肝炎防治指南》診斷的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7-8]。被入選患者在近幾個(gè)月內(nèi)曾未接受過(guò)抗病毒、保肝及免疫調(diào)節(jié)劑的相關(guān)治療，排除亞型肝炎病毒性感染，脂肪肝炎，酒精性肝炎及心血管類(lèi)、自身免疫性疾病。在所有病例中28例急性乙型肝炎，92例慢性乙型肝炎（輕度型35例，中度型33例，重度型24例）。同時(shí)選取40例健康體檢志愿者為對(duì)照組，其中男22例，女18例，平均年齡（54.6±4.9）歲。兩組患者的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有入選者知情同意。

1.2 方法 對(duì)入選患者在空腹?fàn)顟B(tài)下，用加入乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝劑的真空管抽取靜脈抽血10 mL，混勻防止凝結(jié)，進(jìn)行血清分離，-80 ℃冷凍保存，待用。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法（試劑盒用上海聯(lián)碩生產(chǎn)的試劑盒）SEAC全自動(dòng)酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，操作時(shí)參照其相關(guān)說(shuō)明書(shū)。采用PAS流式細(xì)胞儀（德國(guó)Partec 公司生產(chǎn)）檢測(cè)T細(xì)胞亞群（檢測(cè)盒用上海億欣生物科技有限公司），采用CellQuest軟件進(jìn)行分析測(cè)定免疫細(xì)胞CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的水平并觀察比較其變化情況[9-11]，并檢測(cè)所有入選者乙型肝炎病毒標(biāo)志物血清中IL-32、T細(xì)胞亞群相關(guān)指標(biāo)。。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 14.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同程度乙型肝炎病毒患者T細(xì)胞亞群水平與健康人群比較 急性乙型肝炎病毒患者及慢性乙型肝炎病毒患者血液中T細(xì)胞亞群血液中的CD4+的細(xì)胞百分比低于健康對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；且伴隨肝臟病變程度的加重，CD4+細(xì)胞的比例呈下降趨勢(shì)。感染乙型肝炎后患者的CD8+T細(xì)胞百分比高于健康對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且升高程度與肝臟的嚴(yán)重程度呈現(xiàn)正相關(guān)。慢性肝炎患者CD4+/CD8+比值均低于健康對(duì)照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 不同程度乙型肝炎病毒患者與健康人群IL-32水平比較 酶聯(lián)免疫檢測(cè)細(xì)胞因子水平后結(jié)果顯示，急性乙型肝炎病毒患者IL-32為（528.1±102.7）pg/mL，慢性乙型肝炎病毒患者輕、中、重度分別為（159.0±53.1）、（330.5±43.2）、（491.9±89.7）pg/mL均高于健康對(duì)照組（86.3±52.4）pg/mL，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在急性乙肝組IL-32水平最高，慢性重度乙肝組其次，且隨病情嚴(yán)重度升高，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

