免疫組化染色對病理技術(shù)質(zhì)量控制的影響分析

楊梅

【摘要】 目的：分析研究免疫組化染色對病理技術(shù)質(zhì)量控制的影響。方法：選取2015年1月-2016年1月筆者所在醫(yī)院收治的需要進(jìn)行肝臟穿刺組織的80例患者作為此次研究對象，將其隨機(jī)分為觀察組與對照組，每組40例。觀察組患者進(jìn)行免疫組化染色；對照組患者進(jìn)行常規(guī)HE染色。對比觀察組兩組患者的切片優(yōu)良率、確診率。結(jié)果：行免疫組化染色的觀察組患者切片優(yōu)良率為97.50%，確診率為95.00%；行常規(guī)HE染色的對照組患者切片優(yōu)良率為80.00%，確診率為75.00%；組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：給予需要進(jìn)行肝臟穿刺組織的患者進(jìn)行免疫組化染色，能顯著提高切片質(zhì)量與確診率，應(yīng)在臨床上推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 免疫組化染色； 肝臟穿刺組織； 病理技術(shù)質(zhì)量控制

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.19.035 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 B 文章編號 1674-6805（2017）19-0072-02

病理技術(shù)作為病理學(xué)診斷中最重要的一部分，在任何一個環(huán)節(jié)都應(yīng)做到無任何差錯，切片質(zhì)量的好壞直接關(guān)系著醫(yī)生診斷的正確性，所以切片的質(zhì)量對于患者來說具有重要的意義[1]。隨著社會的發(fā)展，醫(yī)療水平的提高，在免疫組技術(shù)的全面實行下，切片質(zhì)量也得到了相應(yīng)的改善[2]。肝臟腫瘤是常見的腫瘤疾病，其嚴(yán)重威脅著患者的生命健康和生活質(zhì)量，若能及時確診進(jìn)行治療則治愈的幾率也會相對較大。在本文研究中，給予40例需進(jìn)行肝臟穿刺的患者使用免疫組染色切片，在切片優(yōu)良率及確診率上均取得了較好的成果，詳細(xì)內(nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月-2016年1月筆者所在醫(yī)院收治的需要進(jìn)行肝臟穿刺組織的80例患者作為此次的研究對象，將其隨機(jī)分為觀察組與對照組，每組40例。以上患者均知曉并同意參與此次研究。觀察組患者中，男20例，女20例；年齡35～80歲，平均（55.23±5.33）歲；其中，濾泡樹突細(xì)胞肉瘤2例，肝細(xì)胞肝癌13例，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌10例，轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤5例，血管瘤10例。對照組患者中，男21例，女19例；年齡35～80歲，平均（55.33±5.23）歲；其中，濾泡樹突細(xì)胞肉瘤3例，肝細(xì)胞肝癌12例，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌11例，轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤5例，血管瘤9例。兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），可以進(jìn)行比較。

1.2 方法

觀察組患者給予免疫組化染色。首先將切片進(jìn)行脫蠟，在常溫下放入3%的雙氧水中浸泡20 min；浸泡完畢用PBS進(jìn)行沖洗，需清洗三次以上，清洗時間要大于15 min；將700 ml pH 6.0的檸檬酸緩沖液倒入1000 ml的燒杯中，加熱至沸騰；將記HBsAg、HBcAg、ki-67、CK19抗體的切片均放入燒杯中并做好標(biāo)記，加熱15 min后取出；在常溫下冷卻后用pH 7.4的PBS對切片進(jìn)行清洗，次數(shù)與時間同上；所有切片均給予一抗處理，放置于4 ℃的冰箱內(nèi)過夜孵育；用pH 7.4的PBS進(jìn)行沖洗，次數(shù)時間同上，再給予切片滴加二抗，放置于常溫下孵育，時間為10 min；最后一次用pH 7.4的PBS進(jìn)行沖洗，次數(shù)時間同上，5～10 min的DAB顯色；水洗后用蘇木精進(jìn)行襯染，用脫水透明中型樹膠進(jìn)行封固；將陰性陽性設(shè)置好以便針對不同的抗體。

對照組患者給予常規(guī)HE染色。將剛離體的肝臟穿刺組織放入4%的中性甲醛中，固定4 h；AF液浸泡1 h，75%乙醇浸泡1 h，80%乙醇浸泡1 h，90%乙醇浸泡1 h，95%乙醇浸泡1 h，100%乙醇I浸泡1 h，100%乙醇Ⅱ浸泡1 h，二甲苯I 浸泡20 min， 二甲苯Ⅱ浸泡30 min；蠟缸I浸泡1 h，蠟缸Ⅱ浸泡1 h，蠟缸溫度維持在60℃；將烤箱設(shè)置成60℃，進(jìn)行2 h的烤片；需要注意的是，在取材時若有I例標(biāo)本出現(xiàn)了多條穿刺組織則應(yīng)該將每一條組織都用濾紙包好放入脫水盒中，以確保每條組織的最大面為切片。

1.3 觀察指標(biāo)

對比兩組患者切片優(yōu)良率及確診率。免疫組化染色切片的優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn)為：結(jié)構(gòu)完好無損壞，能精確定位陽性物質(zhì)，背景無干擾，未出現(xiàn)非特異性著色等情況，未出現(xiàn)脫片等現(xiàn)象。常規(guī)HE染色切片的優(yōu)良標(biāo)準(zhǔn)為：肝臟穿刺組織的厚薄程度一致，結(jié)構(gòu)完全，無裂痕損壞等情況，細(xì)胞形態(tài)清晰不收縮，染色明顯，能較好的進(jìn)行核物質(zhì)的對比。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 20.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者切片優(yōu)良率比較

