多指標優選金麻杏止咳片提取工藝

申玉龍，安麗娜，張 鵬，王立偉，徐 達，宋長國，金艷敏

（承德燕峰藥業有限責任公司，河北 承德 067600）

研究

多指標優選金麻杏止咳片提取工藝

申玉龍，安麗娜，張 鵬，王立偉，徐 達，宋長國，金艷敏

（承德燕峰藥業有限責任公司，河北 承德 067600）

目的 優選金麻杏止咳片最佳提取工藝。方法 采用正交試驗，以麻黃堿、苦杏仁苷、黃芩苷、綠原酸為指標，分別對醇提和水提工藝進行優選，對水提工藝進行醇沉濃度考察。結果 醇提工藝優選為10倍量60%乙醇，提取2次，每次2 h；水提工藝優選為10倍量水，提取2次，每次2 h；水提工藝的醇沉濃度為70%。結論 優選的金麻杏止咳片提取工藝，麻黃堿等4種成分的提取率均超過70%。

金麻杏止咳片；提取工藝；麻黃堿；苦杏仁苷；黃芩苷：綠原酸；正交試驗

目前，中醫院遵循的中藥提取工藝是傳統的水煎煮[1]，煎煮液直接服用。在制藥工業中，根據中藥所含的有效成分，提取工藝分為揮發油提取[2]、乙醇提取[3－5]、水提取[6－7]和水提醇沉[8]，將中藥制作成片劑、膠囊劑、滴丸[9]等不同劑型服用，服用劑量大幅減少，而功效成分游離、富集，利于釋放、吸收[10]。在進行工藝研究時，多選用一種提取工藝，設定一個考察指標[11－14]，難以綜合作出工藝合理性評價。金麻杏止咳片由黃芩、蜜炙枇杷葉、蜜炙麻黃、苦杏仁、前胡、金銀花等10味中藥組方，本研究中對工藝進行了優選研究，根據其功能主治與有效成分性質，優選為醇提和水提兩部分，使麻黃堿、苦杏仁苷、黃芩苷、綠原酸4個成分的提取率均在70%以上。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC－20AT型泵，SPD－M20A型二極管陣列檢測器，LC－solution型色譜工作站，SIL－20A型自動進樣器(日本島津公司)。色譜柱為島津－VP－ODS柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm）。

1.2 試藥

金麻杏止咳片處方中10味藥材由承德燕峰藥業股份有限公司提供；定量對照品為鹽酸麻黃堿（批號為0714－9903）、苦杏仁苷（批號為 110820－200403）、黃芩苷（批號為0715－200212）、綠原酸（批號為110753－200413），均購自中國食品藥品檢定研究院。流動相所用的甲醇(批號為111228)、乙醇(批號為121112)為色譜純，均購自天津市科密歐化學試劑有限公司；乙醇(批號為100511，天津市百世化工有限公司)和磷酸(批號為090903，天津市紅巖化學試劑廠)均為分析純。

2 方法與結果

2.1 醇提工藝研究

2.1.1 因素水平設定

根據本制劑的功能主治與處方中各藥材的性味、歸經及有效成分的性質，擬將蜜炙枇杷葉、蜜炙麻黃、苦杏仁、前胡用乙醇提取，以麻黃中的麻黃堿和苦杏仁中的苦杏仁苷為評價指標，以乙醇濃度(因素A)、醇倍數(因素 B)、提取時間(因素 C)、提取次數(因素 D)為因素，采用 L9(34)正交設計，因素水平表見表1。

表1 醇提工藝正交試驗因素水平表

2.1.2 試驗方法與結果

取枇杷葉（蜜炙）14.9 g、麻黃（蜜炙）8.94 g、苦杏仁 8.94 g、前胡 14.9 g，共 9 份，按表 1 各因素水平，采用 L9(34)正交試驗，進行乙醇回流提取，濾過，濾液回收乙醇，并濃縮至約80 mL，定量轉移至100 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密吸取2 mL，置25 mL容量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液2 mL置中性氧化鋁柱（φ1 cm，100～120目中性氧化鋁1.1 g）上，用70%甲醇洗脫至10 mL容量瓶中至約9 mL，加1滴磷酸，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續濾液作為供試品溶液。以鹽酸麻黃堿（12 μg ／mL）和苦杏仁苷（35 μg ／mL）為指標[15]，測定提取液中麻黃堿和苦杏仁苷的含量。其色譜圖譜見圖1，結果見表2和表3。可見，最佳醇提工藝為A2B3C1D3，但綜合考慮工藝成本、時間、提取率等多因素，優選工藝為A2B2C2D2。

圖1 醇提液高效液相色譜圖

2.1.3 驗證試驗

以處方量的1／10，分別取4味藥材，混合均勻。按正交試驗結果的最佳提取工藝A2B3C1D3和優選工藝A2B2C2D2進行驗證試驗，結果見表4。可見，以鹽酸麻黃堿與苦杏仁苷含量為指標，醇提最佳工藝與優選工藝差異不大，但優選工藝費時短，降低提取成本，故采用優選工藝進行提取，即加10倍量60%乙醇，提取2次，每次 2 h。

