復方山川降脂膠囊質量控制方法的研究

呂培霖，李成義，魏 偉

（1.解放軍第25醫院藥械科，甘肅 酒泉 735000； 2.甘肅中醫藥大學，甘肅 蘭州 7300003.3.酒泉市藥品檢驗檢測中心，甘肅 酒泉 735000）

復方山川降脂膠囊質量控制方法的研究

呂培霖1，李成義2，魏 偉3?

（1.解放軍第25醫院藥械科，甘肅 酒泉 735000； 2.甘肅中醫藥大學，甘肅 蘭州 7300003.3.酒泉市藥品檢驗檢測中心，甘肅 酒泉 735000）

目的：建立復方山川降脂膠囊的質量控制標準。方法：采用薄層色譜法對復方山川降脂膠囊中的川芎、山楂進行定性鑒別，并采用高效液相色譜法測定制劑中主要成分紅花中山奈素的含量。結果：在供試品溶液薄層色譜中，在與川芎、山楂對照藥材溶液色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。在進行定量測定時，山奈素的濃度在0.452～6.780 ug·mL-1范圍內與峰面積呈良好線性關系（R=0.999 9)，其平均回收率為100.5% ，RSD=1.12%(n=6)。結論：薄層色譜法可用于復方山川降脂膠囊的質量控制。

復方山川降脂膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；川芎；山楂；山奈素；含量測定

復方山川降脂膠囊片是我院臨床應用四十多年的協定處方制劑。該制劑主要由紅花、川芎、山楂、決明子、黃芪等藥物組成，具有益氣活血，降脂祛瘀的功效。臨床主要將其用于血脂異常的治療。由于該制劑成分復雜，一直缺乏有效的質量控制方法。因此，筆者在參考文獻的基礎上，采用薄層色譜法對其主要成分川芎、山楂進行定性鑒別，并采用高效液相色譜法測定其中紅花的功能性成分山奈素的含量。該方法簡便易行，重復性好，排除了其他成分的干擾，可用于該制劑的質量控制。

1 儀器與材料

Agilent 1200高效液相色譜儀；DAD檢測器；KG-2507DB高頻數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司提供）；UV-9100型紫外分光光度儀（北京瑞利分析儀器公司提供）；AE120電子天平(上海梅特勒-托利多公司提供)；干燥箱（南通科學儀器廠提供）；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠提供，批號：20130903)；熊果酸(中國藥品生物制品檢定所提供，批號：0742-9706)；山楂對照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供，批號：10917-100406)；川芎對照藥材(中國藥品生物制品檢定所提供，批號：120918-200507)；復方山川降脂膠囊(解放軍第25醫院藥劑科提供，批號：20150116、20141201、20130827)；山奈素(中國藥品生物制品檢定所提供，批號0742-9706)；甲醇為色譜純；其余試劑為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜鑒別

圖1 川芎的TLC

2.1.1 川芎的TLC鑒別[1-2]取本品10粒，置于研缽中研細，加入乙醚30 mL，用超聲處理20分鐘，濾過，將濾液蒸干，加乙醇1 mL使殘渣溶解，備用。取缺川芎的陰性樣品2.5 g，用同樣的方法制備陰性對照液。取川芎對照藥材2 g，加乙醚15 mL，處理5 min，濾過，將濾液揮干，向殘渣中加入1 mL乙醇使其溶解，將其作為對照藥材溶液。按照TLC法[3]進行試驗，吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G板上，以正己烷-乙酸乙酯（比例為9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365nm）下檢視。在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性對照品在相應的位置上無干擾。詳見圖1。2.1.2 山楂的TLC鑒別[4]取本品10粒，研細，加石油醚20 mL，浸泡30 min，濾過，加入石油醚10 mL洗滌濾渣，揮干，然后加乙醚30 mL，用超聲處理15 min，濾過，將濾液揮干，向其中加入5 mL甲醇使殘渣溶解，靜置。吸取澄清液轉移至蒸發皿中，揮干溶劑，將殘渣用1mL甲醇溶解，將其作為供試品溶液。取缺山楂的陰性樣品2.5 g，用同法制備成陰性對照液。另取山楂對照藥材2 g, 用同法制成對照藥材溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G板上，以三氯甲烷-丙酮-乙酸（比例為3∶6∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在105℃的溫度下加熱數分鐘，在日光下檢視。在供試品色譜中，在與對照品、對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；陰性對照品在相應的位置上無干擾。詳見圖2。

