LASS2、Ki67表達與鼻咽癌復發的相關性及其意義

王見璋++何志明　黃金鳳　李煒霞

[摘要]目的 探討LASS2及Ki67表達與鼻咽癌復發的相關性及其意義。方法 收集我院2011年～2014年的126例鼻咽癌活檢標本，其中首發病例77例，復發病例49例。采用免疫組織化學方法檢測LASS2及Ki67在126例鼻咽癌活檢組織中的表達，分析LASS2及Ki67在兩組間的表達差異及其之間的相關性。結果 LASS2在復發病例中的陽性率為61.2%，低于首發病例的88.3%，差異有統計學意義（P<0.001）。Ki67與鼻咽癌復發無顯著相關性（P>0.05），但LASS2表達與Ki67表達相比較，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 LASS2在鼻咽癌復發的病例中呈低表達，檢測LASS2蛋白可能有助于提示腫瘤是否容易復發，LASS2在預測鼻咽癌復發中可能具有重要的臨床意義。LASS2與Ki67存在負相關，提示LASS2有可能抑制鼻咽癌腫瘤細胞的增殖。

[關鍵詞]鼻咽癌；LASS2；Ki67；復發

[中圖分類號] R739.62 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）10（c）-0120-03

Relationship between the expression of LASS2 and Ki67 with recurrent of nasopharyngeal carcinoma and its significance

WANG Jian-zhang HE Zhi-ming HUANG Jin-fen LI Wei-xia

Department of Pathology，Shunde Hospital of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Province，Foshan 528333，China

[Abstract]Objective To investigate the relationship between LASS2 and Ki67 expression with the recurrent of nasopharyngeal carcinoma （NPC） and its significance.Methods A total of 126 cases of NPC biopsy specimens in our hospital from 2011 to 2014 were collected，including 77 initial cases and 49 recurrent cases.Immunohistochemical methods were used to detect the expression of LASS2 protein and Ki67 in 126 patients with NPC.The difference between the expression of LASS2 and Ki67 in the two groups and their correlation were analyzed.Results The positive rate of LASS2 in recurrent cases was 61.2%，which was lower than 88.3% of the initial cases，with significant difference （P<0.001）.Ki67 had no significant correlation with the recurrence of NPC （P>0.05），however，there is a negative correlation between LASS2 expression and Ki67 （P<0.05）.Conclusion LASS2 was low-expressed in the recurrence of NPC.Detection of LASS2 protein may help to prompt tumor recurrence.LASS2 may be a clinically significant biological indicator for predicting the recurrence of NPC.LASS2 is negatively correlated with Ki67.It is suggested that LASS2 may inhibit the proliferation of NPC tumor cells.

[Key words]Nasopharyngealcarcinoma；LASS2；Ki67；Recurrence

鼻咽癌是原發于鼻咽黏膜被覆上皮的惡性腫瘤，是我國常見的惡性腫瘤之一，發病率高，在廣東、廣西、福建、湖南等地多發。鼻咽癌起病隱匿，早期不易被發現，但容易出現淋巴結轉移或遠處轉移。鼻咽癌發病機制不明，治療效果不理想，5年生存率約50%。放射治療是鼻咽癌最主要的治療手段，但首程放療后仍有8.2%～22.0%的復發率[1]。復發鼻咽癌預后較差，其再程放療的5年生存率為18.7%～36%[2]。鼻咽癌的發生與相關的基因變異有關，文獻已經報道了多種基因變異促進了鼻咽癌的發生[3-7]，但目前尚缺乏與鼻咽癌復發相關的基因研究。

LASS2是一種抑癌基因，廣泛存在于人體的多種組織中[8]，近年來的研究證實其可能成為一種腫瘤標志物，具有廣泛的發展前景。Ki67是一類與細胞周期相關的增殖細胞核抗原，臨床研究顯示，Ki67與腫瘤的增殖及預后有密切的關系。本文通過檢測LASS2蛋白及Ki67在鼻咽癌首發及復發病例中的表達情況，分析LASS2及Ki67在鼻咽癌復發中的作用以及兩者之間的相關性，旨在探討其作為評估鼻咽癌復發指標的可能性。endprint

1材料與方法

1.1病例標本

收集2011年～2014年我院的126例鼻咽癌活檢標本，其中首發病例77例，復發病例49例；男性94例，女性32例；年齡20～78歲，平均（49.67±11.22）歲。納入標準：①首發病例活檢前均未進行任何鼻咽癌相關治療；②復發病例復發前均進行規范化治療，并隨訪2年以上。

1.2試劑

LASS2多克隆抗體購于美國Santa Cruz公司（按1∶100稀釋）；Ki67濃縮型鼠抗人單克隆抗體（按1∶1000稀釋）及SP通用型免疫組化試劑盒均購于福州邁新公司。

