酶聯免疫吸附法檢測與甲苯胺紅不加熱血清試驗在梅毒檢驗中對比分析①

蔣剛健

(漯河市中心醫院檢驗科，河南 漯河 462000)

酶聯免疫吸附法檢測與甲苯胺紅不加熱血清試驗在梅毒檢驗中對比分析①

蔣剛健

(漯河市中心醫院檢驗科，河南 漯河 462000)

目的：探討酶聯免疫吸附法和甲苯胺紅不加熱血清試驗對于梅毒的臨床診斷價值。方法：在本院2013-02～2016-04收治的梅毒疑似患者及梅毒高危患者中選取1635例，分別對其進行甲苯胺紅不加熱血清試驗和酶聯免疫吸附法檢測，其中選擇梅毒螺旋體特異性抗體明膠凝集試驗作為確診標準，對兩種檢測方法的診斷結果進行回顧性分析。結果： ELISA法對于梅毒抗體的檢測靈敏度、漏診率均明顯優于TRUST法，差異具有顯著性(P<0.05)；對于TRUST陽性標本，ELISA法光密度值>1.0者占整體80%以上(25/30)；對于TRUST陰性標本，ELISA法光密度值<1.0者占整體80%以上(21/22)；ELISA法中滴度同患者病程并無明顯相關性，而TRUST法滴度則歲病程逐漸變化。結論：梅毒檢測方法的選擇應根據診斷和治療不同需要而定，其中酶聯免疫吸附法可用于梅毒篩查和檢測，甲苯胺紅不加熱血清試驗法可應用于臨床療效評估及病情進展判斷，以加強梅毒感染判斷的準確性 ，為治療方案的制定提供可靠依據。

梅毒試驗； 甲苯胺紅不加熱血清試驗； 酶聯免疫吸附法

梅毒是一種常見性傳播疾病，其致病菌為蒼白螺旋體，可通過明膠顆粒凝集試驗(TPPA)對其作出準確的定性判斷。調查指出，近年來我國梅毒感染率呈逐年增加趨勢，嚴重威脅公共健康衛生，如何有效篩查梅毒患者已成為臨床研究的熱點[1]。目前臨床存在多種梅毒檢測方法，其中酶聯免疫吸附法(Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay，ELISA)是一種較為常用的梅毒檢測方法，靈敏度和特異性較佳，但無法提示患者病情嚴重程度；甲苯胺紅不加熱血清試驗(Toluidine Red Unheated Serum Reagin Test，TRUST)則可有效反應患者病程變化，但無法解決假陽性高問題[2]。本次研究以本院近年來收治的1635例梅毒疑似或高危患者為觀察樣本，分別對其進行ELISA及TRUST檢驗，對兩種檢測方法的診斷價值進行評估，以期為臨床提供更為準確、經濟的梅毒篩查方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在本院2013-02～2016-04收治的梅毒疑似患者及梅毒高危患者中選取1635例，男947例，女688例，年齡34～67歲，平均(44.9±8.3)歲，所有患者均簽署知情同意書，且本次研究已通過本院倫理委員會審批。

1.2 試劑與儀器

①基本儀器：PW-960洗板機與微量加樣器(由深圳匯松科技有限公司生產)；ST-360酶標儀(由上海天呈科技有限公司生產)，儀器均經校準，且性能良好。②主要試劑：TRUST試劑盒(由上海榮盛生物藥業有限公司提供)、ELISA試劑盒(由上海科華生物工程股份有限公司提供)、TPPA試劑盒(由日本FU-JIKEBIO公司提供)。

1.3 方法

在清晨抽取患者5mL靜脈血樣，靜置5min后進行血清分離，患者均分別接受TRUST法及ELISA法梅毒抗體檢測，其中將一項陽性視為初篩陽性，對于初篩陽性患者進行再次復查，并以TPPA法檢測結果作為評估標準。在本次研究中，ELISA法及TRUST法均按照試劑盒相關操作規程實施操作。

1.4 統計學方法

采用軟件SPSS18.0，計數資料表示為平均值±標準差形式，并接受t檢驗，計量資料則表示為百分比形式，并對其進行χ2檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 檢測結果

本次研究中，1635例患者共計52例初篩陽性(4例TRUST陽性，22例ELISA陽性，26例雙陽性)，陽性率為3.06%，49例樣本均經由TPPA復查確診為梅毒抗體陽性。在樣本復查中，ELISA共計檢出48例陽性，TRUST共計檢出30例陽性，TPPA共計確認49例陽性。以TPPA檢測結果作為評估標準，兩種檢測方法對于梅毒抗體的診斷價值對比見表1，由表中數據可知，ELISA法對于梅毒抗體的檢測靈敏度、漏診率均明顯優于TRUST法，差異具有顯著性(P<0.05)。

表1 LISA與TRUST對于梅毒抗體 的診斷價值對比結果

2.2 光密度值分布

見表2。由表中數據可知，對于TRUST陽性標本，ELISA法光密度值>1.0者占整體80%以上(25/30)；對于TRUST陰性標本，ELISA法光密度值<1.0者占整體80%以上(21/22)，由表中數據可知，ELISA法中滴度同患者病程并無明顯相關性，而TRUST法滴度則歲病程逐漸變化。

