用優化高效液相色譜法測定大棗中蘆丁含量的效果研究

李 環

（廣東汕頭大學醫學院第一附屬醫院 廣東 汕頭 515041）

·論著·

用優化高效液相色譜法測定大棗中蘆丁含量的效果研究

李 環

（廣東汕頭大學醫學院第一附屬醫院 廣東 汕頭 515041）

目的：研究用優化高效液相色譜法測定大棗中蘆丁含量的效果。方法：使用優化高效液相色譜法測定大棗中蘆丁的含量，測定時的標準為：MACHEREY-NAGEL(MN) NUCLEODUR 100-5 C18柱(BATCH2064)，測定時的流動相為：乙腈-0.05%磷酸（0.15：0.85），流速為：1.0ml/min，波長為：257nm，柱溫為：40℃。結果：經檢測，蘆丁的線性范圍為0.05055～0.4044μg，其相關系數為r＝0.9987，其加樣回收率為97.06%。上述結果均符合相關的標準，RSD=1.3%(n=6)。結論：用優化高效液相色譜法測定大棗中蘆丁含量的效果確切，而且能夠避開大棗中糖類成分對測量結果的干擾。

大棗；蘆丁含量；高效液相色譜法；測定

大棗既是一種常見的食品，又是中醫常用的藥物?，F代藥理學研究發現，大棗中最有藥用價值的成分為蘆丁[1,2]。不過，由于大棗中含有大量的可影響蘆丁測定結果的糖類成分，因此如何準確地測定大棗中蘆丁的含量一直是藥理學中的一個難題。在本次研究中，筆者使用優化高效液相色譜法測定大棗中蘆丁的含量，取得了令人滿意的效果。現將本次實驗的過程和結果報告如下：

1 實驗部分

1.1 實驗用的儀器 本次實驗使用的儀器包括：島津牌LC-10AT型高液相色譜儀、烘箱（WTB-BINDER ZYD04030）、粉碎機（RT-04）。

1.2 實驗用的試劑和對照品 本次實驗使用的試劑和對照品包括：乙醇、正丁醇、磷酸、丙酮（以上試劑均為A.R級，由廣州化學試劑廠提供）、蒸餾水、乙腈、甲醇（流動相為色譜醇）、大孔吸附樹脂（D-101凈品型，由廣州市廣聯津化工有限公司提供）、聚酰胺薄膜（10×20cm，由浙江省臺州市路橋四青生化材料廠提供）、蘆?。ㄊ|香苷）對照品（由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為：0080-9705號）

1.3 試驗用的藥材 本次實驗使用的藥材為大棗（由廣州奇星制藥有限公司提供），其干燥和粉碎的方法為：將大棗切成薄片。將大棗片放入烘箱中進行烘烤，烘烤時的溫度為70℃。待大棗片完全烘干后，將其在干燥的環境中放置8個小時，然后用粉碎機對其進行粉碎處理。

2 實驗的方法與結果

2.1 提取溶劑

2.1.1 進行水煮提取 精密稱取大棗樣品2g，將其放入250ml的燒杯中，并向燒杯中加入100ml的蒸餾水，然后用大火對燒杯進行加熱，直至燒杯中的溶液沸騰后轉為小火煮1.5個小時。

2.1.2 進行超聲提取 精密稱取大棗樣品2g，將其放入有塞的錐形瓶中，然后向錐形瓶中分別加入100ml濃度為50%的甲醇、100ml濃度為80%的甲醇和100ml濃度為90%的甲醇，并放置1個小時，最后對浸泡好的大棗樣品進行30分鐘的超聲提取。

2.1.3 進行索氏回流提取 精密稱取大棗樣品2g，將其放入濾紙筒中，用100ml濃度為50%的甲醇對其進行3個小時的索氏回流提取，直至大棗樣品的顏色完全消失。

2.1.4 提取的結果 見圖1和表1。

表1 提取的比較(mg/g)

圖1 不同提取方法及提取溶劑樣品的HPLC色譜圖(該圖由下至上依次為蘆丁對照品、水煮提取的結果、超聲提取的結果和索氏回流提取的結果)

2.2 進行正丁醇抽提 對大棗樣品溶液進行過濾，提取其中的殘渣。先用提取溶媒洗滌過濾后的大棗樣品殘渣，然后用50ml的蒸餾水對大棗的殘渣進行分次洗滌，將洗滌獲得的溶液放入分液漏斗中，再用水飽和正丁醇對該溶液進行抽提，每次抽提40ml。留取抽提第四次和抽提第五次的溶液，將其分別蒸干并進行薄層檢查（進行薄層檢查的條件可參考2000年版的《中國藥典》）。進行薄層檢查的結果顯示，用水飽和正丁醇對大棗樣品殘渣溶液進行抽提4次后，基本能夠提取出大棗中的蘆丁成分。

