佛香飲方對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠痛反應(yīng)及血液流變學(xué)的影響

繆希紅， 馮曉靜， 楊新蕊， 白云鶴

(1.河北省承德市中心醫(yī)院， 河北 承德 067000 2.河北省承德市第三醫(yī)院， 河北 承德 067000)

佛香飲方對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠痛反應(yīng)及血液流變學(xué)的影響

繆希紅1， 馮曉靜1， 楊新蕊2， 白云鶴2

(1.河北省承德市中心醫(yī)院， 河北 承德0670002.河北省承德市第三醫(yī)院， 河北 承德067000)

目的探討佛香飲方水提取物對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用及其對血液流變性的影響，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采用冰水浴、皮下注射鹽酸腎上腺素，加ip注射縮宮素法建立大鼠寒凝血瘀型痛經(jīng)模型。以扭體反應(yīng)次數(shù)為指標(biāo)，探討佛香飲對痛反應(yīng)的影響。以凝血時間(CT)、凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)及血小板聚集率、紅細(xì)胞壓積(HCT)、血沉方程K值、血漿黏度、全血黏度為指標(biāo)，探討佛香飲對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠對凝血及血液流變學(xué)指標(biāo)的影響。結(jié)果佛香飲1.8g/kg，3.6g/kg和7.2g/kg劑量組大鼠的CT明顯長于模型對照組(P<0.05或P<0.01)，PT、TT及APTT均明顯高于模型組(P<0.05或P<0.01)。佛香飲3.6g/kg和7.2g/kg劑量組的血小板聚集率明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)，HCT、血沉方程K值均明顯低于模型對照組(P<0.05)；佛香飲各劑量組血漿黏度、全血黏度均低于模型對照組(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論佛香飲對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠的鎮(zhèn)痛和改善血液流變性作用是其治療寒凝血瘀型痛經(jīng)的主要作用基礎(chǔ)。

佛香飲； 痛 經(jīng)； 痛反應(yīng)； 寒凝血瘀； 血液流變學(xué)

原發(fā)性痛經(jīng)是婦科常見病、多發(fā)病[1]。中醫(yī)依據(jù)病因?qū)⒃l(fā)性痛經(jīng)分為寒凝血瘀、氣滯血瘀、氣血虛弱、腎虛血瘀等四種類型，其中寒凝血瘀型為臨床多見[2]，其病因多為經(jīng)期感受濕寒，或過多飲食寒涼，寒客沖任，致氣血凝滯，子宮氣血不暢，引發(fā)痛經(jīng)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療痛經(jīng)多用非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥，避孕藥等，僅可臨時緩解疼痛，無治本之效，且有較多副作用。中醫(yī)可通過藥物的合理配伍，達(dá)整體調(diào)節(jié)，標(biāo)本兼治之功效。佛香飲為本課題多年用之有效的自擬方，由婦科常用的當(dāng)歸-川芎(佛手散)和香附-川芎兩個藥對結(jié)合而成，組方精簡，治療原發(fā)性痛經(jīng)療效可靠，止痛作用強(qiáng)而速，經(jīng)前3d服用可預(yù)防經(jīng)期腹痛，連續(xù)服用3個月經(jīng)周期，可顯著減輕痛經(jīng)癥狀，遠(yuǎn)期療效可靠，無明顯的毒副作用。本研究采用4℃冷水浴，皮下注射腎上腺素，腹腔注射縮宮素三因素結(jié)合法建立寒凝血瘀型痛經(jīng)模型，以血液流變學(xué)、血液學(xué)、痛反應(yīng)等為指標(biāo)，評價本方對寒凝血瘀型痛經(jīng)的治療作用，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為深入探討其作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)動物：SPF級雌性未孕SD大鼠，體質(zhì)量220～240g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(京)2009-0004，實(shí)驗(yàn)前在本實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)5d，實(shí)驗(yàn)室溫度22～24℃，相對濕度50%～60%，光照時間12h(7:00-19:00)

1.2藥物與試劑

1.2.1藥材：當(dāng)歸、川芎及香附均購自同仁堂藥店承德分店；經(jīng)河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室趙春穎教授鑒定：當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸(Angelica sinensis (Oliv.) Diels)的干燥根；川芎為傘形科藁本屬植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)根莖；香附為莎草科植物莎草(Cyperus rotundus L.)的根莖。

