微柱凝膠法交叉配血次側(cè)凝集原因分析及臨床意義

李妙珊+伍昌林+周雪敏

[摘要]目的 分析輸血前微柱凝膠法交叉配血次側(cè)凝集的原因及意義，為臨床安全輸血提供參考。方法 統(tǒng)計(jì)2013年1月～2016年5月我院微柱凝膠法次側(cè)交叉配血凝集患者，按照病種分組分析交叉配血次側(cè)凝集的比例，次側(cè)配血凝集率與輸血次數(shù)、輸血反應(yīng)的相關(guān)性；采用抗人球蛋白試驗(yàn)、放散試驗(yàn)、抗體篩選鑒定、藥物性抗體篩查及RBC形態(tài)結(jié)構(gòu)分析等方法研究交叉配血次側(cè)凝集的原因。結(jié)果 調(diào)查分析微柱凝膠卡交叉配血45 672人次，其中325例次側(cè)配血凝集，凝集率為0.71%；次側(cè)配血凝集主要病種為血液系統(tǒng)疾病、ICU重癥及急診搶救、燒傷等；血液病患者次側(cè)配血凝集率與輸血次數(shù)、輸血反應(yīng)率、輸血效率等均成正相關(guān)性（P<0.05）；ICU重癥、急診和燒傷等患者次側(cè)配血凝集率與輸血次數(shù)、輸血反應(yīng)率、輸血效率等無相關(guān)性（P>0.05）；次側(cè)配血凝集原因主要有：患者紅細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化、血漿蛋白影響、供者血清同種抗體、藥物性抗體、加樣量不當(dāng)及技術(shù)因素等；由免疫因素與非免疫因素引起的次側(cè)配血凝集原因的分類比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 微柱凝膠法交叉配血次側(cè)凝集的原因很多，非免疫因素導(dǎo)致交叉配血次側(cè)凝集比例較高，輸血反應(yīng)與輸注無效率較低；而免疫因素引起的次側(cè)凝集比例低，但輸注無效率高，且較易引起輸血反應(yīng)。

[關(guān)鍵詞]交叉配血；次側(cè)凝集；原因分析；臨床意義

[中圖分類號] R446.61 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）10（a）-0014-04

[Abstract]Objective To evaluate the agglulination reasons for the minor cross-matching，to provide reference for the safety of clinical blood transfusion.Methods Cases of patients with side crosss-matching agglulination were chosen from January 2013 to May 2016 in our hospital，according to the disease group，to investigate the correlation of the proportion of side cross-matching agglulination and the numbers of blood transfusion and the blood transfusion reaction.We had analysed the reasons of the side crossmatching agglulination by the antiglobulin test，antibodies identification，drug antibody screening and identification，and the size of RBC and morphology，combined with the clinical blood transfusion.Results 45 672 cases were investigated by micro-column gel way，ther were 325 cases side agglutination，the agglutination rate was 0.71%.The patients with side cross-matching agglulination mainly included haematology patients，ICU critical patients and emergency and burn patients.The agglulination rates of the haematology patients associated with the numbers of blood transfusions，there were positive correlation between the times of blood transfusion reaction and the times of blood transfusion（P<0.05），but there were no relevance between the agglulination rates for the patients in the ICU and emergency room and the times of blood transfusion（P>0.05）.The reasons of side cross-matching agglulination mainly included，drugs antibodies，plasmas proteins，erythrocyte alloantibody of donor，the changes of the erythrocyte morphology，improper sample，the bad blood anticoagulation，the old red cell，insufficient washing cell，and so on.There were significant difference between the cases caused by immune and non immune factors in the side crosss-matching agglulination（P<0.05）.Conclusion The agglulination reasons of the side cross-matching have many types，the agglulination rates caused by non immune factors，are the highest in the clinical blood transfusion，which show low transfusion reaction rate and infusion inefficiency rate. But the side cross-matching agglulination cases caused by the imune factors easily lead to more transfusion reaction.and worse infusion efficiency.endprint

[Key words]Cross-matching；Minor agglulination；Reasons analysis；Clinical significance

