南陽地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者Rh抗原表型分布與不規(guī)則抗體檢測分析

沈延平 靖春旭

(南陽市中心血站 檢驗科 河南 南陽 473000)

南陽地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者Rh抗原表型分布與不規(guī)則抗體檢測分析

沈延平 靖春旭

(南陽市中心血站 檢驗科 河南 南陽 473000)

目的調(diào)查分析南陽地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者Rh抗原表型分布特點及不規(guī)則抗體檢測情況，為臨床輸血安全提供依據(jù)。方法采用單克隆IgM試劑鑒定RhD陰性獻(xiàn)血者C、c、E和e抗原表型，并用鹽水介質(zhì)試管法、凝聚胺法、IAT/抗人球蛋白微柱凝膠卡法篩查和鑒定不規(guī)則抗體。結(jié)果在512例RhD陰性獻(xiàn)血者中，各表型分別為：ccdee 318例(62.11%)、Ccdee 135例(26.37%)、ccdEe 30例(5.86%)、CCdee 17例(3.32%)、CcdEe 12例(2.34%)，其他表型均未檢出；檢出弱D/不完全D共19例，各表型分別為Ccee 9例，ccEe 3例，CCee 3例，CcEe 3例，ccEE 1例；512例RhD陰性獻(xiàn)血者中，檢出不規(guī)則抗體23例(4.49%)，分別為抗E 14例，自身抗體3例，冷凝集素2例，抗M 2例，抗C和抗補體C3d 各1例，女性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體陽性率高于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論本地RhD陰性獻(xiàn)血者Rh表型以ccdee和Ccdee為主，其次為CCdee、CcdEe和ccdEe表型，其他血清學(xué)表型罕見，Rh陰性獻(xiàn)血者抗原表型和不規(guī)則抗體篩查，可減少和避免因輸血而致免疫性抗體產(chǎn)生，確保輸血安全。

獻(xiàn)血者；Rh陰性；血清學(xué)表型；不規(guī)則抗體

Rh血型系統(tǒng)是目前輸血醫(yī)學(xué)中已確認(rèn)的除ABO血型系統(tǒng)以外最具免疫原性和多態(tài)性的血型系統(tǒng)，其所占比例為0.2%～0.5%，可引起新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)及自身免疫性溶血性貧血等。尤其是Rh血型抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后對紅細(xì)胞的破壞無需補體的參與，因此由Rh抗體引起的新生兒溶血病往往較依賴補體的ABO系統(tǒng)嚴(yán)重；其次是Rh抗原與抗體的結(jié)合可以引起血管內(nèi)和血管外溶血；另外，Rh血型系統(tǒng)存在低效價高免疫活性的抗E/e或抗C/c，此類抗原在輸血前往往不易檢測到，但輸血后迅速達(dá)高峰，盡管輸血前交叉配血相容，仍存在相當(dāng)大的風(fēng)險和隱患，因而日益引起人們的重視[1]。為提高臨床輸血安全，本研究近年來對本地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者的Rh表型和不規(guī)則抗體進行了調(diào)查、分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1臨床資料選取南陽市中心血站2014年10月至2016年9月512例RhD陰性獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本為本文研究對象，其中男217例，女295例，年齡為18～55歲，中位年齡為39歲。

1.2儀器與試劑單克隆抗-D(IgG)、抗-D(IgM)、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司產(chǎn)品；抗-D(IgG+IgM)為英國Millipore公司提供；單克隆抗人球蛋白(抗IgG，C3d)抗體由法國DIAGAST公司提供；凝聚胺介質(zhì)試劑由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供；人源抗-D由本實驗室留存AB型抗-D血清；Baso 2002-2型微電腦控制血庫專用離心機為臺灣貝索企業(yè)有限公司產(chǎn)品。

1.3Rh陰性篩選及確認(rèn)試驗RhD陰性獻(xiàn)血者的初篩應(yīng)用單克隆抗-D(IgM)試劑鹽水介質(zhì)微量板法。RhD陰性獻(xiàn)血者的確認(rèn)應(yīng)用間接抗人球蛋白試驗(IAT)。初篩和確認(rèn)均陰性者判為Rh陰性，初篩陰性確認(rèn)試驗陽性者不再細(xì)分，籠統(tǒng)歸類為弱D/不完全D。

1.4Rh血清學(xué)表型鑒定用單克隆IgM抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e試劑，鹽水試管法。

1.5不規(guī)則抗體篩查與鑒定按抗體篩選紅細(xì)胞試劑盒說明書要求分別采用鹽水介質(zhì)試管法、凝聚胺法、IAT/抗人球蛋白微柱凝膠卡法。抗體鑒定方法同抗體篩查。

1.6統(tǒng)計學(xué)方法將本文數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 13.0軟件包進行數(shù)據(jù)處理，不規(guī)則抗體陽性率比較用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1RhD陰性獻(xiàn)血者ABO血型分布情況在512例RhD陰性獻(xiàn)血者中，A型143例(27.93%)，B型163例(31.83%)，O型133例(25.98%)，AB型73例(14.26%)。見表1。

2.2弱D/不完全D獻(xiàn)血者Rh表型分布情況本文共檢出弱D/不完全D 19例，其中Ccee 9例，ccEe 3例，CCee 3例，CcEe 3例，ccEE 1例。見表2。

表1 RhD陰性獻(xiàn)血者ABO血型分布情況[n(%)]

表2 24例弱D/不完全D獻(xiàn)血者抗原表型分布[n(%)]

2.3不同地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者表型分布南陽地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者與其他地區(qū)RhD陰性表型分布情況比較。見表3。

表3 不同地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者表型分布情況(n)