1.2.2佛香飲：佛香飲方由當(dāng)歸、川芎(酒制)、香附(醋制)組成，加8倍量水，浸泡6h，煎煮2次，每次煎煮30min，合并煎煮液，過濾，減壓濃縮至1g/mL；

1.2.3其他藥物：苯甲酸雌二醇注射液(1mL:1mg)，天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn),批號：1001051；縮宮素注射液(1mL:10U)，馬鞍山豐原制藥有限公司，批號:1302151;元胡止痛顆粒劑(5g/袋)，沈陽飛龍藥業(yè)有限公司，批號:130206。

1.3主要儀器：TDB-40B臺式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；HC-2062高速離心機(jī)，科大創(chuàng)新股份公司中佳分公司；Microsed-System全自動血沉儀，美國Vital Diagnostics公司；LBY-N6COMPACT全自動血液流變儀，北京普利生儀器有限公司；微量血漿測試裝置，北京普利生儀器有限公司；XT-2000i全自動血液分析儀，日本SYSMEX公司；compactXR全自動血凝儀，德國BE公司；NJ4半自動血小板聚集儀，北京普利生儀器有限公司。

2 方 法

2.1動物分組、造模及給藥：SD大鼠60只，隨機(jī)分為空白對照組，模型對照組，佛香飲1.8，3.6和7.2g/kg劑量組(按生藥計(jì)算，分別相當(dāng)于成人臨床用藥等效劑量的1/2倍，等倍，2倍)，元胡止痛顆粒劑3.0g/kg劑量組(相當(dāng)于成人等效劑量的2倍)。除正常對照組外，其他各組大鼠均每天在4℃冰水中浸泡1次，每次20min，連續(xù)12d，同時，皮下注射苯甲酸雌二醇，第1d及第2d注射0.8mg/kg，第3至第11天，每天注射0.4mg/kg，同步動情周期，提高子宮平滑肌對縮宮素的敏感性[3]。于造模的第7d各組均ig給予相應(yīng)的藥物，ig容積為5mL/kg，空白對照組及模型組給予等量蒸餾水。造模第12d末次給藥后1h，除空白對照組外，各組大鼠腹腔注射縮宮素20μ/kg，隨即進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。

2.2記錄痛反應(yīng)潛伏期及扭體次數(shù)：注射縮宮素后，立即記錄大鼠出現(xiàn)疼痛反應(yīng)的潛伏期及30min內(nèi)的扭體次數(shù)，并計(jì)算扭體次數(shù)抑制率。扭體抑制率=(模型組扭體均數(shù)-試藥組扭體均數(shù))/模型組扭體均數(shù)×100%[4]。

2.3血液流變學(xué)指標(biāo)的測定：4%水合氯醛(5mL/kg)麻醉，腹主動脈取血，置于3支抗凝管中，采用全自動血液分析儀測定紅細(xì)胞壓積，全自動血沉儀測定血沉，全自動血液流變儀測定全血黏度(高切、中切、低切)微量血漿測試裝置測定血漿黏度。

2.4凝血時間的測定：取血方法同2.3，血液以3500r/min離心8min，利用全自動血凝儀測定PT、TT和APTT。

2.5血小板聚集率的測定:取血方法同2.3，血液以1800r/min離心10min，取上清部分即為富血小板血漿(PRP)，剩余部分以3000r/min離心10min，取上清部分即為貧血小板血漿(PPP)。先將盛有300μL PPP的比濁管置于半自動血小板聚集儀的測定孔內(nèi)，經(jīng)標(biāo)定后，再將盛有300μL PRP及1小磁棒的比濁管放入，37℃保溫5min，在攪拌情況下加入誘導(dǎo)劑ADP(300μmoL/L)聚集。得到血小板的最大聚集率，并根據(jù)記錄所得的最大聚集率，按以下公式計(jì)算抑制率：抑制率(%)=(模型組最大聚集率-給藥組最大聚集率)/模型組最大聚集率×100%

3 結(jié) 果

3.1佛香飲對痛反應(yīng)潛伏期及扭體次數(shù)的影響:佛香飲3.6g/kg和7.2g/kg組痛反應(yīng)潛伏期明顯長于模型對照組(P<0.01)；佛香飲各劑量大鼠扭體反應(yīng)次數(shù)均顯著低于模型對照組(P<0.05或P<0.01)。元胡止痛顆粒大鼠扭體反應(yīng)潛伏期明顯長于模型組(P<0.01),扭體反應(yīng)次數(shù)顯著低于模型組(P<0.01)；結(jié)果見表1。

