老年冠心病急性發(fā)作期病人血清同型半胱氨酸與LPL基因多態(tài)性相關分析

黎才麗，黃 勇，許政衡

老年冠心病急性發(fā)作期病人血清同型半胱氨酸與LPL基因多態(tài)性相關分析

黎才麗，黃 勇，許政衡

目的探討老年冠心病急性發(fā)作期病人血清同型半胱氨酸(Hcy)與脂蛋白脂肪酶(LPL)基因多態(tài)性的關系。方法選取2015年1月—2016年3月在我院治療的冠心病病人84例(觀察組)，同時選取健康者53名作為對照組，檢測兩組LPL基因位點rs11570892多態(tài)性以及血清Hcy 、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。結果觀察組Hcy和TG分別為(20.10±6.43)μmol/L和(1.81±0.93)mmol/L，明顯高于對照組，而HDL-C為(0.81±0.21)mmol/L，明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)；觀察組和對照組LPL rs11570892位點基因型及等位基因分布比較差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)；觀察組GG型病人TG為(2.13±0.41)mmol/L，明顯高于AA和GA型病人，而HDL-C為(0.71±0.18)mmol/L，明顯高于AA和GA型病人，差異比較有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)；不同基因型血清Hcy、TC和LDL-C比較差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。結論LPL基因多態(tài)性與老年冠心病急性發(fā)作期血清Hcy無關，其可能與病人血脂水平有關。

冠心病；血清同型半胱氨酸；脂蛋白脂肪酶基因多態(tài)性；老年；血脂

高脂血癥、吸煙及高血壓等均可以促進冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(CHD)的發(fā)生，我國現(xiàn)階段的CHD發(fā)病率可達0.6%以上，且近三年來呈現(xiàn)上升趨勢[1]。脂蛋白代謝紊亂可以導致冠狀動脈血管內皮細胞損傷，促進泡沫細胞、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(TC)等對于冠狀動脈內皮的侵蝕。而在這一過程中，血清同型半胱氨酸(Hcy)可以促進氧化應激損傷，加劇冠狀動脈粥樣斑塊的形成[2-3]。隨著研究的深入，部分研究者發(fā)現(xiàn)脂蛋白脂肪酶(LPL)可以調節(jié)Hcy的活性，影響到的Hcy羧基末端的生物學功能，進而參與到CHD的發(fā)生發(fā)展過程中[4- 5]，但迄今缺乏相關的研究。本研究探討LPL基因多態(tài)性與CHD病人血清Hcy的關系，進一步分析不同基因型LPL與血脂的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月—2016年3月在我院治療的冠心病病人84例(觀察組)，納入標準：①診斷符合國際心臟病學會和協(xié)會/WHO臨床命名標準化專題組聯(lián)合制定的缺血性心肌病的命名及診斷[6]，或至少一支冠狀動脈直徑狹窄≥50%；②急性發(fā)作期，年齡≥60歲；③病人及家屬知情同意并簽署同意書。排除標準：①合并有先天性心臟病、心肌病等心臟疾病；②合并肝腎功能異常、惡性腫瘤等疾病者。同時選取在我院體檢的健康者53名作為對照組，兩組一般資料差異比較無統(tǒng)計學意義。詳見表1。

表1 兩組病人一般資料比較

1.2 生化指標測定 清晨采集空腹靜脈血，分離血清后，-20℃保存待測，采集標本后1周內檢測三酰甘油(TG)、TC、HDL-C、LDL-C、Hcy，相關指標測定采用電化學發(fā)光全自動免疫分析儀(美國雅培i2000)，檢測試劑盒購自福建新大陸生物技術有限公司。

1.3 基因多態(tài)性檢測 LPL rs11570892基因多態(tài)性檢測：取凍存的血清保存液體，按照10 000 r/min的離心速度進行離心分離，每1 mL的TRIZOL試劑裂解樣品中加入0.2 mL氯仿，進行裂解操作，4 ℃采用無酶的RNA沖洗液進行洗滌，再次10 000 r/min離心5 min，得到RNA。混合液在加入逆轉錄酶MMLV 之前先70 ℃干浴3 min，取出后立即冰水浴至管內外溫度一致，然后加逆轉錄酶0.5 μL，37℃水浴60 min，室溫放置5 min使其完全溶解，逆轉錄為cDNA。以β-actin為模版，在反應體系中加入SYBR Green 1 染料、上游引物、下游引物、dNTP，總體積達20 μL，上機，反應條件為：93℃2 min，93℃ 1 min，55℃ 2 min，共40個循環(huán)。