表2 醇提工藝 L9(34)正交試驗結果

表3 醇提工藝方差分析

表4 醇提工藝驗證試驗結果(每17.88 g的含量)

2.2 水提工藝研究

2.2.1 因素水平設定

將黃芩、金銀花、桔梗、桑白皮、瓜蔞、竹茹6味藥材擬用水提取，但為防止黃芩苷酶解，黃芩要沸水投料。以黃芩中的黃芩苷和金銀花中的綠原酸為指標，以提取次數(因素 A)、提取時間(因素 B)、加水倍數(因素 C)為因素，采用 L9(34)正交設計，因素水平見表5。

表5 水提工藝正交設計因素水平表

2.2.2 黃芩苷含量測定

1)色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為甲醇 － 水 － 磷酸（47 ∶53 ∶0.1）；檢測波長為 280 nm；進樣量為理論板數按黃芩苷峰計算不低于2 500。在此條件下，色譜圖見圖2。

2)溶液制備

取黃芩苷對照品適量，精密稱定，以70%甲醇制成每1 mL含25 μg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取定容于250 mL容量瓶的1～9號樣品提取液混合均勻，取2 mL置25 mL容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液1 mL置10 mL容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液。

圖2 水提液中黃芩苷高效液相色譜圖

3)方法學考察

線性關系考察：精密吸取黃芩苷對照品溶液（146.5 μg ／mL） 0.5，1.0，2.0， 3.0， 4.0， 5.0，10.0，20.0 μL，分別注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標、進樣量(X)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝2.318 700X＋5.851 63，r＝0.999 97，結果表明，黃芩苷進樣量在73.25～2 930.00 ng范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：吸取黃芩苷對照品溶液，注入液相色譜儀，進樣5次，測定峰面積。結果的 RSD為 0.72%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取精密度項下供試品溶液，每隔2，4，8，12，24 h，進樣測定峰面積，測定 24 h內穩定性，結果的 RSD為1.44%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

重復性試驗:取同一批樣品，分別按高、中、低3個劑量量取，每個劑量平行3份，依法制備供試品溶液，分別進行提取，制備，測定。結果黃芩苷平均含量為20.824 mg／g， RSD 為 1.21%(n ＝9)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取同一批樣品9份，按高、中、低劑量加入相應量的對照品，依法制備供試品溶液，進行提取，制備，測定，計算回收率。結果黃芩苷的平均回收率為 96.96%，RSD 為 2.12%（n＝9）。

2.2.3 綠原酸含量測定

1)色譜條件與系統適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相為甲醇 － 乙腈 －0.1% 磷酸（4.5 ∶9 ∶86.5）；檢測波長為326 nm。理論板數按綠原酸峰計算不低于3 000。在此條件下，色譜圖見圖3。

圖3 水提液中綠原酸高效液相色譜圖

2)溶液制備

稱取綠原酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每1 mL含25 μg溶液，搖勻，即得對照品溶液。取定容于250 mL容量瓶的1～9號樣品提取液混合均勻，各精密量取1 mL置25 mL容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液5 mL，置10 mL容量瓶中，加70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

3)方法學考察

線性關系考察：取綠原酸對照品溶液（0.046mg／mL），分別進樣 2，5，10，15，20 μL，以峰面積(Y)為縱坐標、進樣量(X)為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y＝2 931 322.4 X － 5 113（r＝ 0.999 9）。結果表明，綠原酸進樣量在 0.092～0.92 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取綠原酸對照品溶液，注入液相色譜儀，進樣5次，測定其峰面積。結果的 RSD為0.86%(n＝5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，每隔 2，4，8，12，24 h，進樣測定峰面積，測定24 h內的穩定性。結果的RSD為1.42%(n＝5)，表明綠原酸供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗：取同一批樣品，平行取6份，依法制備供試品溶液并測定。結果綠原酸的平均含量為8 g／L，RSD為1.21%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取同一批樣品6份，按樣品含量，加入等劑量的對照品，制備供試品溶液，依法進行提取，制備，測定，計算回收率。結果綠原酸的平均回收率為98.96%，RSD 為 2.02%（n＝6）。