表1 加味佛手散對縮宮素誘發(fā)小鼠痛經(jīng)模型痛反應(yīng)的影響

注：與模型組比較：aP<0.05；bP<0.01

3.2佛香飲對PT、TT及APTT的影響：模型組大鼠的PT、TT及APTT均明顯低于正常對照組(P<0.05或P<0.01)，血小板聚集率明顯高于正常對照組(P<0.01)，說明模型組大鼠血液凝固指標(biāo)發(fā)生了異常改變。佛香飲各劑量組大鼠的PT、TT及APTT均明顯高于模型對照組(P<0.05或P<0.01)，結(jié)果見表2。

表2 佛香飲對寒凝血瘀型大鼠PT、TT及APTT的影響

注：與正常對照組比較：aP<0.05,bP<0.01；與模型組比較：cP<0.05,dP<0.01

表3 佛香飲對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠血小板聚集率

注：與正常對照組比較：aP<0.05,bP<0.01；與模型組比較：cP<0.05,dP<0.01

表4 佛香飲對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型大鼠HCT

注：與正常對照組比較：aP<0.05,bP<0.01；與模型組比較：cP<0.01

3.3佛香飲對血小板聚集率的影響：模型組大鼠的血小板聚集率明顯高于正常對照組(P<0.01)。佛香飲各劑量組和元胡止痛顆粒組大鼠的血小板聚集率均明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果見表3。

3.4佛香飲對大鼠HCT及血沉方程K值的影響：模型組大鼠HCT及血沉方程K值均明顯高于模型組(P<0.01)。佛香飲各劑量組及元胡止痛顆粒組大鼠的HCT及血沉方程K值均明顯低于模型組(P<0.01)，結(jié)果見表4。

3.5佛香飲對大鼠血漿黏度及全血黏度的影響：模型對照組血漿黏度及全血黏度均顯著高于正常對照組(P<0.01)。佛香飲各劑量組及元胡止痛顆粒組大鼠的血漿黏度明顯低于模型組(P<0.05或P<0.01)；全血低、中、高切黏度均明顯低于模型對照組(P<0.05或P<0.01)。結(jié)果見表5。

表5 佛香飲對寒凝血瘀型痛經(jīng)模型

注：與正常對照組比較：aP<0.05,bP<0.01;與模型對照組比較：cP<0.05,dP<0.01

4 討 論

寒凝血瘀型原發(fā)性痛經(jīng)屬中醫(yī)血瘀證范疇。中醫(yī)認(rèn)為血得溫而行，得寒則凝，凝則不通，不通則痛；本研究依據(jù)中醫(yī)“寒、凝、痛”之理論，采用“寒、凝、痛”三因素聯(lián)合的方法建立寒凝血瘀型痛經(jīng)模型[5,6]。4℃冰水浸泡，給動物以寒冷刺激，致寒邪侵襲，為寒凝血瘀證的首要誘因；皮下注射腎上腺素模擬交感神經(jīng)過度興奮狀態(tài)，并誘發(fā)血小板聚集，增強(qiáng)血液的凝固性；注射縮宮素誘發(fā)子宮平滑肌痙攣性收縮而引起腹痛。三者聯(lián)合是復(fù)制寒凝血瘀型痛經(jīng)模型的經(jīng)典方法。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，與中醫(yī)血瘀證密切相關(guān)的主要病理表現(xiàn)包括微循環(huán)障礙，血液流變學(xué)異常改變，受累器官血流量減少，組織缺血缺氧，致代謝產(chǎn)物滯留局部，刺激末梢神經(jīng)引發(fā)痛反應(yīng)。臨床檢驗(yàn)證明，血瘀證患者的血液學(xué)指標(biāo)的異常改變包括：血細(xì)胞比容增加、全血及血漿比黏度增高、血漿蛋白濃度及纖維蛋白原含量增高、紅細(xì)胞變應(yīng)力減弱、血小板聚集率增高、PT、TT時間縮短等。本研究根據(jù)中醫(yī)寒凝血瘀理論建立痛經(jīng)模型，配伍組方，依據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論設(shè)計(jì)相關(guān)檢查指標(biāo)。

