不同狀態的乙肝病毒感染者血清Tim-3水平與疾病進展關系研究

安仲武，王 波*，戴善梅，蔣 玲，閆朝春

(1.連云港市東方醫院 檢驗科；2.連云港市東方醫院 感染科,江蘇 連云港222042)

不同狀態的乙肝病毒感染者血清Tim-3水平與疾病進展關系研究

安仲武1，王 波1*，戴善梅2，蔣 玲1，閆朝春1

(1.連云港市東方醫院 檢驗科；2.連云港市東方醫院 感染科,江蘇 連云港222042)

目的對不同狀態的HBV感染者血清Tim-3水平變化與疾病進程關系的初步探討。方法檢測39例慢性乙肝患者(CHB組)、42例乙肝病毒攜帶者(AsC組)、31例慢性乙肝急性發作患者及40例健康體檢者血清Tim-3水平，并同時檢測血清ALT、TBIL、HBV-DNA、HBc-Ab水平，并做統計學處理。結果慢性HBV感染者血清Tim-3水平較健康組升高，急性發作組Tim-3、ALT、HBcAb水平顯著高于CHB組及AsC組，Tim-3水平與ALT、HBcAb成正相關。相關性分析顯示當2×ULNlt;ALTlt;10×ULN(正常范圍上限)與Tim-3相關性更加明顯，差異有統計學意義(Plt;0.01)；所有患者Tim-3水平與HBV-DNA載量無明顯相關。結論慢性HBV感染者有較高的Tim-3水平，且急性發作時Tim-3升高更明顯，與ALT明顯相關，可以作為慢性HBV感染者病情變化的監測指標之一。

慢性乙型病毒感染；慢性乙肝急性發作；Tim-3；谷丙轉氨酶

(ChinJLabDiagn,2017,21:1901)

慢性乙型肝炎是目前我國廣泛流行、危害較嚴重的傳染病，大多肝硬化、肝癌患者均伴有乙肝病毒感染，因此及時了解慢性乙肝患者的病情變化十分必要。研究表明，機體的細胞免疫功能水平在慢性乙肝患者病情變化過程中發揮重要調節作用[1]。Tim-3(T cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule-3，Tim-3)屬于T細胞免疫球蛋白粘蛋白基因家族，主要表達在Th1細胞上的免疫調節分子，具有導致Th1細胞凋亡和負性調節Th1型免疫功能的作用[2]。研究發現，在HBV感染的過程中，Th1細胞通過分泌細胞因子促進細胞免疫反應，利于清除病毒[3]。另有研究發現慢性乙肝患者單核細胞表面Tim-3的mRNA及蛋白質的表達顯著升高[4]。這些均提示Tim-3在乙肝病毒感染過程中發揮著重要的作用。本文分析不同狀態的慢性HBV感染者血清Tim-3水平，及其與其他指標的關系，進一步探討Tim-3在慢性乙肝病情變化過程中的監控作用。

1 資料與方法

1.1病例標本收集收集2015年7月至2016年12月在我院門診及住院慢性乙肝病毒感染者共112例，男59例，女53例，平均年齡45.4歲。按2015年版《慢性乙肝防治指南》[5]分為：慢性乙肝患者39例，男21例，女18例；慢性乙肝病毒攜帶者42例，男22例，女20例，慢性乙肝急性發作患者31例，男17例，女14例。所有患者其他肝炎標志物檢查為陰性，排除柯薩奇病毒、艾滋病病毒等其他病毒感染，排除藥物、飲酒等對肝臟的損害。另選同期40例健康體檢者作為對照組，男21例、女19例，平均年齡48.3歲，肝、腎功能檢查正常，各項病毒標志物檢查為陰性。所有入選對象清晨抽取兩管靜脈血，待凝固后4 000 r/min離心10 min分離血清備用。

1.2儀器與方法

1.2.1生化免疫指標檢測 德靈生化分析儀及配套試劑檢測ALT、TBIL水平，索林化學發光分析儀及配套試劑檢測HBc-Ab含量，羅氏PCR分析儀及配套試劑檢測HBV-DNA拷貝數。

1.2.2Tim-3檢測 采用酶聯免疫吸附法檢測，試劑購自上海瓦蘭生物科技有限公司，用北京普朗新技術有限公司NDM-9602G酶標儀讀取數值。

2 結果

2.1CHB組和CHB急性發作組Tim-3、ALT水平較AsC組及對照組顯著升高；且急性發作組顯著高于其他各組，差異有統計學意義(Plt;0.05)。見表1。

表1 4個組別檢測指標比較

注：a與對照組比較，b與AsC組比較，c與CHB組比較：Plt;0.05.

2.2Tim-3與不同ALT水平及其他指標的相關性分析

Tim-3水平隨ALT升高而上升，當2×ULNlt;ALTlt;10×ULN的患者血清Tim-3水平與ALT顯著相關，相關系數r值為0.67。Tim-3水平與HBcAb成正相關，相關系數r值為0.52，與TBIL的相關系數r值為0.23，無明顯相關，與HBV-DNA拷貝數無相關性。見表2。

表2 不同ALT水平與其他指標水平比較

注：a與ALTlt;2×ULN比較：Plt;0.05.b與 5～10×ULN組比較：Pgt;0.05.

