腹腔鏡直腸癌根治術對進展期直腸癌患者微轉移的影響

何志剛+何永忠+孔凡東

【摘要】 目的：探討腹腔鏡直腸癌根治術對進展期直腸癌患者微轉移的影響。方法：選取2013年

4月-2017年4月本院普外科收治的160例進展期直腸癌患者作為研究對象，按照手術方式分為腔鏡組與開腹組，各80例。采用RT-PCR方法檢測所有入選者術前和術后外周血的CK20 mRNA，對其進行定性檢測和定量檢測。比較手術前后兩組外周血CK20 mRNA陽性率，比較腔鏡組不同TNM分期患者手術前后外周血CK20 mRNA的OD值。結果：兩組術前及術后CK20 mRNA陽性率比較，差異均無統計學意義（P>0.05）。腔鏡組Ⅰ、Ⅱ期與Ⅲ期患者術后外周血CK20 mRNA的OD值與術前比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；術前和術后，Ⅰ、Ⅱ與Ⅲ期CK20 mRNA的OD值均依次遞增（P<0.05）。結論：腹腔鏡手術并不增加進展期直腸癌的微轉移風險，微轉移的數量只與腫瘤的進展程度有關。

【關鍵詞】 腹腔鏡； 直腸癌根治術； 進展期直腸癌； 微轉移

【Abstract】 Objective：To investigate the effect of laparoscopic radical resection of rectal cancer on micrometastasis in patients with advanced rectal cancer.Method：A total of 160 patients with advanced rectal cancer were enrolled in this study from April 2013 to April 2017 in our hospital and they were divided into laparoscopic group and laparotomy group according to the surgical method， 80 cases in each group.RT-PCR was used to detect CK20 mRNA in preoperative and postoperative peripheral blood samples with qualitative and quantitative detection.The positive rate of CK20 mRNA in the peripheral blood of two groups was compared，the OD value of the CK20 mRNA in the peripheral blood of patients with different TNM staging in laparoscopic group were compared.Result：There were no statistical significances in the positive rate of CK20 mRNA of two groups before and after operation（P>0.05）.Compared before and after operation，there were no statistical significances in the OD value of CK20 mRNA in peripheral blood of patients with stageⅠ，Ⅱ and Ⅲ in laparoscopic group（P>0.05）；but preoperative and postoperative，the OD value of CK20 mRNA in stage Ⅰ，Ⅱ and Ⅲ were gradually increased（P<0.05）.Conclusion：Laparoscopic surgery can not increase the risk of micrometastasis in advanced rectal cancer，the number of micrometastases is only related to the degree of tumor progression.

【Key words】 Laparoscopy； Rectal cancer radical surgery； Advanced rectal cancer； Micrometastasis

First-authors address：The Shawan Peoples Hospital in Panyu District of Guangzhou City，Guangzhou 511400，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.21.039

微轉移通常是指隱性轉移，大多數轉移灶都是由微轉移發展而來[1]。近年來，越來越多的胃腸腫瘤手術在腹腔鏡下開展，因此腔鏡下直腸癌根治術是否會對進展期直腸癌患者的微轉移產生影響開始受到臨床醫生的關注。本研究以本院普外科160例進展期直腸癌患者作為研究對象，用CK20作為血液微轉移的標記物，對上述問題進行討論，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年4月-2017年4月本院普外科收治的160例進展期直腸癌患者作為研究對象，按照手術方式分為腔鏡組與開腹組，各80例。入選標準：（1）術前經直腸鏡、病理檢查確診為直腸癌；（2）術前經影像學檢查確定TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期；（3）術前評估ASA≤3分。排除標準：（1）合并其他惡性腫瘤；（2）接受過放、化療；（3）既往有其他腹部手術史；（4）術前TNM分期為Ⅳ期。腔鏡組中，男42例，女38例，年齡37～73歲，平均（58.64±6.59）歲，Ⅰ期9例，Ⅱ期45例，Ⅲ期26例；開腹組中，男45例，女35例，年齡39～77歲，平均（59.13±6.74）歲，Ⅰ期12例，Ⅱ期47例，Ⅲ期21例。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。endprint

1.2 方法

1.2.1 手術原則 嚴格遵循直腸癌根治原則和手術無瘤原則，所有入選病例的手術過程均由同一組醫師實施。

1.2.2 標本采集 所有患者手術前1 d于清晨空腹狀態下采集肘靜脈血5 mL，腔鏡組在氣腹結束后采集肘靜脈血5 mL，開腹組在手術后立即采集肘靜脈血5 mL。EDTA抗凝，離心去上清后-80 ℃冰箱保存。