PCR產物擴增后進行基因多態(tài)性檢測：參考multiplexkit試劑盒(南京凱基生物科技有限公司)使用說明，加入各位點對應延伸引物進行單堿基測序反應。并在ABI1310( Life Technologies，美國)進行電泳，結果用GENEMAPPER軟件( Life Technologies，美國)進行分析。 rs11570892上游引物：5’-3’ GGATTGTGGCCTTCTTTGAG，下游引物：5’-3’ CCAAACTGAGCAGAGTCTTC。

2 結 果

2.1 兩組血清Hcy及血脂比較 觀察組Hcy和TG明顯高于對照組，而HDL-C明顯低于對照組，差異比較有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)。詳見表2。

表2 兩組血清Hcy及血脂比較(±s)

2.2 兩組Hardy-winberg遺傳平衡定律檢驗 Hardy-winberg遺傳平衡定律檢驗，LPL rs11570892位點基因型在觀察組和對照組中分布符合Hardy-winberg平衡(Pgt;0.05)。兩組研究對象具有群體代表性。詳見表3。

2.3 兩組基因型及等位基因頻率比較 觀察組和對照組LPL rs11570892位點基因型及等位基因分布比較差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。詳見表4。

表3 Hardy-winberg遺傳平衡定律檢驗

表4 兩組基因型及等位基因頻率比較 例(%)

2.4 觀察組LPL rs11570892位點不同基因型與Hcy及血脂的關系 GG型病人TG為(2.13±0.41)mmol/L，明顯高于AA和GA型病人，而HDL-C為(0.71±0.18)mmol/L，明顯高于AA和GA型病人，差異比較有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)；不同基因型血清Hcy、TC和LDL-C比較差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。詳見表5。

表5 觀察組LPL rs11570892位點不同基因型與Hcy及血脂的關系(±s)

3 討 論

冠狀動脈內皮細胞在脂蛋白代謝紊亂的基礎上，可由于局部的氧化應激障礙、自由基損傷等，導致內皮功能細胞的壞死和凋亡，單核細胞、巨噬細胞、中性粒細胞等在此過程中通過加劇對于內皮下平滑肌層的侵蝕，促進粥樣斑塊的形成。CHD的發(fā)生嚴重影響到了生命健康，導致病死率、病殘率的上升[7- 8]。對于CHD發(fā)病過程中的相關生物學機制的研究，可以為后續(xù)臨床上CHD病人的臨床轉歸及輔助治療提供理論參考。Hcy是缺氧條件下通過脫硫氫酶作用分解的含有硫化氫的化合物，其羧基末端含有多個重復結構的糖蛋白結合區(qū)域，可以通過結合半胱氨酸酶、巰基化合物酶等，加劇下游細胞炎癥因子如IL-6、IL-8及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)的釋放，促進泡沫細胞在內皮下層的沉積[9- 10]。研究顯示在CHD病人中存在著明顯的Hcy異常表達，Hcy表達的動態(tài)變化可以作為預測CHD病人不良心血管結局事件的重要依據(jù)[11- 12]。

Hcy存在著多種調節(jié)因子，部分學者認為LPL可以通過誘導甘油三酯酶的活性，協(xié)同調節(jié)Hcy的代謝，進而參與到CHD的發(fā)生發(fā)展過程。LPL是細胞溶酶體中的一種水解酶，通過在血管內皮表面發(fā)生作用，參與體內的脂肪、膽固醇等的代謝[13]。基因多態(tài)性在惡性腫瘤、心血管疾病等的發(fā)生中發(fā)揮了重要的作用，特點位點基因的變換可以影響到轉錄基因的轉錄活性，調節(jié)蛋白的表達，發(fā)揮其生物學效應。已有的研究探討了LPL多態(tài)性與脂質代謝的關系，但與CHD的探討不足，本研究的創(chuàng)新性在于探討不同分型的LPL與脂質代謝的聯(lián)系。

