西南部分地區Ⅰ群禽腺病毒的分子流行病學調查及致病性研究

姚克昌，劉月月，游國進，李淑蕓，夏 靜，何 肖，李雯雯，杜莉靜，韓新鋒，黃 勇

(四川農業大學 動物醫學院，四川 成都 611130)

西南部分地區Ⅰ群禽腺病毒的分子流行病學調查及致病性研究

姚克昌，劉月月，游國進，李淑蕓，夏 靜，何 肖，李雯雯，杜莉靜，韓新鋒，黃 勇*

(四川農業大學 動物醫學院，四川 成都 611130)

2015—2016年，西南地區多個養雞場發生疑似禽腺病毒感染病例。實驗從發病雞場采集肝組織，利用雞胚腎細胞(CEK)進行病毒分離，共分離出16株Ⅰ群禽腺病毒(FAdV)。通過對hexon基因L1環臨近的保守序列進行PCR擴增和序列測定，發現16株FAdV分屬4個血清型，其中13株為FAdV-4型，FAdV-8a，FAdV-8b和FAdV-2型各占1株。選取不同血清型的4個代表毒株CH/SCDY/1604(FAdV-4)、CH/GZXF/1512(FAdV-2)、CH/CQBS/1504 (FAdV-8a)、CH/CQBS/1512(FAdV-8b)進行雞的致病性實驗，結果顯示，感染CH/SCDY/1604(FAdV-4)的死亡率達80%，CH/CQBS/1504(FAdV-8a)感染組死亡率為20%，而CH/GZXF/1512(FAdV-2)和CH/CQBS/1512(FAdV-8b)組的雞只有發病沒有死亡。FAdV-4是西南地區流行的主要血清型且其致病性極高，其致病性主要表現為心包積液綜合征(HPS)。試驗結果可為西南地區Ⅰ群禽腺病毒感染的防治提供參考。

Ⅰ群禽腺病毒；心包積水綜合征；流行病學調查；致病性

禽腺病毒(fowl aviadenoviruses，FAdVs)是無囊膜的雙鏈DNA分子，屬于腺病毒科，禽腺病毒屬[1-3]。根據當前病毒分類系統，禽腺病毒可分為3個亞群，即Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ群。Ⅰ群禽腺病毒根據限制性內切酶酶切分析可分為5個型即FAdV-A～FAdV-E，根據血清交叉中和實驗可分為12個血清型即FAdV-1～FAdV-8a，FAdV-8b～FAdV-11。Ⅱ群禽腺病毒包括火雞血性腸炎病毒(HEV)、大理石脾病毒和雞大脾病毒。Ⅲ群禽腺病毒產蛋下降綜合征病毒(EDSV)[4-7]。Ⅰ群禽腺病毒主要引起包涵體肝炎(inclusion body hepatitis，IBH)、心包積液綜合征(the hydropericardium syndrome，HPS)和肌胃糜爛(gizzard erosions，GE)[8-11]。Ⅰ群禽腺病毒12個血清型都能引起雞包涵體肝炎，典型的包涵體肝炎多發于3～10周齡肉雞，以6周齡以前的雞最常見，死亡率在10%左右，主要表現在肝臟壞死、肝細胞內含有嗜酸性和嗜堿性包涵體[12-13]；大多數雞的心包積液綜合征的暴發是由FAdV-4型引起，其特征病變是心包充滿透明的或淡黃色的液體，并伴有腎炎、肝炎，死亡率在30%～80%；引起肌胃糜爛的血清型有FAdV-1、FAdV-8，目前只有在白來航雞上有較多報道[14-15]。近幾年，世界各地都報道包涵體肝炎和心包積液綜合征發生，給許多國家造成了巨大的經濟損失，如美國[16]、印度[17]、南非[18]、加拿大[19]、韓國[10]、新西蘭[20]、匈牙利[21]、波蘭[22]、日本[23]、歐洲[24]等，在中國也有發生[9, 11, 25]。最近1～2年，疑似Ⅰ群禽腺病毒感染在西南地區部分養雞場中發生，并且有很高的死亡率，給西南地區養禽業帶來了重大的經濟損失。本研究從西南地區發病雞群中采集病料進行Ⅰ群禽腺病毒的分離、遺傳進化分析和致病性測定，為西南地區該病的防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株、雞胚及試驗動物