觀察組患者中優(yōu)良切片39例，切片優(yōu)良率為97.50%；對照組患者中優(yōu)良切片32例，切片優(yōu)良率為80.00%；組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩組患者確診率比較

觀察組患者確診率為95.00%（38例）；對照組患者確診率為75.00%（30例），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

隨著信息化時代的到來，不僅是醫(yī)護(hù)人員知曉病理技術(shù)質(zhì)量控制的重要性，就連較多的患者也認(rèn)識到了疾病的確診是有效治療的第一步[3]。而高質(zhì)量的切片不僅影響著醫(yī)生的診斷，還是決定患者生命安全的一個重要因素。

3.1 本文研究結(jié)果

從本文研究中可知，使用免疫組化染色的觀察組患者，切片優(yōu)良率高達(dá)97.50%，確診率為95.00%；而使用常規(guī)HE染色的對照組患者，切片優(yōu)良率僅為80.00%，確診率為75.00%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。說明對切片采用免疫組化染色的方法，能夠有效提高診斷的準(zhǔn)確性，使患者能少走彎路，并且可以得到更好更快更全面的治療[4]。endprint

3.2 免疫組化的原理

免疫組織化學(xué)染色原理為酶聚合物與二抗結(jié)合形成多聚螯合物后可以再與一抗結(jié)合，從而使抗原抗體的信號得到放大，并且在多聚物中不會形成鏈霉菌抗生物素蛋白，進(jìn)而組織細(xì)胞內(nèi)源性生物素所造成的背景染色也不會出現(xiàn)，所以增加了優(yōu)良切片的成功率[5]。

3.3 免疫組化的取材環(huán)節(jié)

在進(jìn)行免疫組化染色的過程中，第一步也是最重要的一步就為取材環(huán)節(jié)，在這個環(huán)節(jié)上容易出現(xiàn)以下常見的問題，若無法規(guī)避此類問題，則會極大地影響切片效果。（1）選取病變組織的體積厚薄程度不一或者病變組織已發(fā)生變性、壞死等情況，均會影響制片的質(zhì)量，也就是選取的組織機(jī)體不適宜；（2）操作人員對標(biāo)本的描述過于粗略或者對標(biāo)本的組織部位記載、描述均存在差異也會嚴(yán)重影響切片的質(zhì)量；（3）操作人員在取材后沒有對標(biāo)本進(jìn)行及時的處理或保存，導(dǎo)致標(biāo)本被污染或質(zhì)變，以致于影響切片的效果。因此，操作人員應(yīng)在第一步驟時就嚴(yán)格把控切片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

3.4 組織切片的問題分析

經(jīng)過后期固定后，新鮮的組織才會將原來的細(xì)胞形態(tài)保存下來，若沒有得到固定，組織則會發(fā)生自溶等情況（細(xì)胞內(nèi)含有多種大量的水解酶，在細(xì)胞缺氧的狀態(tài)下，水解酶就會將蛋白質(zhì)分解破壞）。所以，在手術(shù)后獲取到的組織標(biāo)本，需要盡快將其放置于固定液中，使其得到充分的固定，固定時間分為兩種：（1）4～6 h為一般的小樣本固定時間；（2）18～24 h或以上為大樣本的固定時間。

3.5 免疫組化試劑的問題分析

在免疫組化染色中需要有一組良好的染色試劑，其決定著染色的效果，因此，浸水、脫蠟、脫水、透明用到的二甲苯、酒精等試劑一定要及時地補(bǔ)充和更新[6]。每一種試劑的質(zhì)量是否穩(wěn)定，對臨床病理的診斷都能直接產(chǎn)生較大的影響。常出現(xiàn)的問題有：（1）試劑使用的過程中保存不當(dāng)，容易發(fā)生揮發(fā)等情況，使其純度降低；（2）對長時間不使用的制劑沒有做到更新，也沒有及時將缺漏的制劑進(jìn)行添加，使切片工作被延滯，從而導(dǎo)致組織切片質(zhì)量的降低，直接影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，在日常工作中免疫組化試劑一定要定期更換，在采購、使用以及配置的過程中嚴(yán)格把關(guān)，使所有的切片質(zhì)量都能得到保障[7]。

3.6 免疫組化染色的問題與對策

免疫組化質(zhì)量控制工作的關(guān)鍵步驟為：（1）抗原的高壓修復(fù)，在以往的研究中得知，影響染色結(jié)果的最大因素就為抗原修復(fù)，其中，修復(fù)不夠（溫度低和時間短）和修復(fù)不當(dāng)是其最頑固和最突出的問題，最終會導(dǎo)致假陰性片或無色片等嚴(yán)重情況的出現(xiàn)；（2）成立免疫組化抗原陰性和陽性對照的化學(xué)實驗室，設(shè)置對照片是檢驗免疫組化染色結(jié)果可信性的重要手段，在免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化中是極其必要的，也是最關(guān)鍵的一步，制定一系列質(zhì)量技術(shù)指標(biāo)也是醫(yī)務(wù)工作者自我保護(hù)的一種方式；（3）在免疫組化學(xué)染色的過程中，要求操作人員必須按照規(guī)定嚴(yán)格執(zhí)行操作步驟，這是保證染色可重復(fù)性和質(zhì)量穩(wěn)定性的前提[8]。

綜上所述，對切片進(jìn)行免疫組化染色，效果顯著，極大地提高了診斷的準(zhǔn)確率，促使病理技術(shù)的質(zhì)量控制能上升到更高一層，應(yīng)進(jìn)行大力推廣實施。

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（收稿日期：2017-03-19）endprint