1.3方法

標本經常規處理后，制作成蠟塊。采用免疫組化SP法檢測標本中LASS2及Ki67表達的情況，具體操作如下。①組織石蠟切片脫蠟，水化；②自來水沖洗后，以檸檬酸浸泡進行抗原修復，40℃微波修復15 min；③PBS沖洗3次，每次3 min（3×3 min）；④滴加3%雙氧水于切片上，室溫下孵育10 min，以阻斷內源性過氧化物酶；⑤PBS沖洗（3×3 min）；滴加一抗，室溫下孵育60 min或4℃過夜；⑥PBS沖洗（3×3 min）；⑦滴加二抗，室溫下孵育15 min；⑧PBS沖洗（3×3 min）；⑨除去PBS，滴加新鮮配制的DAB顯色劑顯色，約1 min；⑩自來水沖洗終止顯色，蘇木精復染、在1%鹽酸乙醇分化，PBS返藍，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。LASS2結果判讀標準參照文獻[9]，以鼻咽癌腫瘤細胞胞質及（或）胞核出現棕黃色顆粒為陽性，30%以上的腫瘤細胞著色才視為陽性。Ki67結果以鼻咽癌腫瘤細胞核出現棕黃色顆粒為陽性，計算陽性細胞所占的比例，按比例劃分三個等級，<10%為1級，10～30%為2級，>30%為3級。免疫組化染色時所有標本均有設立陽性對照和陰性對照。免疫組化染色結果由2～3位有經驗的臨床病理醫師獨立閱片判斷。

1.4統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件對數據進行分析，計數資料采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 LASS2蛋白在鼻咽癌中表達比較

77例首發病例中，LASS2陽性68例，陰性9例，陽性率為88.3%；49例復發病例中，LASS2陽性30例，陰性19例，陽性率為61.2%。復發病例組的LASS2蛋白表達陽性率低于首發病例組，差異有統計學意義（χ2=12.712，P=0.000）（表1）。

2.2 Ki67與鼻咽癌復發的相關性分析

Spearman相關性分析結果顯示，Ki67與鼻咽癌的復發無顯著相關性（r=0.086，P=0.341）（表2）。

2.3 LASS2蛋白表達與Ki67的相關性分析

Spearman相關性分析結果顯示，LASS2蛋白表達與增殖指數Ki67呈負相關，差異有統計學意義（r=-0.208，P<0.05）（表3）。

3討論

鼻咽癌是發病率最高的頭頸部惡性腫瘤，治療效果欠佳，復發率高。即使經過合理及規范的綜合治療，部分患者仍難以避免地出現腫瘤復發。臨床資料顯示，經過規范化的綜合及放射治療后，仍有10%～36%的鼻咽癌患者會出現鼻咽局部復發，其中半數以上發生在治療后的前3年內[10]。目前，對鼻咽癌復發機制的研究相對不足，因此，臨床工作中尚缺乏有意義的生物學指標預測鼻咽癌的復發。

LASS2基因是近年來研究的一種人類新的基因，屬于腫瘤抑制基因。LASS2基因編碼的蛋白參與細胞凋亡信號通路的調控。該蛋白通過結構相似性的原理，通過結合V-ATPase質子泵的亞基ATP6L，發揮抑制V-ATPase質子泵跨膜轉運H+功能的作用，使細胞內H+濃度升高，進而激活線粒體凋亡通路，誘導細胞凋亡，從而達到抑制腫瘤細胞生長的作用[11-12]。此外，由于抑制了V-ATPase質子泵跨膜轉運H+的功能，導致細胞外H+濃度降低，使得對H+高度敏感的蛋白水解酶類的活性被抑制，引起細胞外基質（ECM）降解減少，從而抑制腫瘤的侵襲和轉移。

本研究結果顯示，LASS2蛋白在鼻咽癌復發病例中的表達陽性率顯著低于首發病例組，提示LASS2蛋白表達陰性的鼻咽癌患者因失去了LASS2蛋白對腫瘤細胞生長的調控作用，從而更容易復發。

Ki67是臨床病理檢查中常用的抗體，與PCNA一樣，主要用于判斷細胞的增殖活性。該蛋白最初被發現確定為鼠源的核單克隆抗體，是1983年Gerdes等[13]用鼠源單克隆抗體檢測一種來自霍奇金淋巴瘤系細胞核抗原時首次發現。Ki67表達在所有活動的細胞周期（G1、S、G2和有絲分裂期）中，而在G0期不表達。臨床資料顯示，Ki67增殖指數高低與許多腫瘤的分化程度、浸潤轉移以及預后密切相關，因此，也是惡性腫瘤預后的重要參考指標之一[14-15]。

本研究結果顯示，Ki67與鼻咽癌復發無顯著相關性，提示鼻咽癌復發似乎與腫瘤細胞增殖活性無明顯關系，但Ki67與LASS2蛋白之間存在負相關，這可能與LASS2抑癌基因的作用有關。LASS2通過誘導細胞凋亡從而抑制腫瘤細胞的生長，因此LASS2陽性的腫瘤細胞增殖指數相對較低。

綜上所述，LASS2蛋白參與了對腫瘤細胞凋亡的調控，能夠抑制腫瘤細胞的增殖，從而抑制腫瘤的復發，因此，檢測LASS2蛋白可能有助于提示腫瘤是否容易復發，LASS2在預測鼻咽癌復發中可能具有重要的臨床意義。

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（收稿日期：2017-08-01 本文編輯：祁海文）endprint