結核性腦膜炎結核分枝桿菌檢測方法的研究進展

盧運照　韋鳳省

【摘要】 結核分枝桿菌是結核性腦膜炎的主要致病菌，該病菌可以通過侵犯人體各個器官，不斷加重病情。對結核分枝桿菌進行檢測，盡早確診病情，對患者予以針對性治療，是提升患者治療效果的關鍵。但是該病菌的檢測難度較大，一直是醫(yī)學難點。近年來關于結核性腦膜炎結核分枝桿菌檢測方法的研究越來越多，本研究對相關研究資料進行整理分析，對相關診斷結果進行綜述，以期為結核性腦膜炎的診斷做出科學指導，提升診斷準確性。

【關鍵詞】 結核性腦膜炎； 結核分枝桿菌； 檢測方法

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.23.085 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805（2017）23-0163-02

結核性腦膜炎是一種腦膜和脊膜的非化膿性炎癥，主要由結核分枝桿菌引起，其發(fā)病率較高，在各種結合性疾病患者當中有超過3.5%～10.5%的患者發(fā)生結核性腦膜炎[1]。該病的診斷準確性低，各種診斷方法對于結核分枝桿菌的診斷靈敏性都不高，且患者沒有明顯的臨床癥狀，因此很多患者都不能得到及時、有效的治療，導致病情發(fā)生惡化，發(fā)展成為惡性病變，危及到其生命安全。腦脊液涂片抗酸染色 、結核分枝桿菌培養(yǎng)、結核分枝桿菌DNA檢測是該病的主要檢測方法[2]。

1 結核性腦膜炎結核分枝桿菌檢測的價值

結核性腦膜炎是一種對人體各項身體功能損害極大的一種疾病類型，該病屬于一種慢性疾病，發(fā)病極為隱匿，病程長，由結核分枝桿菌對人體的各個神經器官逐步侵蝕發(fā)展[3]。不同患者的臨床癥狀也各不相同，且往往并沒有特異性，主要表現(xiàn)為頭痛、發(fā)熱、乏力、食欲下降、精神狀況差等[4]，這些癥狀常常被患者忽略，不能成為疾病診斷的有效依據。對患者進行臨床檢測是診斷該病的主要方法。結核分枝桿菌是結核性腦膜炎的病原菌，最早由德國細菌學家Robert Koch發(fā)現(xiàn)，并用實驗證明其為結核性疾病的致病菌[5]。通過臨床檢測，在人體中檢測出該種病原菌則可確診病情，但是該種病菌診斷難度大，漏診、誤診發(fā)生率很高，這直接導致我國結核性腦膜炎的疫情發(fā)生嚴重惡化，每年死于結核性腦膜炎的患者逐漸增多[6]。隨著結核性腦膜炎發(fā)病率的逐年上升，引起了我國醫(yī)學界眾多學者的關注，人們逐漸認識到結核分枝桿菌檢測的價值，紛紛開始投入到結核性腦膜炎結核分枝桿菌檢測研究當中[7]，以期發(fā)現(xiàn)安全有效的檢測方法，提升該種疾病的診出率，減輕疾病對患者造成的危害。

2 結核性腦膜炎結核分枝桿菌檢測方法

在以往臨床診斷當中腦脊液涂片抗酸染色檢測是對結核性腦膜炎的主要診斷方法；隨著診斷方法的增加，結核分枝桿菌培養(yǎng)也被應用于臨床檢測當中，成為結核性腦膜炎最權威的診斷方法[8]；近年來，結核分枝桿菌DNA檢測也逐漸應用于臨床診斷當中，并發(fā)展成為診斷金標準[9]。本研究對各種診斷方法進行研究分析。

2.1 腦脊液涂片抗酸染色檢測

腦脊液涂片抗酸染色檢測結果為陽性則可以對判定患者為結核性腦膜炎。此種檢測方法最早由埃利希（F.Ehrlich）發(fā)明，他在1882年進行實驗研究發(fā)現(xiàn)此種檢測方法并將其應用于臨床檢測當中，但是診斷準確性并不理想[10]。齊爾（Ziehl）對該種方法進行改進，其中齊爾-尼爾森（Ziehl-Neelsen）染色法和齊爾-加貝特（Ziehl-Gabbet）染色法是最具代表性的腦脊液涂片抗酸染色方法，臨床當中多采用齊爾-尼爾森染色法對患者的結核分枝桿菌進行檢測[11]。有研究對此中檢驗方法進行了研究分析，指出該種檢測方法具有局限性。齊爾-尼爾森染色法要求患者每毫升腦脊液中至少有5000～50 000個結核分枝桿菌[12]。但是大多數患者腦脊液中的結核桿菌數量并不能滿足檢測要求，因此其檢測準確性不能有效保證。Thwaites對其檢測方法進行改進，采用腰穿抽取腦脊液的方法對患者進行檢測，檢測陽性率大大提升[13]。但是有研究指出該種檢測方法一次診出率水平很低，大多數患者要經過幾次檢測才能做出準確診斷，而多次腰穿會增加患者發(fā)生并發(fā)癥的風險，對患者的生命安全造成嚴重威脅。基于該種診斷方法診斷準確性低、安全性不理想等幾方面考慮，很多學者提出對此種診斷方法進行改進，以提升其診斷準確性，降低診斷本身對患者造成的身體損害[14]。