E.coliDH5a，購自寶生物工程(大連)有限公司；SPF雞胚購自北京梅里亞維通實驗動物技術有限公司；1日齡商品代白羽肉雞，購自四川省成都市溫江正大集團，飼養至所需日齡。

1.1.2 主要試劑

pMD19-T、premix LATaq、限制性內切酶均購自寶生物工程(大連)有限公司；質粒提取試劑盒和膠回收試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司。

1.1.3 引物設計

根據GenBank上公布的FAdV-I 12個血清型的hexon基因L1環臨近的保守序列，設計一對特異性PCR反應引物(F1: 5′-CAARTTCAGRCAGACGGT-3′和F2: 5′-TAGTGATGMCGSGACATCAT-3′)，擴增片段的預計大小為897 bp。所設計的引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集及處理

2015—2016年從四川、云南、重慶和貴州等西南地區的有疑似Ⅰ群禽腺病毒感染和致病雞場中采集雞肝臟組織52份，按1∶5的比例(m/V)加入滅菌PBS，磨碎制備組織懸液，6 000 r·min-1離心5 min，取上清液備用。

1.2.2 病料的PCR檢測

采用苯酚/氯仿法提取樣本中的DNA，然后通過PCR對樣本中的Ⅰ群禽腺病毒特異性核酸進行檢測。PCR反應總體系如下：DNA模板4 μL，10×ExTaqPCR MasterMix 25 μL，上、下游引物各2 μL，ddH2O 17 μL。PCR反應條件為：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性45 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，35個循環后；72 ℃延伸10 min。取6 μL PCR擴增產物用于電泳檢測，于凝膠成像儀下觀察并記錄結果。

1.2.3 PCR產物的克隆測序

參照DNA膠回收試劑盒(TIANgel Midi purifieation Kit)的使用說明對PCR產物進行純化，然后連接到pMD19-T載體上。連接產物轉化到大腸埃希菌DH5a感受態細胞上，挑取陽性克隆接種于含有Amp的LB液體培養基中，37 ℃振蕩培養10～12 h，收取菌液，按照E.Z.N.A.TM Plasmid Mini Kit I(200t)說明書提取質粒。用限制性內切酶EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ對提取的質粒進行雙酶切鑒定。將經過雙酶切鑒定為陽性的質粒送上海生工生物工程有限公司進行測序。然后，通過NCBI的BLAST功能于基因庫中的所有序列進行分析比對，再從國際基因庫中選取下載不同國家或地區各個血清型的具有代表性的毒株序列，共16個序列(參考毒株的基本信息見表1)，通過DNAstar軟件中MegAlign程序中的clustal W法進行鑒定和同源性分析，并用MEGA6.0軟件構建遺傳進化樹。

1.2.4 病毒分離

SPF雞胚孵化至17～19日齡，按照常規方法制備雞胚腎細胞(CEK)。將PCR反應鑒定為Ⅰ群腺病毒核酸陽性的病料上清液用0.22 μL濾膜過濾除菌，取0.2 mL接種于CEK單層6孔細胞上，于37 ℃ 5% CO2培養箱中吸附45 min，吸附完畢后將上清棄掉，加入維持液(含2%胎牛血清)，同時設未接種的對照孔。37 ℃ 5%CO2培養箱繼續培養，每隔12 h觀察一次。在接毒后48～72 h收毒。通過PCR對收取的細胞液進行Ⅰ群腺病毒核酸的檢測。檢測結果為陰性的細胞培養物再盲傳一代，如果盲傳一代后Ⅰ群腺病毒核酸檢測檢測仍然為陰性，則丟棄。分離出的病毒-70 ℃保存備用。

1.2.5 Ⅰ群禽腺病毒的定量

選取不同血清型的4個分離株CH/SCDY/1604(FAdV-4)、CH/GZXF/1512(FAdV-2)、CH/CQBS/1504(FAdV-8a)和CH/CQBS/1512(FAdV-8b)的細胞液[以后簡稱CH/SCDY/1604(4)、CH/GZXF/1512(2)、CH/CQBS/1504(8a)和CH/CQBS/1512(8b)]，按照10倍遞進稀釋至10-1～10-8。取10-3～10-8稀釋度的病毒液，按照每孔0.2 mL接種于CEK單層24孔細胞培養板中，每個稀釋度4個重復。于37 ℃ 5%CO2培養箱中吸附45 min，吸附完畢后將上清棄掉，加入維持液(含2%胎牛血清)，同時設未接種的對照孔。37℃ 5%CO2培養箱繼續培養，每隔12 h觀察一次，觀察5 d，按照Reed-Muench法計算TCID50。

