非洲綠猴血液學(xué)和血清生化指標(biāo)的測定及分析

周小軍，袁菊芳，定 明，王 進(jìn)，葉華虎，法云智

(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，北京 100071)

非洲綠猴血液學(xué)和血清生化指標(biāo)的測定及分析

周小軍，袁菊芳，定 明，王 進(jìn)，葉華虎*，法云智

(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，北京 100071)

目的檢測50只健康非洲綠猴血液學(xué)、血清生化指標(biāo)，分析不同性別、不同年齡段(青幼年組：1 ～ 3歲，成年組：4 ～ 6歲)非洲綠猴的血液學(xué)、血清生化指標(biāo)的差異。方法應(yīng)用全自動血細(xì)胞分析儀及血液生化分析儀分別測定清醒狀態(tài)下健康非洲綠猴血液學(xué)及血清生化指標(biāo)。結(jié)果血液學(xué)指標(biāo)中青幼年組與成年組差異顯著的指標(biāo)有紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血細(xì)胞壓積(HCT)、中性粒細(xì)胞百分比(NEUT%)、淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH%)、單核粒細(xì)胞百分比(MONO%)、嗜堿性粒細(xì)胞百分比(BASO%)(P< 0.05)。青幼年組中雌猴與雄猴差異顯著的指標(biāo)有白細(xì)胞數(shù)(WBC)、RBC、HGB、HCT、NEUT%、LYMPH%、MONO%(P< 0.05)，成年組中雌猴與雄猴差異顯著的指標(biāo)有HCT(P< 0.05)，其它指標(biāo)差異不顯著。血清生化指標(biāo)中青幼年組與成年組差異顯著的指標(biāo)有白蛋白(ALB)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酐(CREA)(P< 0.05)，青幼年組雌猴與雄猴差異顯著的指標(biāo)有CREA(P< 0.05)，成年組雌猴與雄猴差異顯著的指標(biāo)有總蛋白(TP)、膽固醇(CHOL)(P< 0.05)，其它指標(biāo)差異不顯著。結(jié)論本文初步建立了非洲綠猴的常規(guī)生物學(xué)數(shù)據(jù)，為評價其生物學(xué)特性及相關(guān)應(yīng)用提供一定的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，可供參考。

非洲綠猴；血液學(xué)指標(biāo)；血清生化指標(biāo)

非人靈長類作為科研戰(zhàn)略性資源已成為一種共識，我國是靈長類動物資源豐富的國家之一，現(xiàn)已查明的非人靈長類動物超過7大類20余種，但成功馴養(yǎng)且達(dá)到規(guī)模化生產(chǎn)的的實驗動物僅有中國源恒河猴和食蟹猴。一些在疫苗評價、AIDS研究、移植等領(lǐng)域廣泛使用且被證實是最好模型的非洲綠猴、狨猴、狒狒等動物在我國尚屬空白。引進(jìn)整合國內(nèi)外具有重要研究和開發(fā)價值或潛在價值的非人靈長類，完成人工馴養(yǎng)、種群擴(kuò)繁、規(guī)范化飼養(yǎng)管理，將對我國在重大疾病(如肝炎、AIDS、心血管疾病、腫瘤等)領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和新藥研發(fā)提供有力支撐。非洲綠猴(African green monkey，AGM)，屬靈長目獼猴科綠猴屬，生活在撒哈拉沙漠以南非洲國家的熱帶草原地區(qū)。非洲綠猴在生物醫(yī)學(xué)研究，如神經(jīng)生物學(xué)、心血管疾病、病毒感染及藥學(xué)評價等方面有許多應(yīng)用[1-5]。本中心是首家將非洲綠猴引進(jìn)國內(nèi)開展實驗動物化培育的單位，本研究較全面地檢測了非洲綠猴各項血液學(xué)和血清生化指標(biāo)，并根據(jù)動物的不同性別、不同年齡進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。該正常參考值的建立，也將為新藥開發(fā)及安全性評價、猴群飼養(yǎng)管理中疾病的診療等提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1實驗動物