乙型肝炎簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝作為人體一種常見(jiàn)肝臟病，均因感染乙型肝炎病毒HBV后引發(fā)，在我國(guó)該病的發(fā)病率高，是導(dǎo)致原發(fā)性肝癌最主要發(fā)病因素。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國(guó)感染乙型肝炎病毒約占全球乙肝患者總數(shù)的1/3，全球乙肝病毒感染病患有（3.5～4.0）億人，我國(guó)乙型肝炎感染率高達(dá)60%，目前每年有近50萬(wàn)人死于肝炎引發(fā)的肝臟損害和肝癌，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康及生活質(zhì)量[12-13]。發(fā)病率的逐漸上升，目前廣泛應(yīng)用細(xì)胞毒性化療藥物治療此類(lèi)病癥，但乙肝病毒感染的患者接受化療藥物、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑時(shí)乙肝病毒再激活已成為臨床上較常見(jiàn)問(wèn)題[14]。有報(bào)道稱(chēng)乙型肝炎病可能是一種由細(xì)胞介導(dǎo)的免疫性疾病，是一種多種炎癥因子參與的炎癥反應(yīng)并且與機(jī)體的免疫反應(yīng)密切相關(guān)，淋巴細(xì)胞的介導(dǎo)作用作為細(xì)胞免疫功能紊亂造成乙型肝炎病變發(fā)展及預(yù)后的重要因素，其免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用在這一病理?yè)p傷過(guò)程中扮演重要作用[15-16]。研究顯示人體感染乙型肝炎病毒后機(jī)體免疫系統(tǒng)主要經(jīng)細(xì)胞免疫反應(yīng)對(duì)其進(jìn)行消除病變部位，但在細(xì)胞免疫清除病毒的同時(shí)將對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生炎癥，進(jìn)一步導(dǎo)致肝功能的損傷，甚至病變?yōu)楦斡不案伟．?dāng)乙型肝炎病毒感染人體后將對(duì)機(jī)體免疫器官尤其針對(duì)特異性細(xì)胞免疫造成不同程度的威脅，可能也是因乙型肝炎病毒感染造成不同臨床轉(zhuǎn)歸的主要因素[13]。因此乙型肝炎及其發(fā)病率高和隱性感染強(qiáng)的特征逐步成為研究的熱點(diǎn)之一，其發(fā)病因素主要包括遺傳因素、免疫功能、炎癥感染、代謝紊亂及內(nèi)分泌障礙等。其病因發(fā)生復(fù)雜，發(fā)病機(jī)制及乙型肝炎病毒在感染后不同轉(zhuǎn)歸的機(jī)制不完全清晰，但已知在感染乙型肝炎病毒后，其轉(zhuǎn)歸受到病毒強(qiáng)弱及宿主免疫應(yīng)答強(qiáng)弱兩方的共同影響。目前研究表明其發(fā)病與免疫功能的異常可能有關(guān)，如T淋巴免疫性細(xì)胞因子及炎性遞質(zhì)[17-18]。因人體感染HBV后將引起一系列防御功能機(jī)制，主要包括體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，將病毒消除，在機(jī)體內(nèi)激活特異性T細(xì)胞將乙型肝炎病毒消除，在HBV中具有重要性。機(jī)體免疫功能發(fā)生改變將對(duì)T細(xì)胞各亞群的絕對(duì)數(shù)值產(chǎn)生影響。T細(xì)胞作為一類(lèi)淋巴細(xì)胞，依據(jù)功能和標(biāo)志物不同，將其分為多種類(lèi)型如CD8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞，CD4+輔助性細(xì)胞，CD25+調(diào)節(jié)性細(xì)胞及記憶性T細(xì)胞等。有研究稱(chēng)在感染HBV后機(jī)體內(nèi)CD4+T細(xì)胞比例呈明顯下降趨勢(shì)，且隨病情嚴(yán)重度增加，比例逐漸降低，而CD8+T細(xì)胞呈顯著增長(zhǎng)，且隨病情進(jìn)展呈現(xiàn)出不斷增長(zhǎng)，進(jìn)而致CD4+/CD8+比值降低，而HBV-DNA高復(fù)制性進(jìn)一步加重了T細(xì)胞亞群的失衡[19]。在免疫應(yīng)答中不同類(lèi)型的T細(xì)胞共同發(fā)揮清除機(jī)體外來(lái)感染病毒。針對(duì)人體因感染HBV后發(fā)生慢性感染和長(zhǎng)期攜帶，目前認(rèn)為可能因機(jī)體HBV特異性T細(xì)胞免疫功能低下如反應(yīng)缺陷、免疫耐受等所致。因此將T細(xì)胞亞群比例作為反映細(xì)胞免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)。

研究結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，對(duì)急性乙型肝炎病毒患者及慢性乙型肝炎病毒患者血液中T細(xì)胞亞群血液中的CD4+的細(xì)胞百分比明顯降低（P<0.05），且伴隨肝臟病變程度的加重CD4+細(xì)胞的比例呈下降趨勢(shì)。而感染乙型肝炎后患者的CD8+T細(xì)胞百分比明顯增高（P<0.05），且升高程度與肝臟的嚴(yán)重程度呈現(xiàn)正相關(guān)。而CD4+/CD8+比值在乙型病毒攜帶患者中大幅度降低（P<0.05）；酶聯(lián)免疫檢測(cè)細(xì)胞因子水平后結(jié)果顯示，與健康對(duì)照組相比，急性乙型肝炎病毒患者及慢性乙型肝炎病毒患者IL-32水平均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），各病例組中急性乙肝以及輕、中、重度型慢性乙肝間IL-32差異較大，在急性乙肝組IL-32水平最高，慢性重度乙肝組其次，且隨病情嚴(yán)重度依次明顯升高。表明患者T細(xì)胞亞群、IL-32水平的變化與乙型肝炎的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。endprint

綜上所述，細(xì)胞因子可以作為乙型肝炎患者治療療效的預(yù)測(cè)因子，并且其對(duì)于評(píng)價(jià)治療療效可能具有更大的意義。炎癥感染后將會(huì)加重?cái)_亂機(jī)體免疫功能，特別針對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的具有特異性的免疫細(xì)胞。因此，對(duì)感染HBV患者進(jìn)行監(jiān)測(cè)，加強(qiáng)對(duì)T細(xì)胞亞群動(dòng)態(tài)檢測(cè)力度，有助于全面加深患者免疫功能，也為判斷患者的病情及預(yù)后提供有利依據(jù)。防止出現(xiàn)肝功能損害甚至肝衰竭以及乙肝病毒激活的發(fā)生，在使用藥物或化療等手段抗病毒治療，抑制乙肝病毒DNA大量復(fù)制，減輕乙肝病毒對(duì)肝臟進(jìn)一步造成的損害，為臨床上制定評(píng)價(jià)乙肝病毒治療效果指標(biāo)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，及時(shí)把握患者的治療時(shí)機(jī)，減少患者死亡率，在臨床治療中具有一定臨床指導(dǎo)價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1]滿(mǎn)昌軍，董香玉.外周血T細(xì)胞亞群、IL-32、IL-6水平在乙型肝炎患者的表達(dá)及相關(guān)性分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2014，18（1）：62-65.