1.2.6 Ⅰ群禽腺病毒對雞的致病性試驗

選取100只1周齡的商品肉雞，飼養至28日齡。采集泄殖腔拭子，采用1.2.2節的方法進行禽腺病毒的檢測，均為陰性。將雞隨機分成5個組(A、B、C、D、E)，每組20只。A、B、C、D的雞分別依次通過皮下接種CH/SCDY/1604(4)、CH/GZXF/1512(2)、CH/CQBS/1504(8a)和CH/CQBS/1512(8b) 4個毒株，每只雞接種的劑量都為104TCID50。對照組皮下接種0.2 mL PBS。每個組隔離飼養14 d，每天觀察兩次，記錄臨床癥狀得分(0分表示正常，1分表示輕度沉郁；2分表示嚴重沉郁；3分表示麻痹，虛脫；4分表示死亡)。收集死亡雞的心臟、肝臟、腎臟放于10%的福爾馬林溶液中。14 d后所有未死亡的雞進行安樂死，采集有疑似病變的組織，放于10%的福爾馬林溶液中。按照常規方法制備組織切片，觀察病理變化。

表1參考毒株的基本信息

Table1Information of the cited sequences

序號Number名稱CaseID血清型Serotype分離地點IsolatedareaGenBank登錄號Accessionnumber1CElOFAdV-1比利時BelgiumAF3399142VR827FAdV-2比利時BelgiumAF3399153SA55-08FAdV-2南非SouthAfricaHQ117900475FAdV-3北愛爾蘭NorthernIrelandAF5089495PK-01FAdV-4印度IndiaEU9316936SDSXFAdV-4中國山東Shandong,ChinaKT8993257VR-829FAdV-4比利時BelgiumAF3399178TR22FAdV-5日本JapanAF5089539CR119FAdV-6日本JapanAF50895410YR36FAdV-7日本JapanAF5089551158FAdV-8北愛爾蘭NorthernIrelandAF50895712764FAdV-8b加拿大CanadaJN11237313C-2BFAdV-10美國AmericaKT71788914C2BFAdV-11美國AmericaAF50895915QUFAdV-Ⅱ群中國山東Shandong,ChinaEF09350716EDSVFAdV-Ⅲ群德國GermanyY09598

2 結果與分析

2.1 Ⅰ群禽腺病毒的檢測和分離結果

2.1.1 PCR鑒定結果

本文對52份有疑似Ⅰ群禽腺病毒感染的肝臟組織進行了PCR檢測，結果有20份樣品檢測為Ⅰ群禽腺病毒特異性核酸陽性，PCR電泳結果見圖1。

2.1.2 Ⅰ群禽腺病毒的分離結果

將20份陽性樣本接種CEK細胞上進行病毒分離，結果分離出16株Ⅰ群禽腺病毒。各分離毒的背景資料見表2。

2.2 Ⅰ群禽腺病毒在細胞上致病性結果

Marker， DL2000; 1， 陰性; 2， 陽性; 3～22， PCR陽性結果Marker， DL2000; 1， Negative; 2， Positive; 3-22， Positive PCR product圖1 引物F1和F2 PCR擴增產物Fig.1 The PCR product of primer F1 and F2

Ⅰ群禽腺病毒感染CEK細胞后24 h左右開始出現細胞病變，主要表現細胞變圓、聚集、折光性增強(圖2-a)。對照組細胞一切正常，只有一些衰老的碎片(圖2-b)。

2.3分離株的核酸序列分析結果

2.3.1 同源性分析結果

利用DNAStar軟件Clustalw法，將測序所得到的hexon基因L1環基因序列與GenBank上發表的禽腺病毒不同血清型的參考株進行比較，比較的結果表明：16株分離株按照核酸序列同源性可歸屬為4個血清型即FAdV-2、FAdV-4、FAdV-8a和FAdV-8b，大部分毒株(13株)屬于血清4型，且與Ⅰ群禽腺病毒血清型4型參考株的最高同源性為97.4%～99.8%；血清2、8a和8b各有1株，即CH/CQBS/1504(8a)，CH/CQBS/1512(8b)和CH/GZXF/1512(2)；16株分離株與Ⅱ群禽腺病毒火雞出血性腸炎病毒(HEV)和Ⅲ群禽腺病毒雞減蛋綜合征病毒(EDSV)同源性比較低，具體結果見表3。