輸血前交叉配血是保證臨床輸血安全高效的重要環(huán)節(jié)之一[1-2]。目前不規(guī)則抗體篩選與鑒定已引起了輸血工作者的重視，臨床輸血中制定了相關(guān)制度。但對于不規(guī)則抗體檢測陰性、交叉配血試驗(yàn)次側(cè)凝集的患者，如何正確分析凝集性質(zhì)，并根據(jù)具體情況給患者提供合適的血液，值得廣大臨床輸血工作者深入探討。本調(diào)查分析了我院近幾年交叉配血次側(cè)凝集病例325例，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)并綜合臨床數(shù)據(jù)分析了可能原因，為該類患者的合理輸血提供參考。

1資料與方法

1.1一般資料

2013年1月～2016年5月在我院輸血患者45 672人次，納入標(biāo)準(zhǔn)為輸血前卡式交叉配血僅次側(cè)出現(xiàn)凝集的患者，排除標(biāo)準(zhǔn)為輸血前卡式交叉配血主側(cè)或主次側(cè)均出現(xiàn)凝集的患者。共收集325例，其中男性137例，女性188例；女性有妊娠史134例，無妊娠史54例；有輸血史158例，無輸血史167例；年齡1～87歲。

1.2材料與儀器

微柱凝膠抗人球蛋白卡（斑伯斯公司，西班牙，批號：16014）、抗體篩選細(xì)胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ細(xì)胞，長春博德公司，批號：20160421）、抗體鑒定細(xì)胞（1～11組細(xì)胞，斑伯斯公司，西班牙，批號：16001.04）、抗生素類藥物致敏紅細(xì)胞試劑盒（江蘇中濟(jì)生物，批號：20160218）；XT-1600血常規(guī)分析儀、斑伯斯公司Dianafuge卡式專用離心機(jī)、恒溫水浴箱、微柱孵育器。

1.3研究方法

1.3.1研究策略 先運(yùn)用微柱凝膠卡法進(jìn)行交叉配血，發(fā)現(xiàn)配血次側(cè)凝集的樣本，做直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）與紅細(xì)胞常規(guī)與形態(tài)分析，對DAT陽性樣本做放散試驗(yàn)，篩選與鑒定放散液的抗體特性；放散液抗體篩選陰性樣本，對采用了抗生素治療的患者行抗生素類藥物抗體篩選。最后綜合分析患者病種、輸血次數(shù)、輸血反應(yīng)、紅細(xì)胞形態(tài)性狀、次側(cè)凝集原因等，結(jié)合臨床輸血后情況隨訪分析（輸血反應(yīng)及輸注效率）。

1.3.2實(shí)驗(yàn)方法 ①交叉配血運(yùn)用微柱凝膠抗人球蛋白卡法進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)按照稀釋、加樣、孵育、離心、結(jié)果分析步驟，嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作；②不規(guī)則抗體篩選與鑒定：稀釋Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 細(xì)胞至1%左右，分別加入50 μl至微孔性樣本采用11組細(xì)胞進(jìn)行抗體特異性鑒定，采用微柱凝膠卡，標(biāo)記1～11號孔，分別加入稀釋至1%左右的篩選細(xì)胞50 μl，再加25 μl放散液，其他同抗體篩選試驗(yàn)，具體操作按說明書進(jìn)行，結(jié)果分析按照說明書抗體鑒定譜進(jìn)行；③紅細(xì)胞性狀分析：將患者全血采用XT-1600分析儀進(jìn)行血常規(guī)分析，重點(diǎn)觀察紅細(xì)胞MCV、RDW、RDW-SD的變化，具體操作按儀器規(guī)程進(jìn)行；④抗生素類藥物性抗體分析：類似抗體鑒定方法，具體操作按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0軟件分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用兩樣本t檢驗(yàn)，兩變量的相關(guān)程度用直線相關(guān)分析法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1微柱凝膠卡次側(cè)配血凝集患者病種分布

按病種分類統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下，次側(cè)配血凝集病例主要為四大類病種：血液系統(tǒng)疾病（MDS、白血病、地中海貧血）、ICU重癥、急診外傷與燒傷（表1）。