[2] Kawsar H I，Shahnewaz J，GopalakrishnaK V，et al.Hepatitis B re-activation in cancer patients：role of prechemotherapy screening and antiviral prophylaxis[J].Clin Adv Hematol Oncol，2012，10（6）：370-378.

[3]楊茜，張平安.乙型肝炎患者T細(xì)胞亞群、IL-32水平的變化及其臨床意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2017，14（1）：3-8.

[4]鞏彥平，張新路.乙型肝炎患者外周血T細(xì)胞亞群、IL-32、IL-6水平的變化及臨床意義[J]. 吉林醫(yī)學(xué)，2012，32（29）：6096-6100.

[5]魯曉娟，王娟，白瑩立，等.紅細(xì)胞免疫指標(biāo)與T淋巴細(xì)胞亞群及免疫球蛋白水平在慢性HBV感染中的價(jià)值研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2016，26（23）：5351-5353.

[6] Caroleo B，Staltari O，Gallelli L，et al.Pegylated interferon/telbivudine sequential therapy in Hepatitis Be antigen negative severe chronic hepatitis Bpatient[J].Res Med Sci，2013，18（6）：368-369.

[7] Tan A，Koh S，Bertoleti A，ImmuneresponseinhepatitisBvirusinfection[J].Cold Spring Harb Perspect Med，2015，15（8）：214-218.

[8]李彩東，楊勇衛(wèi)，李惠軍，等.乙型肝炎病毒攜帶者外周血FN-γ、IL-32和IL-6的變化及臨床相關(guān)性[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36（18）：2622-2624.

[9]李冶剛，張超飛，郭希邦.慢性乙型肝炎病毒感染者外周血淋巴細(xì)胞亞群的變化及檢測(cè)意義[J].中國(guó)慢性病預(yù)防與控制，2015，23（10）：775-776.

[10]王輝，高建鵬，游晶.慢性乙型肝炎病 毒感 染者外周血T細(xì)胞亞群變化與其血清HBVDNA的水平分析[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐，2013，21（6）：418-422.

[11]黃 靜，李德新，周亦倫.慢性乙型肝炎血液透析患者T淋巴細(xì)胞亞群變化及其影響因素[J].中國(guó)血液凈化，2013，12（7）：375-379.

[12]王慰，楊莉，高恒波，等.不同血清HBV DNA 載量慢性乙型肝炎病毒攜帶者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化[J].實(shí)用肝臟病雜志，2015，18（1）：74-75.

[13]王慰，鄭歡偉，任桂芳，等.慢性HBV 感染及其相關(guān)肝病患者外周血T細(xì)胞亞群的變化[J].臨床肝膽病雜志，2013，29（4）：276-279.

[14]劉坤，楊亞萍，刁青.慢性重型乙型肝炎患者外周血DNT細(xì)胞及T細(xì)胞亞群的表達(dá)及意義 [J].河北醫(yī)藥，2014，35（5）：2248-2253.

[15]黃靜，李德新，周亦倫，等.慢性乙型肝炎血液透析患者T淋巴細(xì)胞亞群變化及其影響因素[J].中國(guó)血液凈化，2013，12（7）：375-380.

[16]李彩東，陳錫蓮，段正軍，等.慢性HBV感染者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化及其與白細(xì)胞介素-15、白細(xì)胞介素-16 的相關(guān)性分析[J].臨床肝膽病雜志，2015，31（11）：1858-1861.

[17] Caroleo B，Staltari O，Gallelli L，et al.Pegylated interferon/telbivudine sequential therapy in Hepatitis Be antigen negative severe chronic hepatitis Bpatient[J].J Res Med Sci，2013，18（4）：368-369.

[18]陸玉蕾，王曉晶，嚴(yán)偉明，等.TCRγδ+CD3+CD4-CD8-雙陰性T細(xì)胞在3型鼠肝炎病毒誘導(dǎo)的小鼠慢性病毒性肝炎發(fā)病中的作用[J].實(shí)用肝臟病雜志，2014，15（1）：339-342.

[19]陳晨，蔣道榮，張弦，等.慢性乙型肝炎患者調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞表達(dá)水平研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2014，24（32）：4714-4716.

（收稿日期：2017-03-17） （本文編輯：康玥）endprint