結(jié)腸癌組織中MCP-1與VEGF-C的表達(dá)及意義①

結(jié)腸癌組織中MCP-1與VEGF-C的表達(dá)及意義①

目的：探討單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)對(duì)結(jié)腸癌發(fā)生及發(fā)展的影響及臨床意義。方法：通過免疫組化方法測(cè)定60例結(jié)腸癌病理標(biāo)本中兩種因子的表達(dá)。結(jié)果：MCP-1在癌旁正常組織組陽(yáng)性表達(dá)率為21.7%，比結(jié)腸癌組顯著降低(P<0.05)。VEGF-C在癌旁正常組織組陽(yáng)性表達(dá)率為23.3%，比結(jié)腸癌組顯著降低(P<0.05)。二者同時(shí)與結(jié)腸癌的TNM分期聯(lián)系密切，與分化程度無(wú)關(guān)聯(lián)。結(jié)論： MCP-1、VEGF-C在結(jié)腸癌的病情發(fā)展中起著顯著作用，是促使癌腫浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的重要因素，對(duì)于結(jié)腸癌的診療有明顯指導(dǎo)意義。

結(jié)腸癌;VEGF-C;MCP-1;病理分期;臨床分析

MCP-1作為趨化因子眾多亞家族中的成員之一，是起著關(guān)鍵作用的趨化因子，其表達(dá)程度與很多癌腫的演變、種植、擴(kuò)散及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)緊密相關(guān)。VEGF-C是一種血管通透性因子，可以強(qiáng)烈提高血管內(nèi)皮細(xì)胞的再生，增加微血管壁的通透能力，并能刺激淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增生。已有研究[1]發(fā)現(xiàn)血清VEGF-C水平增加可直接導(dǎo)致食管鱗癌的預(yù)后不良。研究表明腫瘤組織過度表達(dá) MCP-1 引起的單核細(xì)胞浸潤(rùn)促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)并促進(jìn)腫瘤組織淋巴管上皮的增生、遷移和新的淋巴管形成, 促使腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移[2,3]。本題主要探索MCP-1、VEGF-C在結(jié)腸癌發(fā)病及進(jìn)展過程中的作用及臨床意義。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本

選取佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院2015-03～2016-03行結(jié)腸癌切除手術(shù)后經(jīng)病理學(xué)確診為結(jié)腸癌的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本60例，年齡25～75歲，平均53.61歲。根據(jù)美國(guó)抗癌聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)/國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)結(jié)直腸癌TNM分期系統(tǒng)(第七版)，其中Ⅰ～Ⅱ期24例，Ⅲ～Ⅳ 期36例。高分化腺癌38例，中低分化腺癌22例。選取60例距癌腫遠(yuǎn)端切緣>5cm并經(jīng)病理學(xué)確定為斷端無(wú)癌腫的結(jié)腸組織，即癌旁正常組織，作為對(duì)照組。

1.2 試劑

MCP-1、VEGF-C抗體為兔多克隆抗體，工作濃度為1:100，購(gòu)自Abcam公司；SP免疫組化試劑盒(兔)及DAB顯色試劑盒均選自上海研卉生物科技有限公司。

1.3 免疫組化方法

整個(gè)染色方法參照 SP 試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行,抗體均以0.1M的磷酸鹽緩沖液(Phosphate-Buffor silutlon,PBS,pH 7.4)稀釋 , 濃度為1：100 , 以PBS替代一抗作陰性對(duì)照。0.01M枸櫞酸鹽緩沖液中微波處理進(jìn)行抗原修復(fù) ,DAB 顯色, 蘇木素復(fù)染, 中性樹膠封片 , 顯微鏡觀察。

1.4 結(jié)果判斷及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

兩種因子表達(dá)均出現(xiàn)于細(xì)胞漿中，棕黃色顆粒為陽(yáng)性，采取半定量積分方法。用高倍鏡查看所有切片，一張切片任意選取5個(gè)視野，按照胞漿染色程度劃分為四個(gè)等級(jí)：陰性細(xì)胞(-)無(wú)顯色(0)；弱陽(yáng)性細(xì)胞(+)顯色為淺黃色(1)；中度陽(yáng)性細(xì)胞()顯色為棕黃色(2)；強(qiáng)陽(yáng)性細(xì)胞()顯色為深棕黃色(3)。按照IS(intensity score)=Σ{(0×F0)+(1 ×F1)+(2×F2)+(3×F3)}，F(xiàn)=%×5 視野。計(jì)算所有切片的染色程度。使用 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件包,通過卡方檢驗(yàn)(χ2)法檢驗(yàn)，確定P<0.05為差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，二者相關(guān)性用SPSS17.0等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1結(jié)腸癌組MCP-1、VEGF-C與對(duì)照組的水平對(duì)比

結(jié)腸癌組MCP-1的陽(yáng)性率為50%，比對(duì)照組顯著升高，方差分析提示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)腸癌組VEGF-C的陽(yáng)性率為48.3%，對(duì)比對(duì)照組顯著升高，方差分析提示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1結(jié)腸癌組MCP-1、VEGF-C與對(duì)照組的水平對(duì)比(n=60)

MCP-1陽(yáng)性(%)χ2值PVEGF-C陽(yáng)性(%)χ2值P癌旁正常組織組13(21.7)10.4740.00114(23.3)8.1550.004結(jié)腸癌組30(50)29(48.3)