2.2次側(cè)配血凝集患者各病種凝集率與輸血次數(shù)、輸血反應(yīng)的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析表明，次側(cè)配血凝集的血液病患者（白血病、地中海貧血、MDS），次側(cè)配血凝集率與輸血次數(shù)成正相關(guān)（r=0.652，P<0.05），但與輸血反應(yīng)率無相關(guān)性（r=0.132，P>0.05）；但I(xiàn)CU重癥、急診和燒傷患者次側(cè)配血凝集率與輸血次數(shù)、輸血反應(yīng)率均無相關(guān)性（r1=0.106，r2=0.211，P>0.05）（表2）。

2.3次側(cè)配血凝集可能原因分析

調(diào)查分析顯示，325例次側(cè)配血凝集的主要原因?yàn)椋夯颊呒t細(xì)胞形態(tài)變化、血漿蛋白影響、藥物性抗體、供者血清同種抗體、加樣量不當(dāng)、陳舊細(xì)胞樣本、血標(biāo)本抗凝不佳、細(xì)胞洗滌不充分、DAT陽性等。其中臨床輸血前發(fā)現(xiàn)次側(cè)配血凝集，但主側(cè)無溶血無凝集，由紅細(xì)胞大小形變引起的次側(cè)配血凝集在臨床輸血中比例較高（24%）（表3），隨訪發(fā)現(xiàn)該類患者輸血效果較好；但由免疫因素引起的次側(cè)配血凝集患者，輸血效果較差，且易引起輸血不良反應(yīng)（發(fā)熱、過敏反應(yīng)等）。

2.4免疫因素與非免疫因素對次側(cè)配血凝集原因患者分類的比較

對325例次側(cè)配血凝集的原因進(jìn)行分類研究，免疫因素共69例，非免疫因素256例，其中免疫因素組15例發(fā)生輸血反應(yīng)，11例紅細(xì)胞輸注無效；非免疫因素組12例發(fā)生輸血反應(yīng)，7例紅細(xì)胞輸注無效（表4）。免疫因素組與非免疫因素組比較，輸血反應(yīng)的發(fā)生率與輸注無效率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3討論

交叉配血試驗(yàn)是保證臨床輸血安全高效的重要環(huán)節(jié)[3-4]。但如何正確分析交叉配血試驗(yàn)次側(cè)凝集的性質(zhì)，并根據(jù)具體情況給患者提供科學(xué)合理的血液，應(yīng)引起臨床輸血工作者重視。本研究對近幾年我院輸注紅細(xì)胞患者45 672人次進(jìn)行了調(diào)查分析，其中325例微柱凝膠卡次側(cè)配血凝集，凝集率為0.71%；對次側(cè)出現(xiàn)凝集的樣本進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，次側(cè)配血凝集患者主要在外科ICU、急診ICU、血液科、兒科及腫瘤科等科室，病種主要是重癥急救、血液病、地中海貧血及燒傷、感染等患者，該類患者紅細(xì)胞懸液主側(cè)配血相合，輸注的紅細(xì)胞基本無供者血漿成分，觀察發(fā)現(xiàn)臨床輸血不良反應(yīng)較低，如何全面分析次側(cè)凝集原因并制定相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或制度，規(guī)范該類患者臨床輸血，有利于提高輸血效率，降低輸血風(fēng)險(xiǎn)[5-7]。