本中心飼養(yǎng)的非洲綠猴50只外購自烏干達(dá)，雌性30只，雄性20只。級別：普通級；年齡：1 ～ 6歲 [SCXK (軍) 2012-0019]。飼養(yǎng)條件：單籠飼養(yǎng)，動物室溫度維持在18℃ ～ 28℃，濕度控制在40% ～ 70%，室內(nèi)空氣每小時更換8 ～ 10次，照度150 ～ 300 Lux；12 h光照/黑暗循環(huán)控制 [SYXK (軍) 2012-0021]。每日飼喂全價營養(yǎng)顆粒料，輔以清潔水果，自由飲水。

1.2實驗方法

1.2.1 血樣采集

在非洲綠猴清醒空腹?fàn)顟B(tài)下，通過后肢靜脈采集乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血共1 mL，非抗凝血3 mL。全血凝結(jié)后，3000 rpm離心15 min分離血清待用?？鼓糜谘簩W(xué)指標(biāo)檢測，血清用于血清生化指標(biāo)檢測，血液學(xué)及血清生化指標(biāo)檢測在軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科完成。

1.2.2 血液學(xué)指標(biāo)測定

在采血后2 h內(nèi)，應(yīng)用貝克曼全自動血球計數(shù)儀檢測以下血液學(xué)指標(biāo)：白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血細(xì)胞壓積(HCT)、紅細(xì)胞平均容量(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白容量(MCH)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計數(shù)(PLT)、中性粒細(xì)胞百分比(NEUT%)、淋巴細(xì)胞百分比(LYMPH%)、單核粒細(xì)胞百分比(MONO%)、嗜堿性粒細(xì)胞百分比(BASO%)、嗜酸性粒細(xì)胞百分比(EO%)。

1.2.3 血清生化指標(biāo)測定

在采血后2 h內(nèi)，應(yīng)用貝克曼全自動生化分析儀檢測以下血清生化指標(biāo)：血糖(GLU)、肌酸激酶(CK)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1非洲綠猴血液學(xué)指標(biāo)比較

青幼年雄猴組與成年雄猴組差異有顯著性的血液學(xué)指標(biāo)有RBC、HGB、HCT、NEUT%、LYMPH%、MONO%(P< 0.05)，青幼年雌猴組與成年雌猴組差異有顯著性的指標(biāo)有RBC、LYMPH%、BASO%(P< 0.05)；青幼年組中雌猴與雄猴差異有顯著性的指標(biāo)有WBC、RBC、HGB、HCT、NEUT%、LYMPH%、MONO%(P< 0.05)，成年組中雌猴與雄猴差異有顯著性的指標(biāo)有HCT(P< 0.05)，其它指標(biāo)差異無顯著性。見表1。

Tab.1Comparison of hematological parameters of African green monkeys

1～3歲1-3yearsold4～6歲4-6yearsold雄性Male雌性Female雄性Male雌性Female數(shù)量Quantities9141116WBC/109/L5.0±2.05.3±2.5#5.8±2.46.7±2.3RBC/1012/L6.9±0.65.9±0.6#6.1±0.7*5.6±0.4*HGB/g/L156.2±13.5133.0±15.1#136.5±15.2*126.3±10.3HCT/%52.7±3.844.0±4.4#45.5±5.3*42.2±2.4#MCV/fL75.8±2.474.3±4.275.2±3.875.7±3.5MCH/pg22.4±0.722.4±1.422.4±1.022.6±1.3MCHC/g/L296.0±9.1302.2±10.2298.1±8.3299.0±10.2PLT/103/μL262.2±56.1270.4±103.2250.2±106.5237.1±61.1NEUT/%52.7±3.844.1±4.4#45.5±5.3*42.2±2.4LYMPH/%39.1±14.853.7±20.6#61.8±19.9*63.7±18.4*MONO/%6.1±1.94.2±2.1#3.6±1.4*3.0±1.3EO/%0.1±0.10.2±0.30.2±0.40.3±0.3BASO/%0.3±0.20.3±0.20.4±0.30.2±0.1*

注：與青幼年同性別組相比，*P< 0.05；與同年齡雄性組相比，#P< 0.05。

Note. Compared with the juvenile group of the same sex,*P< 0.05； Compared with the male group of the same age,#P< 0.05.