血清三酰甘油可以促進脂質沉積和單核細胞等浸潤，促進CHD病情進展。本研究中觀察組的TG明顯高于對照組，而脂蛋白保護性因素HDL-C明顯下降，表明脂蛋白代謝的紊亂在CHD的冠狀動脈病變中發(fā)揮了重要作用。Zvyagina 等[14- 15]回顧性分析了46例冠心病病人的血清脂蛋白資料，發(fā)現(xiàn)血清TG可平均上升25%，而HDL-C也可下降至0.70 mmol/L，這與本研究的結論較為一致。Hardy-winberg遺傳平衡定律基因型頻率的檢測，可以評估所選樣本是否符合遺傳平衡定律，LPL rs11570892位點各組基因型的實際頻數(shù)和理論頻數(shù)無明顯差異，符合Hardy-winberg遺傳，表明本研究所選擇的樣本具有群體代表性。但本研究并未發(fā)現(xiàn)LPL rs11570892位點基因型AA、GA、GG間的差異，同時等位基因頻率同樣無明顯差異，表明LPL rs11570892基因多態(tài)性并未參與到冠心病的發(fā)生發(fā)展過程。LPL rs11570892基因型或者基因的多態(tài)性并不影響到LPL蛋白的轉錄或者翻譯，不會影響到血清Hcy或者冠狀動脈病變的進展。但對于具體的基因型的分析可見，GG型病人的血清TG及HDL-C均明顯高于AA型及GA型，表明LPL rs11570892基因的多態(tài)性可以影響到脂質的代謝，TG及HDL-C的同時上升表明體內的脂質代謝紊亂較為嚴重，LPL rs11570892的多態(tài)性可能影響到了甘油三酯酶、膽固醇脂酶的活性，抑制了肝臟對于TG的逆向轉運，導致脂質代謝異常。但本研究并未發(fā)現(xiàn)LPL rs11570892與LDL-C、Hcy的關系，雖然Hcy在CHD組中存在一定程度的異常表達，但Hcy與多態(tài)性無明顯關系，提示LPL rs11570892并不參與到Hcy的代謝調節(jié)過程中。

綜上所述，CHD病人體內存在著明顯的脂質代謝紊亂，Hcy表達明顯上升，雖然LPL rs11570892基因多態(tài)性本身并不影響Hcy的表達，但可以參與到TG、HDL-C等的代謝調節(jié)過程，影響血脂水平。后續(xù)研究可以增加LPL多個位點的多態(tài)性研究分析。

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2016-07-11)

(本文編輯 王雅潔)

Correlation between Serum Homocysteine and LPL Gene Polymorphism in Elderly Patients with Acute Coronary Heart Disease

Li Caili， Huang Yong， Xu Zhengheng

Haikou Hospital of Traditional Chinese Medicine， Haikou 570216， Hainan， China

ObjectiveTo investigate the correlation between serum homocysteine (Hcy) and Lipoprotein lipase (LPL) gene polymorphism in elderly patients with acute coronary heart disease.MethodsEighty-four patients with coronary heart disease in our hospital from January 2015 to March 2016 were as observation group.Fifty-three healthy individuals were as controls.The polymorphism of LPL gene locus rs11570892 and serum Hcy， total cholesterol (TC)， triglyceride (TG)， low density lipoproteincholesterol (LDL-C) and high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) levels were detected.ResultsThe levels of Hcy and TG were (20.10±6.43) mmol/L and (1.81±0.93) mmol/L in observation group， which was significantly higher than that in control group (Plt;0.05).HDL-C level was (0.81±0.21) mmol/L， which was significantly lower than that in control group (Plt;0.05).There was no difference in LPL rs11570892 locus genotype and allele between two groups (Pgt;0.05).TG level in observation group with GG patients was significantly higher than that in patients with AA and GA (Plt;0.05).HDL-C level in observation group with GG patients was significantly higher than that in patients with AA and GA (Plt;0.05).There was no difference in serum Hcy， TC and LDL-C among patients with different genotypes (Pgt;0.05).ConclusionLPL gene polymorphism was not associated with serum Hcy in elderly patients with acute coronary heart disease， which may be related to the serum lipid level.

coronary heart disease；serum homocysteine;LPL gene polymorphism；elderly patients；blood lipid

R541.4 R256.2

B

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.21.028

1672-1349(2017)21-2750-04

海南省海口市中醫(yī)醫(yī)院 (海口 570216)，E-mail：lan86453@163.com

信息：黎才麗，黃勇，許政衡.老年冠心病急性發(fā)作期病人血清同型半胱氨酸與LPL基因多態(tài)性相關分析[J].中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2017，15(21)：2750-2753.