動物亞硝酸鹽中毒透析法檢驗

常倫勝+李向軍+王強+陳亞茹

摘要：在自然條件下，很多青飼料如白菜、甜菜等在硝化細菌的作用下極易還原為亞硝酸鹽，造成牛、羊、豬等家畜中毒。對中毒動物胃腸內容物提取常采用水浸法，當檢材色素較嚴重或黏稠時，用水浸法不理想，可用透析法提取，透析法所得被檢液是澄清的。透析法是利用低分子化合物的細小分子或離子在溶液中可以自由通過半透膜，而一些大分子、結構龐大的化合物如脂肪、蛋白質等不能通過而得以分離。

關鍵詞：亞硝酸鹽；中毒；透析法

中圖分類號：S859.81 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2017）11-0020-01

在自然條件下，亞硝酸鹽是硝酸鹽在硝化細菌的作用下還原為氨過程中的中間產物，故亞硝酸鹽的產生取決于硝酸鹽的數量與硝化菌的活躍程度這兩個條件。很多青飼料如白菜、青菜、圓白菜、甜菜及其葉含硝酸鹽，甜菜的干物質中含硝酸鉀1.32%～3.13%，施用硝化鹽化肥或2，4-D除草劑的甜菜含量最高。這些蔬菜在大量使用氮肥及除草劑時其硝酸鹽含量更高，造成牛、羊、豬等家畜中毒。對中毒動物胃腸內容物提取常采用水浸法，當檢材色素較嚴重或黏稠時，用水浸法不理想，可用透析法提取，透析法所得被檢液是澄清的。透析法是利用低分子化合物的細小分子或離子在溶液中可以自由通過半透膜，而一些大分子、結構龐大的化合物如脂肪、蛋白質等不能通過而得以分離。現對透析法的材料及方法介紹如下，供參考。

1 半透膜制作

取火棉膠數毫升，倒入潔凈干燥的小燒杯中，迅速轉動燒杯，使火棉膠均勻地分布在燒杯內壁上，形成一層薄膜，待薄膜干燥后，輕輕用刀尖將邊緣剝離，向薄膜與內壁間輕輕吹氣，注入冷水，即可完整的取下，檢查是否完整無損。

2 檢材提取步驟

（1）將檢材切細，輕輕裝入已做好的半透膜中，用線將膜口系在玻管的一端。

（2）把盛有檢材的半透膜浸入較大的燒杯中，浸入深度應使檢材與蒸餾水保持在同一水平線上。

（3）用滴管在玻璃管上口向半透膜內滴加蒸餾水，使成粥狀。

（4）透析1 h左右，取出膜外透析液進行檢驗。

3 格林試劑配制

對氨基苯磺酸1.0 g，甲萘胺（α-萘胺）0.1 g，酒石酸8.9 g，混合研磨均勻，儲于棕色廣口瓶內，避光保存，備用。

4 亞硝酸鹽標準紙片的制備

取濾紙剪成1 cm2大小。取亞硝酸鈉（鉀）溶液，其含量為600 mg/mL。用0.25 mL移液器往每張濾紙片上各滴0.005 mL亞硝酸鹽溶液（0.005 mL中含3 μg亞硝酸鹽），使之自然干燥、備用。

從制成的紙片中任選10片分別置于10支試管中，分別取亞硝酸鹽標準溶液0、0.25、0.50、1.00、2.00 mL于另外5支試管中（作為標準比色列）。以上各管均加水至5 mL，再加格林試劑0.1 g，混勻，放置5～10 min，然后比色，若有半數未達到2.5～5.0 μg（即未達到比色列的第2至3管的顏色深度），則所做紙片全部不能用，應另做。若達到標準，則將紙片裝入棕色廣口瓶中備用。

5 樣品檢測方法

取小試管3支，一管加被檢液2.5 mL為樣品管，一管加亞硝酸鹽紙片1片，為標準管，另一管為空白管。3管分別加水至5 mL。各管加格林試劑0.1 g，混勻，放置5～10 min。

結果判定：若樣品管與標準管顏色相近或深于標準管，則有亞硝酸鹽中毒的可能；若樣品管的顏色淺于標準管，則亞硝酸鹽中毒的可能性不大；若樣品管顏色很深或呈磚紅色并產生沉淀，說明亞硝酸鹽的含量很高。

此法便于現場檢查，但要求標準試紙精確可靠。endprint