1.2.3 CK20 mRNA檢測 RT-PCR方法檢測，步驟如下：（1）單核細胞分離：標本解凍，取2.5 mL后置于無菌管中，加入Tris 250 μL，12 000 r/min離心5 min后去上清，沉淀物加入PBS緩沖液500 μL懸浮，繼續12 000 r/min離心5 min后去上清；（2）提取RNA：加入RNA提取液，75%乙醇200 μL漂洗，離心后吸干，無水酶溶解RNA；（3）RT-PCR反應：70 ℃預變性5 min，冰浴防止復性，取RT反應液18 μL、逆轉錄酶1 μL、RNasin 1 μL加入無菌離心管并混勻，在每個反應管中加入20 μL上述反應液和預變性的RNA 5 μL，37 ℃水浴30 min；（4）PCR擴增：取PCR反應液43 μL、Taq酶2 μL置于無菌離心管混勻，加入RT-PCR反應產物進行擴增，按變性、退火、延伸的步驟35個循環，最終于4 ℃保存。

1.2.4 產物分析 （1）定性分析：將產物以2%瓊脂糖凝膠電泳，紫外成像儀下觀察，于370 bp處呈清晰條帶狀者即為陽性，反之為陰性；（2）定量分析：取陽性產物，采用圖像分析儀器測定其光密度OD值，分析其產物量。

1.3 統計學處理 采用SPSS 19.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用F檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組手術前后外周血CK20 mRNA陽性率比較 兩組術前及術后CK20 mRNA陽性率比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；腔鏡組術后與術前外周血CK20 mRNA陽性率比較，差異無統計學意義（P>0.05）；開腹組術后與術前外周血CK20 mRNA陽性率比較，差異無統計學意義（P>0.05），見表1。

2.2 腔鏡組不同TNM分期患者手術前后外周血CK20 mRNA的OD值比較 手術前腔鏡組39例CK20 mRNA陽性者中，Ⅰ期8例、Ⅱ期12例、Ⅲ期19例；手術后42例CK20 mRNA陽性者中，Ⅰ期

9例、Ⅱ期14例、Ⅲ期19例。腔鏡組Ⅰ、Ⅱ與Ⅲ期患者術后外周血CK20 mRNA的OD值與術前比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；術前和術后，Ⅰ、Ⅱ與Ⅲ期CK20 mRNA的OD值均依次遞增，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

微轉移是指以常規手段很難檢測出來的惡性腫瘤轉移灶，通常是直徑都不到2 mm[2]。文獻[3]研究表明，微轉移對惡性腫瘤術后的復發與預后具有重要意義。與大體腫瘤最大的不同在于微轉移灶缺乏血液供應，因而微轉移的腫瘤細胞可以長期處于休眠狀態，僅依靠滲透作用攝取養分，直至腫瘤細胞被免疫監控識別清除或逃避監控獲得腫瘤滋養血管的血供開始生長[4]。盡管近年來腹腔鏡手術有了較大的發展，但是這種手術方式對于直腸癌根治的效果和安全性卻一直都存在爭議。是否會因術中的創傷、炎癥等因素導致微轉移灶的腫瘤細胞逃避免疫監視而獲得滋養血供，目前不得而知。

CK20本身就是較為敏感的檢測血液中腫瘤細胞的標記物，經RT-PCR反應后能夠在106～107個正常細胞中檢出一個腫瘤細胞[5-10]，因此以CK20 mRNA作為惡性腫瘤微轉移灶的檢測手段具有較高的準確性和可靠性。

腹腔鏡手術與開腹手術最大的區別在于操作空間和視野。腹腔鏡手術的所有操作均是建立在CO2氣腹下，目前尚未見CO2氣腹可以促進腫瘤細胞擴散、轉移的報道；手術中的影像系統在放大視野后使醫生的操作更加精細，對組織的刺激更小；而超聲刀對組織的及時凝固也降低了腫瘤散播的機會。本研究結果顯示，兩組術前及術后的CK20 mRNA陽性率比較，差異均無統計學意義（P>0.05），說明腹腔鏡手術并不造成直腸癌根治患者的術中微轉移。

有學者認為，直腸癌微轉移程度與其分期具有一定的關系[11-18]。本研究也發現，腔鏡組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者術后外周血CK20 mRNA的OD值與術前比較，差異均無統計學意義（P>0.05）；術前和術后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期CK20 mRNA的OD值均依次遞增（P<0.05），也說明腫瘤細胞的微轉移隨著直腸癌的進展越來越多。

綜上所述，本研究并未發現腹腔鏡手術能增加進展期直腸癌的微轉移風險，其微轉移的數量只與腫瘤的進展程度有關。

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（收稿日期：2017-06-16） （本文編輯：鄧朝陽）endprint