2.2非洲綠猴血清生化指標(biāo)比較

青幼年組與成年組差異有顯著性的指標(biāo)有ALB、AST、ALP、CREA(P< 0.05)，青幼年組雌猴與雄猴差異有顯著性的指標(biāo)有CREA(P< 0.05)，成年組雌猴與雄猴差異有顯著性的指標(biāo)有TP、CHOL(P< 0.05)，其它指標(biāo)差異無顯著性。見表2。

Tab.2Comparison of serum biochemical parameters of African green monkeys

1～3歲1-3yearsold4～6歲4-6yearsold雄性Male雌性Female雄性Male雌性Female數(shù)量Quantities9141116GLU/mmol/L4.4±1.44.9±2.03.7±1.55.0±2.9TP/g/L59.0±6.261.2±7.161.0±4.065.3±5.2#ALB/g/L56.1±5.058.0±6.250.3±5.1*54.2±4.2*TG/mg/L389.2±106.1469.1±115.2478.3±212.3548.2±133.2CHOL/g/L1.1±0.21.2±0.21.0±0.21.2±0.2#ALT/U/L65.4±28.555.4±31.587.5±66.048.8±22.7AST/U/L123.9±32.999.1±20.284.6±28.6*48.8±22.7*ALP/U/L106.4±72.8278.5±146.066.8±13.9*196.3±166.8*CK/U/L177.0±96.5334.6±365.7335.5±316.0434.1±363.0LDH/U/L448.2±150.0602.1±255.7537.6±193.2760.3±428.3BUN/mg/L245.2±84.1258.1±75.2265.0±94.2312.2±102.1CREA/mg/L745.2±69.1635.1±71.0#655.2±82.2*670.1±85.1*

注：與青幼年同性別組相比，*P< 0.05；與同年齡雄性組相比，#P< 0.05。

Note. Compared with the juvenile group of the same sex,*P< 0.05； Compared with the male group of the same age,#P< 0.05.

3 討論

作為與人類親緣關(guān)系最為接近的物種，非人靈長類與人類具有高度遺傳同源性，為基礎(chǔ)研究和臨床前研究提供了理想的動物模型。我國靈長類動物資源豐富，但成功馴養(yǎng)且達(dá)到規(guī)模化生產(chǎn)的實驗動物僅有中國源恒河猴和食蟹猴。近年來，我國的一些特色非人靈長類資源在開發(fā)利用上顯示出良好的苗頭，如平頂猴是HIV的易感動物且病變過程與人AIDS相似[6]；藏酋猴對志賀菌高度敏感，其生物節(jié)律與人最接近[7]。但受限于資源的稀有性和人工培育的落后，平頂猴、藏酋猴等動物在國內(nèi)外尚未建成標(biāo)準(zhǔn)化實驗動物，而且動物的遺傳背景、環(huán)境差異、微生物質(zhì)量、飼養(yǎng)規(guī)范都不明確，研究結(jié)果的科學(xué)性得不到保證。非洲綠猴在疫苗評價、AIDS研究和移植等領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，將其引入國內(nèi)并開展人工馴養(yǎng)、種群擴(kuò)繁以及標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)研究，對相關(guān)領(lǐng)域(如肝炎、AIDS、心血管疾病、腫瘤等)的基礎(chǔ)研究和新藥研發(fā)等具有重要價值。

非洲綠猴在生物醫(yī)學(xué)研究，如神經(jīng)生物學(xué)、心血管疾病、病毒感染及藥學(xué)評價等方面有許多應(yīng)用[8]。建立非洲綠猴相關(guān)基礎(chǔ)生物學(xué)數(shù)據(jù)對于其實驗動物化培育及開展相關(guān)研究都至關(guān)重要，為此本研究較全面地檢測了非洲綠猴各項血液學(xué)和血清生化指標(biāo)，其中大部分指標(biāo)的范圍與Chichester等[9]的報道基本一致，ALB均值略偏高，PLT、TP、TG、CHOL均值略偏低，可能與營養(yǎng)狀況和遺傳差異有關(guān)，ALP、CK、LDH等代謝酶類指標(biāo)樣本間波動相對較大，也與文獻(xiàn)相符[9-11]。本研究使用的非洲綠猴受種群數(shù)量限制，年齡段不夠?qū)挿海欢ǔ潭壬显黾恿私y(tǒng)計學(xué)差異。另外，與恒河猴和食蟹猴有關(guān)數(shù)據(jù)相比[12-15]，非洲綠猴均值偏高的指標(biāo)有WBC、BUN、CREA，均值偏低的指標(biāo)有PLT、TP，也表現(xiàn)出一定的種間差異性。