近年來隨著醫(yī)學診斷水平的不斷發(fā)展，有研究者發(fā)現(xiàn)在對患者的腦脊液進行檢測前，使用Triton X-100處理液對其進行處理后在進行檢測[15]，能夠有效提升其檢測的準確性，我國采用該種檢測方法后，結核分枝桿菌檢出率達到100%[16]。

2.2 結核分枝桿菌培養(yǎng)

結核分枝桿菌培養(yǎng)方式是目前檢測結核性腦膜炎分支桿菌應用最多的一種方法，曾在臨床當中長期應用，診斷價值較好[17]。結核分枝桿菌培養(yǎng)主要有液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法兩種方法。

固體培養(yǎng)法耗時長，培養(yǎng)往往需要3周，培養(yǎng)后需要進行敏感性試驗，而試驗的時間大約為4周，整個培養(yǎng)過程近兩個月[18]。采用此種方法進行檢驗，往往會延誤患者的病情診治時間，最終可能使患者錯失最佳治療時間。因此該種方法不便于在臨床當中推廣運用。

液體培養(yǎng)法，通過在液體中分支桿菌進行培養(yǎng)，分支桿菌的生長速度快，且藥敏試驗時間短，具有較高的臨床應用價值[19]。此種方法在臨床當中的應用較多。以往臨床當中多應用L-J培養(yǎng)方法，現(xiàn)階段臨床當中應用較多的是BACTEC、MGIT960培養(yǎng)系統(tǒng)及MODS技術。

Baveja曾對BACTEC的臨床應用價值進行研究部分析，研究發(fā)現(xiàn)此種培養(yǎng)方法在臨床中的應用價值明顯高于PCR檢測和傳統(tǒng)的L-J培養(yǎng)方法[20]。

有研究指出MGIT960培養(yǎng)系統(tǒng)是應用價值最高的一種檢驗系統(tǒng)[21]。有研究曾對MGITTM 960快速培養(yǎng)系統(tǒng)在結核病診斷中的應用價值進行系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)MGITTM 960快速培養(yǎng)系統(tǒng)檢測陽性率為57.2%，明顯高于傳統(tǒng)的L-J培養(yǎng)方法[12]。有研究指出MGIT960培養(yǎng)系統(tǒng)的臨床應用價值明顯高于其他檢測系統(tǒng)[22]。

MODS技術是在液態(tài)培養(yǎng)的基礎上使用顯微鏡對藥物敏感型進行檢測的方法，該種檢測方法的優(yōu)勢在于能夠有效降低報陽時間，一般8～14 d就可以完成檢測。

2.3 結核分枝桿菌DNA檢測

結核分枝桿菌DNA檢測是一種新型檢測技術。聚合酶鏈反應技術（PCR）是對分支桿菌進行DNA檢測的主要方法，該種檢測方法的特異性較好，可達到98%[23]。PCR的方法有很多，主要包括多重PCR技術、巢式PCR技術、環(huán)介導等溫擴增技術（LAMP）、利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增技術（Xpert MTB/RIF）幾種類型。每種檢測技術各有其優(yōu)勢，多重PCR技檢測成本低，檢測效率高，敏感性強；巢式PCR技術在常規(guī)PCR技術基礎上進行改進，提升了循環(huán)次數，因此其檢測敏感性也得到了極大的提升。有研究指出此種檢測方法的檢測敏感性可達到100%[24]。而且該種方法操作簡單，檢測步驟少，避免了檢測過程中的交叉污染，能夠有效避免假陽性率。LAMP技術實現(xiàn)了常溫下對分支桿菌進行檢測，且檢測的經濟價值高，反應時間短，其檢測效果明顯優(yōu)于多重PCR技術和巢式PCR技術。Xpert MTB/RIF技術是近年來應用較多的一種檢測技術，有研究曾對其臨床應用價值進行研究，以180例檢測者為研究對象進行研究分析，對比Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960檢測準確性。研究發(fā)現(xiàn)Xpert MTB/RIF的診斷效果明顯優(yōu)于其他檢測方法。雖然該種檢測效果得到一致肯定，但是其檢測費用較高，因此并不作為臨床檢測的首要選擇[25]。

關于結核性腦膜炎分支桿菌的檢測已經成為醫(yī)學當中關注的一個重點問題，提升分支桿菌的檢測準確性能夠盡快確定患者的病情，并指導臨床醫(yī)生對患者盡快展開有效的治療，從而提升患者的臨床治療效果。不可否認，近年來關于結核性腦膜炎分支桿菌的診斷技術不斷發(fā)展，已經取得了突破性的進展，但是現(xiàn)階段診斷準確性仍不理想，有很多患者由于誤診、漏診錯失最佳治療時機。因此關于結核性腦膜炎分支桿菌的檢測準確性還有待于進一步提升。相信在未來的研究發(fā)展中會有更行之有效的檢測方法應用于臨床當中。

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（收稿日期：2017-04-14）