用高效液相色譜法測定鹽酸氨基葡萄糖片中有關物質的結果

張曉鳳，梁建登

（1.中山大學藥學院，廣東 廣州 510006；2.廣東藥科大學， 廣東 廣州 510006）

用高效液相色譜法測定鹽酸氨基葡萄糖片中有關物質的結果

張曉鳳1，梁建登2

（1.中山大學藥學院，廣東 廣州 510006；2.廣東藥科大學， 廣東 廣州 510006）

目的：探討用高效液相色譜法測定鹽酸氨基葡萄糖片中有關物質的結果。方法 ：用高效液相色譜法測定鹽酸氨基葡萄糖片中的有關物質，即以Inertsil NH2(250 mm×4.6 mm, 5μm)為色譜柱，以0.02mmol/L磷酸銨溶液（磷酸調PH值至7.0）—乙腈（30：70）為流動相，將流速設為1.0ml/min，將柱溫 設為35℃，將檢測的波長設為195nm，將進樣的體積 設為20μl。結果：鹽酸氨基葡萄糖的主峰與雜質峰的分離度均良好，并檢測到3個雜質。結論：用高效液相色譜法測定鹽酸氨基葡萄糖片中有關物質的準確度高，可很好地檢測出其中的雜質。且此檢測方法的操作簡單、快速。

高效液相色譜法；鹽酸氨基葡萄糖片；有關物質

氨基葡萄糖類藥物主要用于治療骨性關節炎。常用的氨基酸葡萄糖類藥物包括硫酸氨基葡萄糖膠囊、鹽酸氨基葡萄糖片等。在英國藥典[1]中，對氨基葡萄糖中的有關物質進行了研究。而在我國關于氨基葡萄糖中有關物質的研究則較少。為了進一步探討對鹽酸氨基葡萄糖片中的有關物質進行檢測的最佳方法，筆者在英國藥典中相關研究的基礎上，并參考大量的文獻[2-4]后，采用高效液相色譜法 對鹽酸氨基葡萄糖片中的有關物質進行了檢測，取得了很好的效果。

1 儀器、試劑及樣品

1）本次研究使用的儀器為：島津LC-15C高效液相色譜儀和紫外檢測器。2）本次研究使用的試劑為：乙腈為色譜純，磷酸和磷酸銨為分析純。3）本次研究使用的樣品為：（1）鹽酸氨基葡萄糖片，市售，由四川綠葉寶光藥業股份有限公司生產。（2）D- 鹽酸氨基葡萄糖，由中國食品藥品檢定研究院提供。（3）果糖嗪 和2,5-脫氧果糖嗪，由加拿大TLC公司提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

1）色譜柱：Inertsil NH2（250×4.6mm，5μm）。2）流動相：0.02mmol/L 磷酸銨溶液（PH7.0）：乙腈=30：70。3）流速：1.0ml/min。4）柱溫：35℃。5）檢測波長：195nm。5）進樣體積：20μl。6）稀釋液：濃度為65%的乙腈溶液。

2.2 溶液制備

1）取1.0mg的果糖嗪對照品，精密稱定，加入稀釋液配制成濃度為50μg/ml的對照溶液。2）取1.0mg 的2,5-脫氧果糖嗪對照溶品，精密稱定，加入稀釋液配制成濃度為50μg/ml的對照溶液。3）取鹽酸氨基葡萄糖片，研磨成粉末，精密稱量適量（約相當于40mg的鹽酸氨基葡萄糖），置于10ml的容量瓶中，加入適量的稀釋液溶液進行超聲溶解并定容，搖勻，作為供試品溶液。4）精密量取1.0ml的供試品溶液，置于100ml的量瓶中，加稀釋液進行定容，搖勻，作為對照品溶液。

2.3 系統適用性考察

1）分離度試驗：精密量取2.2項下的對照溶液各20μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。2）結果：各雜質峰與主峰的分離度均能夠達到有效分離；主峰與2,5-脫氧果糖嗪的相對保留時間為0.40；與果糖嗪的相對保留時間為0.47；理論塔板數不小于2000。結果見圖1。

圖1 雜質和鹽酸氨基葡萄糖片溶液圖（2,5-脫氧果糖嗪；果糖嗪；鹽酸氨基葡萄糖片）

2.4 專屬性實驗

1）取鹽酸氨基葡萄糖片研磨成粉末，取適量（約相當于40mg的鹽酸氨基葡萄糖），精密稱定，置于10ml的容量瓶中，共計6份。按照以下條件進行試驗：（1）未破壞實驗：加入稀釋液進行超聲溶解并定容。（2）酸破壞實驗：加入2ml的 0.1N鹽酸溶液進行超聲溶解，在室溫中放置2個小時，再加入0.1N氫氧化鈉溶液進行中和，然后加入稀釋液進行定容。（3）堿破壞實驗：加入2ml的0.1N氫氧化鈉溶液進行超聲溶解，在室溫中放置2個小時，再加入0.1N鹽酸溶液進行中和，然后加入稀釋液進行定容。（4）高溫破壞實驗：加入 稀釋液進行超聲溶解并定容，搖勻，在100℃的水浴中加熱2個小時。（5）光照破壞實驗：加入稀釋液進行超聲溶解并定容，搖勻，在4500XL光照2天。（6）氧化破壞實驗：加入2ml 濃度為3%的H2O2溶液，放置2個小時，然后加入稀釋液進行定容，搖勻。將上述溶液均取適量進行過濾，然后取上清液。2）結果：在進行酸、堿、高溫、光照等破壞實驗時，鹽酸氨基葡萄糖均產生新雜質，進行氧化破壞實驗時其未產生新雜質；各種條件下雜質峰之間的分離度均大于1.2，雜質峰與主峰之間的分離度均大于2.0，表明擬定的色譜條件專屬性強。結果見圖2。