表2西南部分地區Ⅰ群禽腺病毒感染病料背景

Table2History of fowl adenovirus infection cases in chickens in southwestern China

毒株名稱CaseID分離日期Isolateddate品種Productiontype分離地點Isolatedarea日齡Age/d臨床表現IBHHPS血清型Serotypes登錄號AccessionnumberCH/GZXF/15112015-11肉雞Broilerchicken貴州Guizhou46++4MF055635CH/GZXF/15122015-12肉雞Broilerchicken貴州Guizhou51+-2MF055636CH/CQBS/15122015-12肉雞Broilerchicken重慶Chongqing43+-8bMF055637CH/SCDY/15122015-12肉雞Broilerchicken四川Sichuan32++4MF055638CH/CQBS/15042015-04肉雞Broilerchicken重慶Chongqing26+-8aMF055634CH/SCNJ/16012016-01蛋雞Layerchicken四川Sichuan118++4MF055639CH/SCYB/16012016-01蛋雞Layerchicken四川Sichuan135++4MF055640CH/YNSL/16022016-02肉雞Broilerchicken云南Yunnan56++4MF055641CH/SCDY/16042016-04蛋雞Layerchicken四川Sichuan126++4MF055647CH/YNSL/16052016-05肉雞Broilerchicken云南Yunnan30++4MF055648CH/SCYA/16052016-05肉雞Broilerchicken四川Sichuan21++4MF055650CH/SCZJ/16052016-05肉雞Broilerchicken四川Sichuan35++4MF055662CH/SCCD/16052016-05肉雞Broilerchicken四川Sichuan28++4MF055649CH/SCDY/16062016-06肉雞Broilerchicken四川Sichuan37++4MF055634CH/CQBS/16012016-09肉雞Broilerchicken重慶Chongqing21++4MF055654CH/CQBS/16092016-09肉雞Broilerchicken重慶Chongqing28++4MF055655

1IBH = 包涵體肝炎; HPS = 心包積水綜合癥; “+”表示有相應的臨床表現; “-”表示無相應的臨床表現；死亡率(%)=根據提交的診斷日期記錄死亡率。

IBH = inclusion body hepatitis; HPS = hydropericardium; “+”means having positive clinical sign; “-”means having negative clinical sign; Mortality was recorded based on the date submitted for diagnosis.

圖2 Ⅰ群禽腺病毒(A)和對照組(B)感染CEK細胞的致病性結果Fig.2 Cytopathogenic effect by FAdV in CEK cells(A) and normal CEK cells(B)

2.3.2 核酸序列遺傳進化

根據序列比較結果繪制遺傳進化樹(圖3)。進化分析表明，CH/CQBS/1504(8a)與歐洲分離株58在同一支上，CH/CQBS/1512(8b)與加拿大分離株764在同一分支上，且都屬于FAdV-E；CH/GZXF/1512(2)和南非分離株SA55-08及歐洲分離株VR-827在同一分支上屬于FAdV-D；有13株和中國山東分離株SDSX，印度分離株PK-01以及歐洲分離株VR-829在同一分支上，屬于FAdV-C；所有序列與Ⅱ群禽腺病毒DUADV-1 QU株和Ⅲ群禽腺病毒EDSV不在同一個大的分支上。