2.2 MCP-1及VEGF-C與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

MCP-1、VEGF-C的表達(dá)與癌腫的TNM分期關(guān)系密切，與分化差異無(wú)關(guān)聯(lián)。TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期組中MCP-1陽(yáng)性率(33.3%)顯著低于Ⅲ～Ⅳ期組(61.1%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期組中VEGF-C陽(yáng)性率(29.2%)顯著低于Ⅲ～Ⅳ期組(61.1%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高分化組中MCP-1陽(yáng)性率(55.3%)與中-低分化組陽(yáng)性率(40.9%)之間無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。高分化組中VEGF-C陽(yáng)性率(42.9%)與中-低分化組陽(yáng)性率(61.1%)之間無(wú)明顯差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 MCP-1及VEGF-C與結(jié)腸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

臨床病理類型nMCP-1陽(yáng)性(%)χ2值P值VEGF-C陽(yáng)性(%)χ2值P值臨床分期 Ⅰ～Ⅱ期248(33.3)4.4440.0357(29.2)5.8840.015 Ⅲ～Ⅳ期3621(61.1)22(61.1)分化程度 高分化3821(55.3)1.1480.28418(42.9)1.6810.195 中-低分化229(40.9)11(61.1)

2.3 MCP-1與VEGF-C在結(jié)腸癌表達(dá)中的相關(guān)性分析

本研究顯示，在50例結(jié)腸癌組織中MCP-1和VEGF-C同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)20例；MCP-1(+)而VEGF-C(-)8例；MCP-1(-)而VEGF-C(+)5例；兩者同時(shí)陰性表達(dá)17例。經(jīng)SPSS17.0等級(jí)相關(guān)性分析顯示，MCP-1與VEGF-C表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.5，P=0.001)。

表5 MCP-1、VEGF-C在結(jié)腸癌中的相關(guān)性分析

注：r=0.5，P=0.001

3 討論

結(jié)腸癌(colon cancer)是全球范圍內(nèi)發(fā)病率較高的惡性疾病之一，以41～65歲發(fā)病率高。從病因?qū)W角度分析多半以上來(lái)自腺瘤病變，從形態(tài)學(xué)角度分析可分為增生、腺瘤及癌變各階段。盡管結(jié)腸癌根治性手術(shù)及術(shù)后的綜合治療已經(jīng)逐漸成熟，但結(jié)腸癌術(shù)后生存期仍不樂觀，控制均布擴(kuò)散及遠(yuǎn)處移行是改善結(jié)腸癌預(yù)后的重要因素。 已有的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究[4，5]表明，結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)以及癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，與趨化因子的調(diào)控有密切關(guān)系。趨化因子是一種可以趨動(dòng)細(xì)胞定向挪動(dòng)的小分子分泌蛋白，通過增加癌細(xì)胞數(shù)量及遠(yuǎn)處擴(kuò)散, 提高各種活化因子的分泌和血管形成，從而促使了腫瘤的進(jìn)展。MCP-l作為趨化因子眾多亞家族成員之一，可被多種惡性腫瘤所合成和分泌，擁有極為重要的生物學(xué)功能，主要通過驅(qū)動(dòng)位于血管的單核細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槲挥谀[瘤的巨噬細(xì)胞來(lái)發(fā)揮主要作用，參與腫瘤組織炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，直接調(diào)控腫瘤細(xì)胞生存的內(nèi)環(huán)境。張哲[6]等研究指出MCP-1通過促使單核細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞(TAM),分泌VEGF-C等血管生成因子。VEGF-C在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用主要有兩個(gè)方面，一是：VEGF-C與其特異性受體VEGFR-2結(jié)合促進(jìn)腫瘤血管的發(fā)生；二是：VEGF-C通過與VEGFR-3的結(jié)合可促進(jìn)淋巴管的生成[7,8]。本實(shí)驗(yàn)研究顯示：MCP-1與VEGF-C的陽(yáng)性率在實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，說(shuō)明MCP-1和VEGF-C在結(jié)腸癌的發(fā)病進(jìn)程中有著明顯的意義。深入探索MCP-1、VEGF-C與結(jié)腸癌TNM分期、分化差異的關(guān)聯(lián)中得知，二者共同影響著結(jié)腸癌的病理進(jìn)展過程，兩種因子的表達(dá)升高提示結(jié)腸癌TNM分期不良，說(shuō)明MCP-1與VEGF-C是影響結(jié)腸癌出現(xiàn)局部擴(kuò)散及遠(yuǎn)處移行的重要條件，對(duì)于結(jié)腸癌的整個(gè)演變過程起顯著作用。已有研究[9～11]結(jié)果證實(shí)MCP-1與VEGF-C協(xié)同促進(jìn)胃癌、膀胱癌、卵巢癌的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。本次實(shí)驗(yàn)在對(duì)于二者共同作用于結(jié)腸癌的相關(guān)性分析結(jié)果得到相同論證，更好的證明了兩種因子在腫瘤演變過程中的協(xié)同關(guān)系，為深入了解他們的相互作用機(jī)理提供理論依據(jù)。

綜上所述，該實(shí)驗(yàn)通過臨床分析與SP免疫組化測(cè)定，初步闡明了VEGF-C與MCP-1在結(jié)腸癌病理組織中的一般水平，充分證實(shí)VEGF-C、MCP-1的表達(dá)與結(jié)腸癌的TNM分期之間有著密切聯(lián)系，提示MCP-1與VEGF-C的水平可為結(jié)腸癌的診療及預(yù)后提供參考意義。

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王長(zhǎng)龍(1990～)男，黑龍江綏化人，在讀碩士研究生。

劉振平(1962～)男，黑龍江佳木斯人，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail：liuzhenping1962@163.com。

王長(zhǎng)龍,孫盛洋,劉振平

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院普外三科，黑龍江 佳木斯 154003)

R446.8

B

1008-0104(2017)05-0034-02

2016-09-12)