2.3 進行上柱試驗（D101）

2.3.1 進行洗脫液極性的比較 將大棗樣品上柱后，分別用60ml的蒸餾水、60ml濃度為30%的乙醇、60ml濃度為50%的乙醇和60ml濃度為80%的乙醇對其進行洗脫處理，并收集每種洗脫液。對每種洗脫液都進行蒸干處理，然后用1ml的甲醇對每種洗脫液的殘渣進行溶解，并對溶解液進行聚酰胺薄層檢查。檢查的結果為：用濃度為50%的乙醇進行洗脫處理時大棗中蘆丁的斑點最清晰（為兩個斑點），用濃度為30%的乙醇和濃度為80%的乙醇進行洗脫處理時大棗中蘆丁的斑點隱約可見。因此，可將濃度為50%的乙醇作為洗脫大棗樣品的標準溶液。

2.3.2 進行洗脫液體積的比較 將大棗樣品上柱，分別用60ml的蒸餾水、60ml濃度為50%的乙醇、50ml濃度為50%的乙醇和40ml濃度為50%的乙醇對其進行洗脫處理，并收集每種洗脫液。對每種洗脫液都進行蒸干處理，然后用1ml的甲醇對每種洗脫液的殘渣進行溶解，并對溶解液進行聚酰胺薄層檢查。檢查的結果為：用60ml濃度為50%的乙醇進行洗脫處理時大棗中蘆丁的斑點最清晰。

2.4 進行流動相和柱溫的比較 本次實驗先使用甲醇-0.5%磷酸(0.32：0.48)作為流動相，將柱溫調節至38℃后進行實驗，結果未能獲得大棗樣品的色譜峰。然后，本次實驗使用乙腈-0.05%磷酸（0.15：0.85）作為流動相，將柱溫調節至40℃后進行實驗，結果獲得了大棗樣品的色譜峰。

2.5 進行線性關系考察 精密稱取適量的蘆丁對照品，用甲醇將其配制成濃度為0.2022mg/ml的對照品溶液。精密稱取蘆丁對照品溶液2ml，將其放入20ml的量瓶中，用甲醇對其進行定溶，然后對其色譜峰面積（A）和濃度（c）進行線性關系考察。進行線性關系考察的回歸方程為：C=-3.543621×10-3+6.7052×10-7A，r=0 .9987。結果顯示，蘆丁對照品的線性范圍為：0.05055-0.4044μg。

2.6 進行精密度試驗 取蘆丁對照品溶液(20.22ug/ml)10μl，對其連續進行8次的進樣處理，然后計算8次進樣時蘆丁對照品溶液峰面積的平均值，結果為：319916。RSD＝1.3%(n=8)。

2.7 進行重現性試驗 稱取大棗樣品12g，將其平均分成6份，對每份大棗樣品進行重現性試驗，具體的結果見表2。

表2 進行重現性試驗的結果

2.8 進行回收率試驗 稱取大棗樣品6g，將其平均分成6份，將每份樣品加入到5ml濃度為（15.96μg/ml）的蘆丁對照液中，然后對其進行回收率試驗。具體的結果見表3。

表3 進行回收率試驗的結果

3 討論

本次研究的結果說明，用優化高效液相色譜法測定大棗中蘆丁含量的效果確切，而且能夠避開大棗中糖類成分對測量結果的干擾。不過，為了進一步提高用優化高效液相色譜法測定大棗中蘆丁含量的效果，筆者認為，在使用此方法測定大棗中蘆丁含量時應注意以下幾點：①不要將沒經過用水飽和正丁醇抽提的大棗樣品直接上柱，否則會影響大棗樣品色譜峰的峰形。②在進行索氏回流提取的過程中，應在濾紙筒中鋪墊少許的棉花，以免導致大棗樣品粉末隨甲醇回流入燒杯中。③在用不同濃度的乙醇對大棗樣品進行洗脫處理時，應盡量放慢洗脫的速度，以免因乙醇中產生氣泡而導致大孔樹脂發生斷層，從而影響洗脫的效果。

[1]樊君,呂磊,尚紅偉.大棗的研究與開發進展[J].食品科學,2003,24(4):161-163.

[2]王朝周,程秀民.薄層掃描法測定槐米中蘆丁含量[J].中國實驗方劑學雜志,2004,10(4):21-22.

R282.5

B

2095-7629-（2017）3-0001-02