收集次側(cè)配血凝集患者血樣，經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)并綜合臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，次側(cè)配血凝集原因主要有如下幾個(gè)方面[8-9]：①紅細(xì)胞大小形態(tài)出現(xiàn)變化，共78例，調(diào)查分析顯示，ICU患者搶救時(shí)輸注液體較多，低張液會(huì)使紅細(xì)胞腫脹，細(xì)胞膜可能損傷，大小形態(tài)變形，紅細(xì)胞體積增大，血常規(guī)檢測RDW及RDW-SD增高，紅細(xì)胞變形，微柱凝集法檢測出現(xiàn)次側(cè)凝集，這是一種非免疫因素引起的"假凝集"無臨床意義，但該類次側(cè)凝集的比例較高，應(yīng)引起日常配血工作的重視；②患者紅細(xì)胞表面吸附自身同種抗體，由于多次輸血產(chǎn)生同種免疫抗體致敏自身紅細(xì)胞引起，如地中海貧血、白血病等，此外該類患者也有RBC變形、RDW及RDW-SD增高，微柱凝集法次側(cè)凝集；③藥物性抗體，如感染或腫瘤患者運(yùn)用大量抗生素或抗腫瘤藥物，這些藥物多為半抗原，產(chǎn)生的相關(guān)抗體結(jié)合于紅細(xì)胞表面，次側(cè)配血凝集，本研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)9例藥物性抗體，且出現(xiàn)輸血反應(yīng)2例與RBC的輸注無效3例；④疫球蛋白的影響，2例MDS患者和3例短時(shí)間內(nèi)注入大量丙種球蛋白患者，這些抗體（IgG）吸附在紅細(xì)胞表面，引起微柱凝膠卡配血次側(cè)凝集；其他引起次側(cè)凝集的原因，35例加樣時(shí)RBC濃度過大，新來工作人員操作技術(shù)不合格；33例血漿蛋白影響，23例脂血時(shí)血細(xì)胞洗滌不充分；還存在31例無法分析原因，輸血也無任何反應(yīng)，但次側(cè)配血凝集出現(xiàn)一過性現(xiàn)象，次側(cè)凝集可自動(dòng)消失。endprint

輸血效果評價(jià)是規(guī)范臨床合理用血的重要環(huán)節(jié)[10-13]。對這些患者次側(cè)凝集的原因與臨床輸血效果綜合分析表明：大部分患者主側(cè)配血相合，次側(cè)凝集，輸血無不良反應(yīng)，輸血效果良好；但出現(xiàn)18例患者輸血效果較差的病例，免疫因素引起的11例，非免疫因素引起的7例。其中3例開始次側(cè)配血凝集，后來出現(xiàn)主側(cè)配血也凝集，不規(guī)則抗體陽性，由此表明多次輸血患者出現(xiàn)次側(cè)凝集后，可能進(jìn)一步引起同種抗體產(chǎn)生，加大臨床配血的難度，或者開始可能為同種抗體較弱，常規(guī)方法無法檢測；另外2例患者有時(shí)主次側(cè)均無法配血，有時(shí)僅次側(cè)配血次側(cè)凝集，出現(xiàn)不穩(wěn)定狀況，輸血效果不好，輸血的頻次增加；另外3例患者紅細(xì)胞放散后，經(jīng)過檢測有臨床意義的抗體；但是什么時(shí)間該做放散試驗(yàn)，要結(jié)合臨床輸血效果與臨床表現(xiàn)，如果無不良輸血反應(yīng)，且輸血效果好，血清膽紅素?zé)o異常，可不做放散試驗(yàn)。但對于輸血效果差或可能有慢性或遲發(fā)性溶血患者的樣本，如IAT陰性應(yīng)做放散試驗(yàn)，分析同種抗體的性質(zhì)與類型[13-15]。相關(guān)性分析結(jié)果提示，血液病患者次側(cè)配血凝集率與輸血次數(shù)成正相關(guān)，但與輸血反應(yīng)率無相關(guān)性；但I(xiàn)CU重癥、急診和燒傷患者次側(cè)配血凝集率與輸血次數(shù)、輸血反應(yīng)率均無相關(guān)性[16-18]。免疫因素組與非免疫因素組比較，輸血反應(yīng)的發(fā)生率與輸注無效率均有顯著不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，臨床輸血前應(yīng)重視次側(cè)配血凝集的問題，區(qū)分是免疫性還是非免疫因素，加強(qiáng)臨床輸血合理檢測與分析，并與臨床醫(yī)生合作共同處理相關(guān)難點(diǎn)，有利于提高臨床輸血療效，為患者提供相容性血液；但也不必過度檢測，需結(jié)合臨床表現(xiàn)與實(shí)驗(yàn)室結(jié)果，統(tǒng)籌安排血液檢測資源，做到科學(xué)合理。

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（收稿日期：2017-05-15 本文編輯：崔建中）endprint