2.3 臨床癥狀和剖檢病變

接種CH/SCDY/1604(4)、CH/GZXF/1512(2)、CH/CQBS/1504(8a)、CH/CQBS/1512(8b) 4個毒株的雞在2～9 d出現精神沉郁、臥地不起等癥狀，CH/SCDY/1604(4)和 CH/CQBS/1504(8a)在第4天和第7天出現死亡。圖4顯示本次實驗中各組不同的臨床癥狀得分和死亡率。臨床得分圖顯示在第3～7天各組雞的臨床癥狀最嚴重，且CH/SCDY/1604(4)組臨床癥狀比CH/GZXF/1512(2)、CH/CQBS/1504(8a)、CH/CQBS/1512(8b)組嚴重。存活率圖顯示CH/SCDY/1604(4)和CH/CQBS/1504(8a)的死亡率為80%和20%，而CH/GZXF/1512(2)、CH/CQBS/1512(8b)和對照組都沒有死亡。剖檢結果顯示(圖5)，4組雞都有明顯的肝臟腫大，腎臟腫大、蒼白色，小腸出血，其中CH/SCDY/1604(4)組雞心包還有大量淡黃色的液體，對照組雞剖檢一切正常。

▲表示本試驗分離株的序列，其他序列為GenBank中下載的序列▲ means the sequence from isolates in this research， other reference sequences were retrieved from GenBank圖3 分離株hexon基因L1環擴增片段的遺傳發育樹Fig.3 Phylogentic tree based on L1 loop sequences of hexon gene

2.4 病理組織學觀察結果

(1)心臟。感染分離株CH/SCDY/1604(4)組(圖6-Ⅰ)顯示，心外膜增厚，雞心肌細胞壞死和無序排列，中度嗜中性粒細胞和單核細胞浸潤，圖6-Ⅳ代表對照組的雞的心肌細胞正常，心內膜緊貼心肌細胞。

(2)肝臟。肝臟的病變主要出現嚴重的脂肪變性，炎性細胞浸潤、淤血、壞死的肝細胞有散在的分布，同時可見嗜酸性或堿性包涵體；感染4個分離株的雞肝臟都出現不同程度的病變，其中CH/SCDY/1604(4)組病變最嚴重，對照組的雞肝臟顯示正常。

0分為正常； 1分為輕度抑郁； 2分嚴重抑郁； 3分癱瘓、虛脫； 4死亡。臨床得分為明日每個組的平均得分。誤差是標準差(*)表示實驗組的每天臨床得分與對照組之間有顯著差異(P<0.05)0， Normal; 1， Mild depression; 2， Severe depressed; 3， Paralysis/prostration; 4， Death. The mean scores per group per day are shown. The error bars indicate standard deviations. Asterisks (*) mark the days in which the clinical scores were significantly different between infected group and control group (P <0.05)圖4 接種 CH/SCDY/1604(4)、CH/GZXF/1512(2)、CH/CQBS/1504 (8a)和CH/CQBS/1512(8b) 4個毒株臨床得分(A)和存活率(B)Fig.4 Clinical scores (A) and survival rates (B) of chickens after inoculation with CH/SCDY/1604(4)， CH/GZXF/1512(2)， CH/CQBS/1504(8a) and CH/CQBS/1512(8b)

(3)腎臟。腎臟的變化主要是腎小管上皮細胞出現嚴重大小不等的空泡，大量的炎性細胞浸潤，腎細胞，上皮細胞壞死呈散在的分布。感染4個分離株的雞腎臟都出現不同程度的病變，其中CH/SCDY/1604(4)組病變最嚴重，對照組雞的腎臟只有一些散在的出血(可能是采取組織不小心劃破血管所致)。

2.5 病理組織學變化評分

病理評分圖(圖7)顯示,感染分離株CH/SCDY/1604株雞肝臟和腎臟的病變最嚴重，感染CH/CQBS/1504組的雞次之，感染CH/GZXF/1512和CH/CQBS/1512組的雞組織病理學變化最輕，通過顯著性分析顯示CH/SCDY/1604與CH/CQBS/1504與各組之間都差異顯著(P<0.05)，CH/GZXF/1512和CH/CQBS/1512兩組病理學變化不顯著(P<0.05)，與其他組組織病理學變化差異顯著(P<0.05)，所有實驗組與對照組相比都差異都顯著(P<0.05)。

a、d，對照組；b，心包積液，肝臟嚴重發黃腫大；c，肝臟邊緣發黃、腫大；e，腎臟腫大；f，腎臟腫大變蒼白色a and d， The control group; b， Pericardial effusion， severe yellowing of the liver; c， Yellowing of the liver， swelling; e, Kidney enlargement; f， Kidney enlargement becomes pale圖5 感染FAdV后心臟、肝臟、腎臟的剖檢病變Fig.5 Gross lesions in liver， heart and kindey from the chicken after infected with FAdV

