ADVIA Centaur CP化學發光免疫法測定丙戊酸藥物濃度的性能評價

楊麗薇,吳明德,劉 敏

ADVIACentaurCP化學發光免疫法測定丙戊酸藥物濃度的性能評價

楊麗薇,吳明德,劉 敏

目的評價西門子全自動化學發光分析儀ADVIA Centaur CP對血清丙戊酸(VPA)的定量檢測性能。方法應用該系統定量檢測VPA,并對其精密度、準確度、功能靈敏度、特異性、相關性分析進行方法學評價。結果直接化學發光法測定丙戊酸的高、中、低值樣本日內精密度分別為2.74%、2.98%、4.48%,日間精密度分別為3.21%、4.00%、6.54%;高、中、低水平樣本的回收率分別為96.69%、97.43%、103.58%;功能靈敏度達到1.22 μg/mL;與ADVIA Centaur免疫系統比較具有很好的相關性,比對試驗結果r≥0.95,得到回歸方程:Y=0.987 2 X-1.090 5。結論該系統對定量檢測血清VPA濃度有較高的準確度、靈敏度和特異性,且快速簡便,能夠達到臨床檢測要求的標準。

化學發光免疫法;性能評價;丙戊酸

0 引言

丙戊酸為一側鏈脂肪酸類化合物,是臨床治療多種類型癲癇的一線藥物,臨床應用比較廣泛,也用于肌陣攣發作,全身性強直陣攣發作,單純及復發性和失神發作[1]。檢測服用該藥物患者體內的血藥濃度是臨床調整劑量、評價療效、避免毒副作用和實施個體化治療的主要依據之一。由于患者服用劑量與血藥濃度之間的相關性較差,常規劑量給藥時,血藥濃度測定值將有50%低于或高于常規治療范圍[2],因此,人體內濃度測定方法的建立對于研究其藥物動力學及藥物相互作用具有重要意義。化學發光免疫法具有靈敏度高、重復性好、準確、用血量少、簡便快速等優點,適于臨床研究與普遍應用。西門子全自動微粒子化學發光免疫分析系統ADVIA Ceutaur CP是德國公司推出的,使用直接化學發光免疫技術進行競爭免疫測定方法,對血藥濃度進行檢測?；颊邩悠放c標記試劑中吖啶酯標記的衍生物競爭性結合固相試劑中的微磁顆粒共價結合的有限的鼠單克隆抗體,患者樣品中存在的濃度與系統檢測所得的相對光學信號單位(RLUs)數量呈反比。本研究中，我們根據美國臨床實驗室標準化委員會(CLSI)相關文件的要求,結合本實驗室的實際，對該檢測系統測定血清丙戊酸的性能進行綜合驗證及評價。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源 所用患者樣本均來自我院精神科門診及住院的正在服用藥物的患者,所有樣本采集時間為上午8∶00～9∶00,分離血清后-20 ℃保存備用。

1.1.2 儀器與試劑 德國西門子ADVIA Centaur CP和西門子ADVIA Centaur全自動化學發光分析儀及其配套檢測試劑盒,校準液批號:C2861,均為原裝進口;質控品購于伯樂公司生產的Lyphochek免疫分析質控物,高、中、低3個水平的質控品批號分別為:40311、40312、40313。所有試劑均在有效期內使用。

1.2 方法 所有實驗步驟按儀器系統說明書和廠家工程師培訓方法嚴格進行,并遵守《全國臨床檢驗操作規程》第4版中的相關規范與要求,對儀器進行日常維護保養,定期對曲線進行校準,質控品檢測均為在控。

1.2.2 準確度 采用回收試驗方法[5],在樣品中加入標準物質,選取低水平患者血清樣本1份12.5 μg/mL,分別與伯樂質控品高值(105 μg/mL)、中值(75 μg/mL)、低值(33.5 μg/mL)等量混合,配制成高、中、低3個濃度的血清標本,使混合后3個樣本濃度水平每份檢測3次,取平均值，測定其回收率。

1.2.4 特異性 在丙戊酸為55.8～69.0 μg/mL的混合血清中加入安定(100 μg/mL)、氯硝安定(100 μg/mL)、苯比巴妥(750 μg/mL)、阿司匹林(1 000 μg/mL)化合物。加入后血清樣品的丙戊酸測定結果與未加入的配對樣品組進行比較,這些化合物對丙戊酸的測定結果無顯著性影響。

1.2.5 相關性分析 參考EP9-A2[8]文件，每天隨機選擇10個新鮮患者樣本,對儀器進行常規維護和保養校準合格的情況下，2 h內分別在西門子ADVIA Centaur CP化學發光儀和ADVIA Centau化學發光儀完成濃度的檢測,每個樣本重復測定2次,連續5 d,以ADVIA Centau化學分析儀2次測定結果的均值為X軸,以ADVIA Centaur CP化學發光儀2次測定結果的均值為Y軸繪圖進行方法比對。

2 結果

2.1 精密度試驗 日內和日間精密度結果見表1。丙戊酸高、中、低值樣本測定的CV均符合廠家提供的標準CV批內、批間≤10%,精密度性能優良。見表1。

表1 丙戊酸精密度試驗驗證結果

2.2 回收試驗 添加3個水平丙戊酸的回收率分別為96.69%、97.68%、103.58%,回收率=回收量/添加量=(添加后的檢驗值-添加前的檢驗值)/添加量×100%。均在100%±10%范圍，符合該儀器的檢測要求。見表2。