圖2 專屬性試驗圖（由左往右為：未破壞；酸破壞；堿破壞；高溫破壞；光照破壞；氧化破壞）

2.5 線性實驗

2.5.1 2,5-脫氧果糖嗪線性實驗 精密稱量1.0mg的對照品，加入稀釋液配制成濃度為2.0ug/ml、9.0ug/ml、18.0ug/ml、36.0ug/ml、45.0ug/ml和54.0ug/ml的對照溶液。各取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算線性方程。線性曲線是：Y=17052.2+4453.7，r=0.9996。結果表明：2,5-脫氧果糖嗪對照溶液在2.3ug/ml～54.0ug/ml的范圍內呈線性。

2.5.2 果糖嗪線性實驗

精密稱量1.0mg的對照品，加入稀釋液配制成濃度為0.25ug/ml、2.0ug/ml、8.0ug/ml、16.0ug/ml、20.0ug/ml和24ug/ml的對照溶液。各取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算線性方程。線性曲線是：Y=22953.0781+546.7419，r=0.9995。結果表明：果糖嗪對照溶液在0.255ug/ml～24ug/ml的范圍內呈線性。

2.6 精密度實驗

1）按照2.2的方法配制供試品溶液。精密量取20μl注入液相色譜儀中，分別進樣6針，以自身對照法計算。2）結果：鹽酸氨基葡萄糖片溶 液主要雜質及總雜質的RSD分別為，2,5脫氧果糖嗪為1.46%，果糖嗪為1.56%，總雜質為1.26%。這說明，精密度符合要求。

2.7 重復性實驗

1）按照2.2的方法配制6份供試品溶液。精密量取上述溶液各2 0μl注入液相色譜儀中。2）結果：在鹽酸氨基葡萄糖片溶液中，2,5脫氧果糖嗪RSD為1.35%，果糖嗪為1.89%，總雜質的RSD為1.87%。

2.8 穩定性實驗

1）取重復性項下的供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8小時，各取 20μl的供試品溶液注入液相色譜儀中。2）結果：2,5脫氧果糖嗪RSD為1.23%，果糖嗪為1.75%，總雜質的RSD為0.67%。這說明，供試品溶液在8小時內穩定。

2.9 回收率試驗

1）按照2.2的方法制備2,5-脫氧果糖嗪和果糖嗪對照溶液。取鹽酸氨基葡萄糖片，研磨成粉末，稱量約相當于40mg的鹽酸氨基葡萄糖粉末，分別加入3.0ml、3.5ml、4.0ml上述對照溶液配制成濃度為80%、100%和120%的溶液，按照2.2的方法配制供試品溶液。精密量取上述溶液各20μl注入液相色 譜儀中，計算果糖嗪和2,5-脫氧果糖嗪的含量。取上述對照溶液按照100%的濃度配制成對照混合溶液。2）結果：2,5-脫氧果糖嗪和果糖嗪的平均回收率分別為：98.3%和98.6%，RSD分別是0.29%和0.22%。

3 討論

鹽酸氨基葡萄糖的吸 收波長為195nm，且干擾的因素很多，如在流動相中使用磷酸鹽會干擾檢測，醋酸鹽會使峰形歪斜，而磷酸銨對檢測則無干擾，因此應選擇磷酸銨作為流動相的水相。高效液相色譜法具有快速、簡便的特點，此檢測方法的專屬性強、線性范圍廣，且精密度、穩定性、重復性及回收率均符合要求，表明此方法不僅適 用于對鹽酸氨基葡萄的有關物質進行檢測，也適用于對鹽酸氨基葡萄的含量進行檢測。

[1] EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0[S]：2338～2340.

[2 ] 湖北愛普注冊標準[S]：YBH08072009.

[3] 王培,黃哲蘇,李海生.鹽酸氨基葡萄糖膠囊含量測定條件的改進.天津藥學[J].2008,20 (3):13-14

[4] 楊華良,雷勇勝.HPLC 法測定鹽酸氨基葡萄糖顆粒中鹽酸氨基葡萄糖的含量.天津藥學[J].2011,23(6):17-19.

Study result of high performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets

Zhang Xiaofeng1 Liang jiandeng2
(1 School of Pharmaceutical,Sun Yat-sen University 2 Guangdong Pharmaceutical University)

∶ Objective To study high performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets. Method Use Inertsil NH2(250 mm × 4.6 mm, 5μm)as chromato bar, use 10mmol/L ammonium phosphate solution PH7.0–Acetonitrile (30：70 ) for Mobile phase ,set flow rate in 1.0ml/min,set column temperature as 35℃, set detection wavelength as 190nm,set injection as 20μl.Result The peaks of Glucosamine Hydrochloride Tablet and impurities are well separated,3 kinds impurities was be measured. Conclusion High performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets has a high accuracy and it can measure impurities in tablets well. This method is simple and quick.

∶ RP-HPLC; Glucosamine Hydrochloride; related substance.

R917

A

2095-7629-（2017）7-0028-02