Ⅰ，心外膜增厚，炎性細胞增多(黑色箭頭部位)；Ⅱ，肝臟脂肪變性(紅色箭頭部位)，淤血(藍色箭頭部位)、包涵體(黃色箭頭部位)；Ⅱ，腎臟腎細胞壞死，核溶解(綠色箭頭部位);Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ分別表示正常的心臟、肝臟、腎臟組織細胞形態Ⅰ: Epicardial thickening， inflammatory cells increased(black arrow); Ⅱ: Liver steatosis(red arrow)， congestion(blue arrow)， inclusion body(yellow arrow); Ⅲ: Kidney cell necrosis， nuclear dissolution(green arrow); Ⅳ， Ⅴ， Ⅵ: The heart， liver， kidney respectively.圖6 感染FAdV后心臟、肝臟和腎臟組織病理切片(H.E×400)Fig.6 Histopathology in the heart， liver， kidney after infected with FAdV(H.E×400)

0分表示沒有損失，1～2分表示輕微的損失，3～4分表示中等的損傷，5～6表示嚴重的損傷。誤差條表示標準偏差。 星號(*)標記組之間的顯著差異(P<0.05)Lesion score: 0 for no lesions， 1-2 for mild lesions， 3-4 for morderate lesions and 5-6 for severe lesions. Asterisks (*) mark significant differences between groups (P<0.05)圖7 感染FAdV的雞第5天肝臟和腎臟組織病理學評分圖(每組5只)Fig.7 Scores of histopathological lesions in liver and kidney tissues of chickens at 5 day after infected with FAdV (n=5 per group)

3 討論

最近幾年，在很多國家報道由Ⅰ群禽腺病毒引起的心包積液綜合征、包涵體肝炎和肌胃糜爛(目前只在白來航雞發現)的發生呈上升趨勢[22, 26-27]。其中一些高致病性毒株給養禽業帶來了相當大的經濟損失[11, 17, 28-29]。自2010年以來，Ⅰ群禽腺病毒的暴發在中國呈上升趨勢。2010—2014，劉東[30]從黑、吉、京、魯、蘇、豫、滬、粵9省市收集355份疑似Ⅰ群禽腺病毒感染的樣品進行檢測，結果顯示，Ⅰ群禽腺病毒的感染率由30%升至70%，且主要流行的血清型為FAdV-8a/b型和FAdV-4型。李敏等[31]調查研究中發現，在我國目前流行的禽腺病毒中存在兩種基因型的病毒，FAdV-C型的病毒主要引起禽的心包積液綜合征；而FAdV-E的病原主要引起禽的包涵體肝炎。本研究通過采集西南不同地區疑似Ⅰ群禽腺病毒感染雞的肝臟，分離出16株Ⅰ群禽腺病毒，通過遺傳進化分析16株中1 CH/GZXF/1512株與FAdV-2型，CH/CQBS/1504株與FAdV-8a型以及CH/CQBS/1512株與FAdV-8b型分別具有很高的同源性；其余13株與FAdV-4型具有很高的同源性。本研究發現目前在西南地區主要流行的Ⅰ群禽腺病毒是4型。

Ⅰ群禽腺病毒有12個血清型(FAdV-1～FAdV-8a和FAdV-8b～FAdV-11)不同的血清型的致病性存在很大的差異。目前在全國多個地區均有發生，該病感染1～6周齡任何品種雞，發病日程短的4～8 d逐漸恢復，一般7～10 d，也有少數持續2～3周；發病雞群死亡高峰期4～8 d，病程持續8～15 d，死亡率10%～60%不等[31]。本研究通過觀察雞的臨床癥狀、剖檢病變和組織病理學變化來確定不同血清型4個毒株CH/SCDY/1604(4)、CH/GZXF/1512(2)、CH/CQBS/1504(8a)、CH/CQBS/1512(8b)的致病性，結果顯示Ⅰ群禽腺病毒血清4型毒株CH/SCDY/1604和8a型毒株CH/CQBS/1504分別引起80%和20%的死亡率，而Ⅰ群禽腺病毒血清2型毒株CH/GZXF/1512和8b型毒株CH/CQBS/1512沒有死亡。臨床和組織病理學得分顯示Ⅰ群禽腺病毒血清4型毒株CH/SCDY/1604(4)的致病性高于毒株CH/GZXF/1512(2)、CH/CQBS/1504(8a)、CH/CQBS/1512(8b)。Ⅰ群禽腺病毒不同的血清型對雞的敏感程度的不同，引起的發病和死亡率也不相同。本研究結果與先前幾個研究一致，血清4型(FAdV-C)部分毒株能夠引起的很高的死亡率[5, 9, 32]。