2.4不規(guī)則抗體檢出情況512例RhD陰性獻(xiàn)血者中，共檢出不規(guī)則抗體23例(4.49%)，分別為抗E 14例，自身抗體3例，冷凝集素2例，抗M 2例，抗C和抗補體C3d 各1例；女性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體陽性率高于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同性別獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體檢出情況[n(%)]

3 討論

Rh血型系統(tǒng)經(jīng)國際輸血協(xié)會確認(rèn)的已有54個抗原，其中以D、C、c、E和e最重要，目前國內(nèi)用抗-D、抗-C、抗-c、抗-E和抗-e 5種單克隆試劑可分出18種表型[2]。本研究對512例Rh陰性獻(xiàn)血者表型檢測，結(jié)果顯示，ccdee 表型所占比例最高，為318例(62.11%)，其次是Ccdee型135例(26.37%)，ccdEe、CCdee和CcdEe表型相對較少，分別占5.86%、3.32%和2.34%，其他表型本文均未檢出；ccdee和Ccdee兩種表型共計512例，為Rh陰性患者的88.48%，與研究報道的湛江地區(qū)的87.72%，佛山地區(qū)的95.35%，湖北地區(qū)的89.71%結(jié)果[3-5]相近。

本研究512例RhD陰性獻(xiàn)血者中檢出19例弱D/不完全D。D抗原在不同表型RBC上表達(dá)的強度依次為：超強D>正常D陽性>弱D/不完全D>DEL型。D抗原強度與CE單倍型表現(xiàn)為：DcE/DcE>DCe/DcE>DCe/DCe>DcE/Dce>DCe/cde，劑量效應(yīng)常表現(xiàn)為：DCe/DCe(R1R1)>DCe/dce(R1r)[6]。因此，在日常工作中抗-D效價測定多用純合子。弱D曾稱為Du，紅細(xì)胞上D抗原表達(dá)明顯減少至正常D的5%～10%，但真正的弱D表型頻率很難估算、證實，受所用的抗-D試劑與方法影響較大。在輸血實踐中應(yīng)防止不完全D誤定為Rh陽性，不完全D型患者經(jīng)輸注D陽性紅細(xì)胞后可產(chǎn)生抗-D抗體，因此患者為不完全D型應(yīng)作為Rh陰性，而供血者不完全D型應(yīng)作為Rh陽性[7]。弱D獻(xiàn)血者或患者被誤定為RhD陰性，臨床意義不大，因為：①弱D輸給RhD陰性，免疫原性很差；②弱D接受RhD陰性血液，無不良反應(yīng)；③弱D圍產(chǎn)期婦女誤定為RhD陰性，給予IVIgG抗-D，無不良反應(yīng)[8]。近年來發(fā)現(xiàn)弱D引起輸血免疫的比例并不如想象中的低，故涉及此類輸血仍需謹(jǐn)慎。

本研究對RhD陰性獻(xiàn)血者進行了不規(guī)則抗體篩查，共檢出不規(guī)則抗體23例(4.49%)，分別為抗E 14例，自身抗體3例，冷凝集素2例，抗M 2例，抗C和抗補體C3d 各1例；女性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體陽性率高于男性，可能與女性獻(xiàn)血者受妊娠、輸血兩種因素刺激作用有關(guān)。Rh系統(tǒng)存在有天然抗體和免疫性抗體，天然抗體抗-E在Rh陽性中的比例約為0.1%，通常僅能通過酶處理細(xì)胞檢測到，抗-D偶然可見，抗-C、抗-Cw、抗-Cx、抗-Rh30和抗-Rh32非常罕見；免疫性抗體中抗-D大多數(shù)為IgG，少數(shù)含IgM，且伴隨IgG出現(xiàn)，偶然可見IgA，且血清中主要為IgG，一般IgG型抗-D不直接凝集正常Rh表型，可凝集D抗原超強表達(dá)的紅細(xì)胞[8]。抗-D IgG又分亞類，最常見的為IgG1、IgG3，少數(shù)IgG2、IgG4，且多伴隨IgG1出現(xiàn)，孕婦中常為單一亞類，輸血免疫男性患者多伴有幾種亞類[9-10]。

通過檢測Rh表型及M、N、P1等ABO系統(tǒng)外臨床輸血中比較重要的抗原，建立RhD陰性獻(xiàn)血者的表型庫，不僅可為臨床搶救危重患者提供更為安全的血液，爭取寶貴的時間，并且為某些慢性需長期反復(fù)輸血患者提供配合性更高的血液，提高了臨床治療效果和患者的生存質(zhì)量[11]。同時，本研究也為輸血政策制定部門提供參考依據(jù)，目前國內(nèi)發(fā)展不平衡，部分沿海地區(qū)政策和經(jīng)費都比較寬松，采供血機構(gòu)和臨床醫(yī)療機構(gòu)都已經(jīng)做了大量工作。在此也建議采供血機構(gòu)盡快升級在用的《安全輸血標(biāo)準(zhǔn)化系統(tǒng)》，增加表型庫模塊，連接稀有血型庫；建議由國家出資，各血站承擔(dān)起所有獻(xiàn)血者血液抗原表型檢測及不規(guī)則抗體的篩查工作，患者的抗原表型檢測及不規(guī)則抗體的篩查工作，可由政府牽頭，結(jié)合各社區(qū)醫(yī)療服務(wù)中心為轄區(qū)居民體檢、辦理健康檔案工作合并完成，建立、充實、共享大數(shù)據(jù)。

綜上所述，對RhD陰性獻(xiàn)血者進行表型分析和不規(guī)則抗體檢測，并逐步建立本地區(qū)Rh陰性獻(xiàn)血者表型資料庫，對確保臨床輸血安全非常必要。

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R 446.6

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.21.015

2017-04-03 )