表2 52例初篩梅毒患者ELISA光密度值分布

3 討論

梅毒是一種常見慢性性傳播疾病，主要為梅毒螺旋體感染所致一系列慢性、系統性性傳播疾病，可造成機體多系統、多臟器功能受損，造成患者出現功能障礙等多種癥狀，嚴重時可危及其生命安全[3]。相關資料顯示，梅毒可通過多種途徑傳播，如血源性傳播、性接觸傳播、間接接觸傳播等。特別是隨著近年來我國居民生活觀念的轉變，梅毒感染率呈逐年上升趨勢[4]。調查指出，目前我國部分地區梅毒發病率已達到2.32%，嚴重威脅公共健康。因此，加強梅毒篩查與檢驗具有十分重要的臨床意義。

目前臨床公認梅毒血清學試驗是最為有效的梅毒檢測方法，其中以TPPA較為常用。TPPA主要通過對Nichols株梅毒螺旋體特異性抗原進行提取，包被以紅色明膠顆粒，對梅毒病原抗體進行檢測，其敏感性和特異性較佳[5]。盡管TPPA在梅毒檢測方面具有顯著優勢，但由于試劑盒成本較高，無法作為常規篩查項目全面普及。因此，尋找一種更為簡便、經濟、有效的梅毒篩查及檢測方法十分重要。

TRUST是一種梅毒血清學試驗，主要用于抗心磷脂抗體檢測，但由于TRUST無法解決假陰性及假陽性較高的問題，其臨床應用局限性較大。ELISA法主要是利用雙抗原夾心法對梅毒螺旋體特異性IgG、IgM抗體進行檢測，是目前應用較為廣泛的一種梅毒篩查和檢測方法。在本次研究中，ELISA法對于梅毒患者的檢測敏感率及漏診率均明顯優于TRUST法(P<0.05)，提示在梅毒篩查及檢測方面ELISA法具有更為顯著的優勢，同賈麗[6]等報道中的結論基本一致。同ELISA相比，TPPA法可有效檢出潛伏梅毒病毒，從而對妊娠梅毒和胎傳梅毒進行有效控制。但是需要注意的是，梅毒患者在治療后其梅毒螺旋體抗原水平顯著下降，盡管仍存在一定IgG抗體，但其水平不隨患者病情進展出現變化，因此在TPPA試驗中式中呈陰性。因此TPPA試驗無法應用于大批量、自動化檢測，且對于再感染、復發等評估效果較差。在梅毒篩查方面，使用ELISA法取代TPPA法可在保證檢測精度的前提下提高篩查效率。

臨床研究指出，人體在感染梅毒螺旋體后，會產生特異性抗體、抗心磷脂非特異性抗體，其中梅毒特異性抗體具有出現早、存在時間長的特點，因此可作為梅毒螺旋體感染診斷的重要依據，如TPPA法、ELISA法均以梅毒特異性抗體作為檢測對象。盡管上述兩種檢測方法具有敏感性高，準確性佳的特點，但由于梅毒特異性抗體同患者病情進展變化相關性不顯著，因此采用ELISA法、TPPA法對梅毒患者進行病情評估時往往無法得到可靠結論。TRUST法主要以心磷脂類作為檢測用抗原，陳述文[7]等研究指出，在采用TRUST法對梅毒感染者進行診斷時，初期梅毒病灶滴度較低，二期梅毒者滴度呈顯著上升趨勢，三期患者則逐漸降低；周亮等研究認為，采用ELISA法作為梅毒患者初篩方法，采用TRUST作為病情評估方法，可有效提高梅毒螺旋體感染診斷效果。在本次研究中，ELISA法中滴度同患者病程并無明顯相關性，而TRUST法滴度則歲病程逐漸變化，同相關報道中的結論基本一致，提示TRUST法可應用于梅毒患者病情進展及療效評估中[8]。

綜上所述，梅毒檢測方法的選擇應根據診斷和治療不同需要而定，其中ELISA法可用于梅毒篩查和檢測，TRUST法可應用于臨床療效評估及病情進展判斷，以加強梅毒感染判斷的準確性 ，為治療方案的制定提供可靠依據。

[1]謝桂容，楊林. 甲苯胺紅血清試驗與酶聯免疫吸附試驗在妊娠期女性梅毒篩查中的應用對比[J]. 中國性科學,2015，24(10):55-57

[2]郭家權，洪敏，林永前. 酶聯免疫吸附法檢測與甲苯胺紅不加熱血清試驗在梅毒檢驗中應用價值的比較[J]. 廣東醫學,2014, 35(5):738-740

[3]謝海莉，趙進，李偉，等. 梅毒血清固定患者細胞免疫功能檢測分析[J]. 中國皮膚性病學雜志,2013, 27(1):49-51

[4]夏浩海，錢小蓮. 快速血漿反應素試驗及酶聯免疫吸附試驗在梅毒診斷中的應用[J]. 國際檢驗醫學雜志,2015，35(8):1141-1142

[5]邵先兵，張燕，張娜. 酶聯免疫吸附試驗、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗及甲苯胺紅不加熱血清試驗在梅毒檢測中的檢驗效能評價[J]. 中國性科學,2015，24(5):49-52

[6]賈麗. 梅毒螺旋體不同檢測方法的比較[J]. 中國醫藥導報,2011,8(29):91-92

[7]陳述文，梁連輝，蔡常輝. 四種方法檢測早期梅毒螺旋體感染的臨床應用評價[J]. 國際檢驗醫學雜志,2012, 33(21):2633-2634

[8]傅琳玲，丁琦，方晶，等. 不同感染狀態下梅毒患者血清白介素2、10和12檢測結果分析[J]. 臨床皮膚科雜志,2012, 41(6):351-353

蔣剛健(1984～)男，河南漯河人，本科，中級主管技師。

R446.6

B

1008-0104(2017)05-0170-02

2017-04-17)