對于禽腺病毒感染的預防，消滅傳染源是重中之重。腺病毒既可水平傳播，也可垂直傳播，控制腺病毒要從種雞開始。目前我國種雞場還未開展禽腺病毒的凈化工作，凈化技術和方案也不成熟，需要加強這方面的研究。腺病毒是無囊膜的病毒，具有較強的抵抗力，通過消毒的方法可以殺滅密閉環境中的腺病毒。傳染性法氏囊病病毒(IBDV)和雞傳染性貧血病毒(CIAV)等一些能引起免疫抑制病的病毒都能夠強化禽腺病毒的致病性[10, 33-34]，生產中也要做好這兩種病原的控制。在禽腺病毒感染流行的地區，除了以上措施外，疫苗的使用也非常有效。在一些國家，滅活的油乳疫苗對IBH和HPS有很好的保護效果[35-36]。對于腺病毒感染的治療，高免卵黃抗體具有較好的效果。我國市場上高免卵黃抗體的質量參差不齊，有的攜帶有垂直傳播性病原，高免卵黃抗體最好不要用于發病種雞場。

本研究結果表明在中國西南地區暴發的Ⅰ群腺病毒感染由FAdV-4、FAdV-2、FAdV-8a、FAdV-8b引起，其中主要是FAdV-4。今后應繼續加強Ⅰ群腺病毒感染的分子流行病學調查，掌握流行的Ⅰ群腺病毒的血清型、致病性和遺傳特點。同時應該加強Ⅰ群腺病毒疫苗的研發，制定有效的生物安全措施，為生產上控制甚至凈化該病打下基礎。

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(責任編輯張 韻)

PathogenicityandepidemiologicalinvestigationofoutbreaksoffowladenovirussubpopulationⅠinfectioninchickensinpartsofsouthwesternChina

YAO Kechang， LIU Yueyue， YOU Guojin， LI Shuyun， XIA Jing， HE Xiao， LI Wenwen， DU Lijing， HAN Xinfeng， HUANG Yong*

(CollegeofVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611130，China)

In 2015-2016， suspected fowl adenoviruses infections were observed in many chicken farms in southwestern China. The liver samples were collected from diseased chickens and inoculated into chicken embryo kidney cells (CEK) cultures for virus isolation， and 16 fowl adenoviruses (FAdV) strains were isolated. After PCR amplificating， sequencing and comparing the conserved sequences located in the pedestal regions adjacent to the L1 loop of thehexongenes of FAdV， all of the 16 stains could be grouped into four serotypes including FAdV-4(13/16)， FAdV-8a (1/16)， FAdV-8 (1/16) and FAdV-2 (1/16). Then， the delegate strains from those four different serotypes were selected to infect chickens to observe its pathogenicity to chickens， the results showed that the mortality of chickens infected with CH/SCDY/1604(FAdV-4) and CH/CQBS/1504 (FAdV-8a) was 80% and 20%， respectively， while no death of chicken was observed in chickens infected by CH/GZXF/1512(FAdV-2)and CH/CQBS/1512(FAdV-8b). It was concluded that the FAdV-4 was the predominant serotype and was highly pathogenic to chickens， and hydropericardium syndrome (HPS) was the main clinical manifestation. This results could provide reference for the epidemiological investigation and prevention of FAdVⅠinfection in southwestern China.

fowl adenovirus; hydropericardium syndrome; epidemiological investigation; pathogenicity

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10.3969/j.issn.1004-1524.2017.11.06

2017-05-12

姚克昌(1989—)，男，河南商丘人，碩士研究生，主要從事家禽傳染病的研究。E-mail: qingbuykc@163.com

*通信作者，黃勇，E-mail：hyong601@163.com

S852.65+7

A

1004-1524(2017)11-1809-10