2.2.4 試驗方法與結果

取黃芩 8.94 g，桑白皮 14.9 g，瓜蔞 14.9 g，桔梗8.94 g，金銀花 14.9 g，竹茹 14.9 g，共 9 份，按正交試驗因素水平表中的各因素水平，采用 L9(34)正交試驗，其中黃芩是水沸后加入，進行水提取，濾過，濾液濃縮至約200 mL，定量轉移至250 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，按 2.2.2 項下和 2.2.3 項下含量測定方法測定含量。結果見圖2，正交試驗結果見表6，方差分析結果見表7。可見，正交試驗優選的最佳提取工藝的條件為A2B2C2，直接作為優選工藝，即以處方量的1／20，取6味藥材，各2份，進行重復性試驗，結果黃芩苷含量為933.99 mg／8.94 g， 提取率為 81.62% ，綠原酸含量為301.28 mg ／14.9 g，提取率為 80.88% 。結果顯示，以黃芩苷與綠原酸含量為指標，水提最佳工藝重復性良好，黃芩苷和綠原酸的提取率都比較高。

表6 水提工藝 L9(34)正交試驗結果（以黃芩苷和綠原酸為指標）

表7 水提取工藝方差分析（以黃芩苷為指標）

2.3 水提部分的醇沉研究

因本處方較大，且全浸膏粉容易吸潮，不易制粒，必須加輔料以降低黏性和吸濕性，導致服用劑量較多，故對水提液進行了醇沉研究。

稱取選凈的黃芩48 g，桑白皮80 g，瓜蔞80 g，桔梗48 g，金銀花80 g，竹茹80 g，加10倍量水，回流提取2次，每次2 h，其中黃芩為沸水投料。提取液濃縮至相對密度1.05（60℃），分為4等份，其中3份分別加乙醇使含醇量達60%，70%，80%，充分攪拌，冷藏放置24 h，濾過，回收乙醇，轉移至250 mL容量瓶中，未醇沉樣品，直接轉移至250 mL容量瓶中，均用水稀釋至刻度，搖勻。按正交試驗項下方法測定黃芩苷與綠原酸的含量，結果見表8。可見，醇沉對黃芩苷的含量影響不大，3個醇沉濃度之間黃芩苷含量亦差異不大，但70%含醇量的沉淀充分，容易過濾，節約能源，故選用醇沉濃度為70%乙醇。

表8 醇沉濃度試驗結果

2.4 優選的提取工藝

通過優選，確認的金麻杏止咳片提取工藝為：取處方中10味藥材，枇把葉（蜜炙）、麻黃(蜜炙)、苦杏仁、前胡用10倍量60%乙醇提取2次，每次2 h，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，備用；桑白皮、竹茹、瓜蔞、桔梗、金銀花，加10倍量水煎煮至沸，加入黃芩，煎煮2次，每次2 h，合并提取液，濾過，濾液濃縮成相對密度為 1.05 ～1.10（60 ℃ 熱測）的清膏，加 95% 乙醇，邊加邊攪拌，至醇濃度70%，冷藏放置24 h，濾過，濾液回收乙醇，與醇提液合并，濃縮至相對密度為1.1～1.15（60℃熱測）的清膏，噴霧干燥。

3 討論

提取工藝是決定藥品質量的關鍵，在設計探討的過程中，盡可能進行多因素多指標考察，保證多種有效成分都提取到位，確保工藝的整體水平，發揮藥盡其效的最大功效，以獲得良好的臨床療效。

本研究中根據制劑的功能主治與有效成分性質，分為醇提和水提部分，并以4種有效成分為指標，進行優選，使4種成分的提取效率均達到70%以上，有效保證了金麻杏止咳片的整體質量，獲得了Ⅱ期與Ⅲ期臨床止咳平喘的良好治療效果。建議在今后復方制劑提取工藝優選中，有定量測定指標的藥材，盡量進行多因素多指標優選，以整體提高制劑質量。

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Optimization of Extraction Process of Jinmaxing Zhike Tablets by Multi－Index

Shen Yulong,An Lina,Zhang Peng,Wang Liwei,Xu Da,Song Changguo,Jin Yanmin
(Chengde Yanfeng Pharmaceutical Group Co.,Ltd.,Chengde,Hebei,China 067600)

Objective To establish the optimum extraction process of Jinmaxing Zhike Tablets.Methods The orthogonal test was adopted with ephedrine,amygdalin,baicalin and chlorogenic acid as indexes,the alcohol extraction process and water extraction process were optimized,and the alcohol precipitation concentration of water extraction process was investigated.Results The optimum condition of alcohol extraction process was as follows:10 times of 60% ethanol,extraction 2 times,2 h each time.The optimum condition of water extraction process was as follows:10 times of water,extracting 2 times,2 h each time.The alcohol precipitation concentration of water extraction process was 70%.Conclusion Through the optimized extraction process of Jinmaxing Zhike Tablets,the extraction rates of ephedrine and other components are more than 70%.

Jinmaxing Zhike Tablets;extraction process;ephedrine;amygdalin;baicalin;chlorogenic acid;orthogonal test

TQ460.6；R284.2

A

1006－4931(2017)23－0004－06

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.23.002

申玉龍（1979－），男，大學本科，工程師，主要從事中藥檢驗及質量標準研究工作，（電話）0311－83862259（電子信箱）277653233＠ qq.com。

2017－06－06；

2017－08－15)