圖2 山楂的TLC

2.2 山奈素含量的測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Agilent C18(150 mm* 4.6 mm 5 um)；流動相∶ 甲醇-0.4%磷酸水(45∶55)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：367 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μL。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取山奈素對照品1.13 mg，置于50mL的容量瓶中，加適量甲醇進行溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為母液。吸取1 mL母液置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取制劑樣品10粒（約5 g），置于圓底燒瓶中，加甲醇25 mL，稱定重量后，加熱回流30 min，再用甲醇補足缺失的重量，取續濾液15 mL，加鹽酸溶液（15→37）5 mL，搖勻，水浴加熱30 min后立即冷卻，轉移至25 mL容量瓶，用甲醇定容，搖勻，即得。2.2.4 線性關系的考察 分別吸取上述對照品母液0.2 mL，0.5 mL，1.0 mL，2.0 mL，3.0 mL置 于 10 mL的 容量瓶中，用甲醇定容，按上述條件測定。用濃度對峰面積進行回歸，得回歸方程Y=6*107X-4776，R=0.9981。在0.452～0.780μg·mL-1之間呈線形關系。見圖3、圖4和圖5。

圖3 對照品

圖4 樣品

圖5 陰性對照

2.2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液4.52 μg·mL-1，供試品溶液10ul，連續進樣5次，測得面積值，結果RSD為0.72%。試驗結果表明，儀器精密度良好。

2.2.6 溶液穩定性試驗 取山奈素對照品溶液進樣，考察12 h山奈素對照品的穩定性，結果RSD為0.60 %。試驗結果表明，對照品溶液在12 h內是穩定的。

2.2.7 重現性試驗 取同一批號樣品溶液5份，分別取20 μL的溶液注入液相色譜儀，記錄山奈素的峰面積值，按外標法計算山奈素的平均含量為1.78 mg·g-1，結果RSD為1.59%。試驗結果表明，重現性良好。

2.2.8 加樣回收試驗 取已測定含量的樣品作為樣品溶液，吸取樣品溶液3 m，3份為一組，每組加濃度為2.26 μg·mL-1、4.52 μg·mL-1、6.78μg·mL-1的 標 準 溶液各3.5 mL、3.0 mL、3.0 mL，定容至10mL。按擬訂的方法進行3次回收實驗，結果平均回收率為100.5%，RSD為1.12%。試驗結果表明，回收率符合要求。詳情見表1。

表1 回收試驗的結果

2.2.9 含量的測定 取三個批號供試品6份，分別精密稱定4.9862 g、4.9326 g、4.9187 g的樣品。按供試品溶液的制備方法進行制備。分別取20μL的溶液注入液相色譜儀中，按外標法計算其含量。結果顯示，第1批樣品中山奈素的平均含量為63.14 μg·mL-1。第2批樣品中山奈素的平均含量為62.67 μg·mL-1。第3批樣品中山奈素的平均含量為63.51 μg·mL-1。樣品中山奈素的平均含量為63.11 μg·mL-1。

3 討論

復方山川降脂膠囊為中藥復方制劑。其中所含藥物種類較多，成分復雜，因此給其中川芎、山楂的薄層鑒別帶來了很多的困難。筆者參照《中國藥典》[1]及相關文獻[2-4]，通過對大量TLC條件進行篩選和對樣品前處理方法進行摸索實驗，得出了分離效果較好的薄層鑒別條件。采用本次研究所用的方法對復方山川降脂膠囊中川芎、山楂進行定性鑒別，薄層結果專屬性強，重現性好，方法確實可行。

[5]及預實驗顯示，在流動相的選擇上，選用甲醇-0.4%磷酸水(45∶55)為流動相的效果較好。在確定以此為流動相時，山奈素與相鄰其他組分峰分離的效果較好。本次研究為進一步完善復方山川降脂膠囊的質量標準提供了可靠的檢測方法，并能有效地控制該產品的質量。

參考文獻

[1] 孔菲,丁瑩,梁雪,等.川芎、當歸的薄層層析鑒別[J].中醫藥學報，2013，41(2) :56.

[2]馮樹倩,李映輝.舒胸片中紅花及川芎的薄層鑒別[J].中國醫藥導報，2010，7（1）：60-61.

[3]國家藥典委員會.《中國藥典》（一部）[S].北京.中國醫藥科技出版社，2015:附錄：Ⅵ30-75.

[4]李彩東,張偉,王信，等.參芪心舒膠囊中6種藥物的薄層鑒別[J].中國現代中藥，2013，15（10）：893.

[5]文萍,陳樂,劉丹,等.紅管藥片中山奈素含量測定[J].遼寧中醫藥大學學報，2016，18（1）：51-52.

R286

B

2095-7629-（2017）15-0015-03

軍隊醫療機構制劑標準提高科研專項課題，No.13ZJZ25

＊通訊作者：魏偉