本組方依據(jù)中醫(yī)“溫經(jīng)散寒、活血化瘀”治療寒凝血瘀證的治則組方。本方結(jié)合應(yīng)用了當(dāng)歸-川芎和川芎-香附兩個婦科常用藥對[7]。當(dāng)歸性溫，具補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛，祛瘀消腫之功效。川芎辛溫香竄，行氣活血、祛風(fēng)止痛。香附性平，具解郁疏肝，調(diào)經(jīng)止痛，調(diào)中理氣，為治療月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉、痛經(jīng)之要藥二藥對合用組方，互制其短，互長其長，針對“寒、凝、痛”三因素，一方可奏數(shù)功之效[8]。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，當(dāng)歸-川芎藥對，對多種動物、不同生理階段的離體子宮平滑肌的張力均有明顯抑制作用；對組胺、縮宮素、乙酰膽堿等誘發(fā)的離體子宮平滑肌的痙攣性收縮均有顯著的拮抗作用[9]。當(dāng)歸多糖、阿魏酸、川芎內(nèi)酯均有顯著的解痙、鎮(zhèn)痛作用。川芎嗪改善微循環(huán)，擴(kuò)張毛細(xì)血管，增加開放毛細(xì)血管數(shù)、加快血液流速，增加子宮平滑肌血流量，改善其缺血缺氧狀態(tài)，降低局部代謝產(chǎn)物濃度而產(chǎn)生止痛之效[10]。香附可劑量依賴性的抑制痛經(jīng)模型小鼠子宮平滑肌的收縮力，抑制血小板聚集，延長出血時間，改善血液學(xué)指標(biāo)及鎮(zhèn)痛作用[11]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，佛香飲各劑量組動物的扭體反應(yīng)次數(shù)均顯著低于模型組(P<0.05或P<0.01)，說明佛香飲對本類痛經(jīng)模型有顯著的鎮(zhèn)痛作用。痛經(jīng)模型組大鼠PT、TT及APTT時間明顯小于正常組大鼠(P<0.05或P<0.01)，HCT及血沉方程K值、血漿黏度及全血黏度明顯高于正常對照組(P<0.05或P<0.01)，說明模型大鼠血液學(xué)和血液流變學(xué)參數(shù)發(fā)生了明顯的異常改變，出現(xiàn)了血瘀證所具備的血液濃、黏、凝、聚狀態(tài)。與模型組比較，佛香飲可劑量依賴性的延長PT、TT及APTT時間，(P<0.05或P<0.01)，顯著降低HCT及血沉方程K值、降低血漿黏度及全血黏度(P<0.05或P<0.01)。說明改善模型大鼠的血液學(xué)和血液流變性指標(biāo)是本組方治療寒凝血瘀型痛經(jīng)的作用基礎(chǔ)。具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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FoxiangyinontheModelRatswithColdCoagulationandBloodStasisDysmenorrheaPainReactionandBloodRheology

MIAOXihong,FENGXiaojing,etal

(ChengdeCentralHospital,HebeiChengde067000,China)

Objective: To investigate the effects of water extract from Foxiang Yin (FXY) on pain reaction and hemorheological parameters of rats with dysmenorrhe induced by cold coagulation and blood stasis to provide the experimental basis for clinical application of the prescription.MethodsThe rats dysmenorrhea model induced by cold congealing and blood stasis were made by ice water bath and subcutaneous injection of adrenaline hydrochloride(Adr)combined with intraperitoneal injection of oxytocin. The inhibition rate of pain reaction was were calculated. The prothrombin time (PT), thrombin time (TT), activated partial thromboplastin time (APTT), the rate of platelet aggregation, hematocrit (HCT), K value of erythrocyte sedimentation equation, plasma viscosity and whole blood viscosity were detected.ResultsThe CT,PT,TT and APTT in 1.8g/kg，3.6g/kg and 7.2g/kg doses groups of FXY are significantly longer than that in the model control group(P<0.05 or P<0.01). The platelet aggregation rate in high and middle 3.6g/kg and 7.2g/kg dose of FXY group were significantly lower than that of model group (P<0.05 or P<0.01). The hematocrit ( HCT) and ESR equation K values in all doses of FXY groups were significantly lower than that of model group (P<0.05). The plasma viscosity and whole blood viscosity in all dosage of FXY groups were lower than that of model group (P<0.05 or< P 0.01).ConclusionFXY has obvious analgesic effect on the cold coagulation and blood stasis dysmenorrhea rats and improve high agglutination condition of blood and hemorheology is one of its action mechanisms.

Foxiang yin； Dysmenorrhea； Pain reaction； Cold coagulation and blood stasis； Hemorheological parameters

1006-6233(2017)11-1791-05

河北省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目,(編號：2016159)

馮曉靜

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.11.009