除了性別和年齡外，營養(yǎng)與飼養(yǎng)方式、血樣的采集與儲存運送、試劑及檢測方法等不同，也會影響相應(yīng)指標(biāo)的測定。本文選取的50只非洲綠猴健康及精神狀況均良好，采血方式為清醒空腹?fàn)顟B(tài)下采集后肢靜脈血，選用試劑和儀器可以保證結(jié)果的均一性和可靠性。此外，非洲綠猴應(yīng)激反應(yīng)比恒河猴和食蟹猴更強(qiáng)，抓捕猴子應(yīng)避免其過度驚嚇引起腎上腺素升高而導(dǎo)致一些酶類物質(zhì)代謝異常，從而影響其測定值的波動范圍。綜上，本研究初步建立了非洲綠猴血液學(xué)和血清生化指標(biāo)的正常參考值，可為新藥開發(fā)及安全性評價、猴群飼養(yǎng)管理中疾病的診療等提供參考數(shù)據(jù)。

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Measurementandanalysisofhematologicandserumbiochemical
parametersinAfricangreenmonkeys

ZHOU Xiao-jun， YUAN Ju-fang， DING Ming， WANG Jin， YE Hua-hu*， FA Yun-zhi

(Laboratory Animal Center, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China)

ObjectiveTo determine the hematological and serum biochemical parameters of 50 healthy African green monkeys, and to analyze the difference of these values between different groups of sex and age (the juvenile group: 1 - 3 years old, the adult group: 4 - 6 years old).MethodsBlood samples were obtained from the monkeys in the awake state, and the hematological and serum biochemical parameters of the samples were measured using an automatic blood cell analyzer and blood biochemical analyzer, respectively.ResultsAmong all of the hematologic values, the number of red blood cells (RBC), the amount of hemoglobin (HGB), hematocrit (HCT), and percentages of the neutrophils (NEUT%), lymphocytes (LYMPH%), monocytes (MONO%) and basophils (BASO%) were significantly different between the juvenile group and the adult group (P< 0.05). In the juvenile group, parameters such as the number of the white blood cells (WBC), RBC, HGB, HCT, NEUT%, LYMPH%, MONO% were significantly different between the female and the male monkeys (P< 0.05). As for the adult group, the HCT value was of significant difference， while the other indexes were not significantly different between the female and male monkeys (P< 0.05). Among the serum biochemical values, the quantities of albumin (ALB), aspartate aminotransferase (AST), alkaline phosphatase (ALP) and creatinine (CREA) were significantly different between the juvenile group and adult group (P< 0.05). The amount of CREA of the juvenile females was significantly different from that of the juvenile males (P< 0.05), and the values of total protein (TP) and cholesterol (CHOL) of the adult females were significantly different from those of the adult males (P< 0.05), while the other indexes were not significantly different.ConclusionsAs a reference, the routine biological data of African green monkeys we have established in this study lay a foundation for the evaluation of their biological properties and further application in related studies.

African green monkeys; Hematological parameters; Serum biochemical parameters

國家自然科學(xué)基金(編號：31272514，31501908)。

周小軍(1983 -)，男，助理研究員，博士，研究方向：非人靈長類實驗動物模型。E-mail: zhouxiaojun320320@126.com

葉華虎(1970 -)，男，副研究員，博士，研究方向：實驗動物病毒學(xué)。E-mail: huahuy512@126.com

R-33

A

1671-7856(2017) 11-0006-04

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.11.002

2017-01-05