表2 ADVIA Centaur CP檢測VPA的回收試驗

表3 丙戊酸功能靈敏度試驗結果

由表3可以看出，當檢測濃度為1.22 μg/mL時,其CV%最接近20%,因此,丙戊酸測定的功能靈敏度應在1.22 μg/mL左右,與試劑商提供的1.0 μg/mL接近。

2.4 特異性結果 在混合血清樣品中加入各濃度的化合物,應用ADVIA Centaur CP儀測定丙戊酸的結果與未加入化合物組進行比較,化合物對丙戊酸的測定結果無顯著性影響(P≥0.05)。

2.5 相關性分析結果 以ADVIA Centar 2次測定結果均值為參比,ADVIA Centaur CP 2次測定結果均值為比較得出回歸方程Y=0.987 2 X-1.090 5及相關系數r=0.993 4。ADVIA Centaur CP測定丙戊酸r≥0.95認為X取值范圍合適,直線回歸統計的斜率和截距可靠,兩檢測系統結果間具有良好相關性[9]，見圖1。

圖1 相關性結果分析

3 討論

丙戊酸類藥物是臨床上常用的廣譜一線抗癲癇藥物,其口服吸收迅速、完全[10],可單獨作用或與其他抗癲癇藥物聯合應用來控制癲癇發作。其治療有效濃度范圍為50～100 μg/mL,若該藥在血清或血漿中的濃度過低,則不能維持癲癇的控制狀態,若其在血清或血漿中的濃度過高,則增加發生毒性反應的危險。因藥物的代謝和排泄存在很大的個體差異,藥物的半衰期對特定的個體而言很難預期。由于治療窗窄、個體差異大、不良反應和血藥濃度相關,中毒癥狀與癲癇發作癥狀難以判斷[11]，因此,為最大限度地發揮療效和避免不良反應,密切監測血清或血漿中丙戊酸的濃度,對于正在進行丙戊酸治療的患者是非常重要的。

本研究應用西門子ADVIA Centaur CP免疫化學發光儀檢測服用丙戊酸患者血清VPA，并對其分析性能進行評價,從而為血清丙戊酸水平變化的準確判斷以及將藥物濃度控制在理想范圍提供可靠的檢測方法。精密度是反映檢測系統整體性能的首要指標,也是進行其他方法學驗證實驗的前提[12]。西門子ADVIA Ceutaur CP全自動化學發光免疫分析系統是采用直接化學發光技術進行的競爭免疫測定方法,該方法具有準確性好、特異性高、操作簡便快速、樣本用量少且不需預處理等優點。試劑中的磁性顆粒均勻懸浮于整個反應系統，使反應系統的特異結合能力增加，反應效率提高，加強了化學發光檢測的準確性[13]。本研究結果表明，該系統精密度良好,高、中、低值樣本的日內日間CV均小于10%,符合有關規定要求;高、中、低水平樣本的回收率分別為96.73%、97.68%、105.67%,均在可接受范圍(90%～110%)之內,說明該儀器的回收率良好,同樣也反映了良好的準確度[14];功能靈敏度應達到1.22 μg/mL,完全能滿足臨床和科研的要求;r≥0.95說明相關性好,檢測具有一定的可比性;采用的一次性Tip頭,不會造成樣品之間的交叉污染;由于該種方法簡單、快速,樣本不需要前處理,無放射污染,且檢測項目覆蓋廣泛,在實際分析中有較好的應用前景。

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PerformanceevaluationofADVIACentaurCPchemiluminescenceimmunoassayforthedeterminationofvalproicacidconcentrationinserum

YANG Li-wei,WU Ming-de,LIU Min

(Clinical Laboratory,Zigong Psychiatric Mental Health Center,Zigong 643020,China)

ObjectiveTo evaluate the performance of SIEMENS automatic chemiluminescence analyzer,ADVIA Centaur CP,for quantitative detection of serum valproic acid (VPA).MethodsThe VPA was quantitatively detected by this system,and the precision,accuracy,sensitivity,specificity and correlation analysis were evaluated.ResultsThe inter-day precision of direct chemiluminescence method for the determination of valproic acid in high-,middle-and low-level samples was 2.74%,2.98% and 4.48%,respectively,and intra-day precision was 3.21%,4.00%,and 6.54%,respectively.The recoveries of high-,middle-and low-level samples were 96.69%,97.43% and 103.58%,respectively.The functional sensitivity reached 1.22 μg/mL.Comparison of the two detective results of the ADVIA.Centaur immune system showed good correlation (r≥0.95),regression equation:Y=0.987 2 X-1.090 5.ConclusionThe system is rapid and simple with high accuracy,sensitivity and specificity for quantitative detection of serum VPA concentration,it can reach the standard of clinical detection requirements.

Chemiluminescence immunoassay;Performance evaluation;Valproic acid

2017-03-26

四川省自貢市精神衛生中心檢驗科,四川 自貢 643020

10.14053/j.cnki.ppcr.201711021