3 討論

HBV感染機體后可有多種臨床狀態，目前關于感染進展的原因仍不明確。研究表明，HBV不直接殺傷肝細胞，而是誘導機體免疫應答造成肝細胞損傷及炎癥反應，而免疫應答的持續存在是CHB發展為肝硬化、肝癌的重要因素[6]。因此，HBV感染機體后機體的免疫應答水平強弱及細胞免疫功能是影響病情的轉歸和臨床表現狀態的重要因素。眾所周知，Th細胞在調節機體細胞和體液免疫應答水平的動態平衡中其關鍵作用。既往研究發現，Th1細胞在機體HBV感染過程中發揮重要的調節作用，可分泌多種細胞因子，增加CD8+細胞活性，促進細胞免疫應答，提高了機體清除病毒的能力，但同時加重肝細胞損傷，使ALT、AST等反應肝損傷的指標升高[7]。Th2細胞誘發機體體液免疫反應以清除細胞外病原體，防止感染源的擴散，同時抑制細胞免疫應答水平，降低肝臟損傷[8]。因此，Th1及Th2細胞亞群動態平衡的建立，對HBV感染者的治療有重要意義。

Tim-3是T細胞免疫球蛋白粘蛋白基因家族成員之一，主要表達在分化終末期的Th1細胞上，另在多種其他免疫細胞如NK細胞、樹突狀細胞、單核/巨噬細胞等表面也有表達[9]。在機體病毒感染過程中Tim-3與其配體galectin-9信號傳導通路參與Th1細胞凋亡及免疫耐受的形成。研究發現在HIV、HCV等病毒慢性感染過程中，阻斷Tim-3/ galectin-9通路可恢復部分特異性T細胞的增殖及細胞因子分泌水平[10]，另有研究發現，阻斷CHB患者Tim-3/ galectin-9通路可以促進表達IFN-γ的HBV特異性CTL增殖，增強抗病毒效應[11]。這些均表明在病毒感染過程中Tim-3可負向調節Th1細胞介導的細胞免疫水平，參與病毒感染疾病進程。本文從HBV感染后患者的不同臨床表現狀態，分析Tim-3在HBV感染的不同臨床狀態的表達水平變化，進一步探討其在乙肝發生、發展中的作用。

本實驗發現，慢性HBV感染者有較高的Tim-3水平，且與肝功指標關系密切。慢性乙肝病毒攜帶者ALT正常但Tim-3水平較對照組有升高。分析原因可能為，乙肝病毒攜帶者機體對感染乙肝病毒的肝細胞處于免疫耐受狀態，具有免疫應答作用的T細胞處于較低水平，免疫系統不能有效識別HBV，不能HBV產生有效免疫應答[12]，而Tim-3/ galectin-9通路持續活動可能是造成機體抗病毒免疫應答低下的因素之一。根據ALT水平分類比較顯示，當ALTgt;2×ULN，Tim-3水平有明顯的上升，與HBV病毒載量無明顯相關。2015年版《慢性乙肝防治指南》中指出ALTgt;2×ULN為接受抗病毒治療人群的標準，提示當ALTgt;2×ULN時，肝臟炎癥活動較重，此時機體免疫細胞分泌的細胞因子可能處于較高水平[5]，從而刺激Tim-3水平的升高來負向調控機體Th1細胞水平，降低細胞因子的分泌，ALT水平的越高，Tim-3水平的升高越明顯。當ALTgt;10×ULN后，對比5×ULNlt;ALTlt;10×ULN范圍，Tim-3水平變化無統計學意義(Pgt;0.05)，說明兩者并不是一直密切相關，Tim-3水平可能還受其他因素影響，有待進一步研究。

總之，不同狀態的慢性乙肝病毒感染者有不同的Tim-3水平，其水平變化與疾病的進展密切相關，本研究由于病例較少及方法學限制，具體機制有待進一步研究，Tim-3可以作為慢性HBV感染者免疫應答水平的監測指標，對慢性乙肝的急性發作有較好的監控作用。

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StudyontherelationshipbetweenserumTim-3levelandthediseaseprocessindifferentstateofhepatitisBvirusAN

Zhong-wu1,WANGBo1,DAIShan-mei2,etal.

(1.ClinicalLaboratory; 2.InfectionDepartment,TheEastHospitalofLianYungang,Lianyungang222042，China)

ObjectiveAnalysis the change of serum Tim-3 level in different state of chronic hepatitis B virus infected patients and the relationship with the disease process.MethodsDetect serum Tim-3 levels in 39 cases of chronic hepatitis B patients(CHB),42 cases of hepatitis B virus carriers(AsC),31 cases of chronic hepatitis B patients with acute exacerbation and 40 cases of healthy people,meanwhile detect the levels of serum ALT,TBIL,HBV-DNA and HBc-Ab,then make statistics processing.ResultsThe levels of serum Tim-3 were higher in HBV infected patients than healthy group,the level of serum Tim-3,ALT,HBcAb in acute exacerbation group were significantly higher than that of CHB and AsC group.There was positive correlation between Tim-3 and ALT,HBcAb .Correlation analysis showed that when the ALT levels between 2 ULN and 10 ULN(the limit of the normal range),the correlation was more obvious,the difference was statistically significant (Plt;0.05).There was no significant association between Tim-3 and HBV-DNA in all the patients.ConclusionChronic HBV infected patients have a higher level of Tim-3,and more obvious when it acute exacerbation,and was significantly related with ALT level.It can be used as one of a monitoring indicator in the chronic HBV infected patients disease progression.

Chronic hepatitis B virus infection;Chronic hepatitis B acute exacerbation;Tim-3;ALT

連云港市科技局社會發展項目(ZD1507)

*通訊作者

1007-4287(2017)11-1901-03

R575.1

A

安仲武(1983-)，男，主管檢驗師，檢驗科副主任，研究方向：臨床生化免疫標志物的應用。

2016-12-17)