IgA腎病尿巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞檢測(cè)的臨床意義〔1〕

朱國(guó)貞，王利華，齊悅，趙彥

(山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，太原 山西 030001)

論 著

IgA腎病尿巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞檢測(cè)的臨床意義〔1〕

朱國(guó)貞，王利華，齊悅，趙彥

(山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，太原 山西 030001)

目的：研究尿巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞含量與IgA腎病(IgAN)患者腎功能損傷程度的關(guān)系。方法：用流式細(xì)胞儀(FCM)聯(lián)合檢測(cè)36 例IgAN患者尿巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞含量，并依據(jù)腎小球?yàn)V過(guò)率將患者分為腎功能損傷組和腎功能正常組。結(jié)果：腎功能損傷組尿巨噬細(xì)胞含量明顯高于腎功能正常組(P<0.05)。腎功能損傷組尿自然殺傷細(xì)胞含量明顯低于腎功能正常組(P<0.05)。結(jié)論：聯(lián)合檢測(cè)尿巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞含量可作為協(xié)助判斷IgAN腎功能損傷的指標(biāo)之一。

巨噬細(xì)胞；自然殺傷細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)；IgA腎病

過(guò)去多數(shù)學(xué)者一直認(rèn)為IgA腎病(IgAN)是一種預(yù)后良好的疾病，隨著對(duì)該病的不斷研究，發(fā)現(xiàn)IgA腎病是一種進(jìn)展性疾病，只有5%～30%的IgA腎病患者能完全緩解，而大多數(shù)患者呈慢性進(jìn)行性發(fā)展。近幾年一些預(yù)測(cè)IgA腎病進(jìn)展的新標(biāo)志物不斷被報(bào)告，如CD34、CD54、血管細(xì)胞黏附分子-1、血管緊張素Ⅱ受體、血小板源性生長(zhǎng)因子、白介素-1、白介素-6、白介素-10、腫瘤壞死因子(TNF-α)、單核細(xì)胞趨化因子(MCP-1)等[1-3]。但關(guān)于聯(lián)合檢測(cè)尿巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞細(xì)胞方面的研究少有報(bào)道。本文利用流式細(xì)胞儀(FCM)聯(lián)合檢測(cè)我院2016年12月—2017年6月IgA腎病患者尿液中巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞的含量，初步探討IgA腎病患者尿巨噬細(xì)胞以及自然殺傷細(xì)胞與腎功能損傷的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2016年12月—2017年6月所有經(jīng)腎活組織檢查證實(shí)的IgA腎病(免疫熒光表現(xiàn)為以IgA為主的免疫球蛋白在腎小球系膜區(qū)沉積)患者36 例。其中，男16 例，女20 例，年齡(30±6) 歲。

1.2 腎功能分組

36 例患者于腎穿前留取血液標(biāo)本，檢測(cè)血清肌酐水平，依據(jù)Cockcroft-Gault計(jì)算出患者腎小球?yàn)V過(guò)率(GFR)，并按照GFR水平將患者分為腎功能正常組(GFR>90 mL/min)和腎功能損傷組(GFR<90 mL/min)，其中腎功能正常組20 例，腎功能損傷組16 例。

1.3 尿細(xì)胞檢測(cè)

1.3.1 試劑和儀器

CD68-FITC及CD56-PE(法國(guó)Immunotech公司)，Beckman Coulter FC500流式細(xì)胞儀(美國(guó)Beckman Coulter公司)。

1.3.2 尿巨噬細(xì)胞檢測(cè)方法

在患者進(jìn)行腎活組織檢查前留取新鮮晨尿標(biāo)本100 mL，1 500 r/min離心5 min，沉渣用pH7.0磷酸鹽生理鹽水(PBS)前后洗滌并離心3次，棄去上清液后獲得懸浮細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×106，分別加入CD68-FITC及同型對(duì)照后避光孵育，然后流式細(xì)胞儀檢測(cè)，用前向(FSC)-側(cè)向(SSC)設(shè)門，CXP32軟件分析檢測(cè)試管中的CD68+細(xì)胞含量，以百分比表示。

1.3.3 尿自然殺傷細(xì)胞檢測(cè)方法

尿標(biāo)本留取及離心、洗滌方法同上，分別加入CD56-PE及同型對(duì)照后避光孵育，然后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，利用前向散射光(FSC)觀察細(xì)胞大小，側(cè)向散射光(SSC)觀察細(xì)胞顆粒度，CXP32軟件分析檢測(cè)試管中的CD56+細(xì)胞含量，以百分比表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組尿液中巨噬細(xì)胞含量比較

腎功能損傷組尿液中巨噬細(xì)胞含量[(23.6±3.2)%]明顯高于腎功能正常組[(11.8±2.4)%]，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 兩組尿液中自然殺傷細(xì)胞含量比較

腎功能損傷組尿液中自然殺傷細(xì)胞的含量[(15.5±2.8)%]明顯低于腎功能正常組[(21.7±3.1)%]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討 論

IgA腎病是我國(guó)最常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病，約占原發(fā)性腎小球疾病的三分之一。免疫熒光顯示：以IgA為主呈顆粒樣或團(tuán)塊樣在腎小球系膜區(qū)分布，故可以認(rèn)為它是一種自身免疫性腎病。那么，究竟IgA腎病病情輕重及預(yù)后與參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞之間有無(wú)相關(guān)性？聯(lián)合檢測(cè)尿中巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞含量能否協(xié)助早期判斷該病的預(yù)后？帶著這樣的疑問(wèn)，我們利用流式細(xì)胞儀聯(lián)合檢測(cè)IgA腎病患者尿液中巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞的含量，并根據(jù)臨床腎功能指標(biāo)(血肌酐、GFR值)將被研究的IgA腎病患者分為腎功能正常及損傷組。最終我們觀察到IgA腎病患者腎功能損傷組尿液中巨噬細(xì)胞含量明顯高于腎功能正常組(P<0.05)。推測(cè)IgA腎病患者尿液巨噬細(xì)胞含量可協(xié)助反映腎臟功能損傷程度。腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化被認(rèn)為是IgA腎病進(jìn)展至終末期腎病的重要因素和主要病理學(xué)特征[4]。研究發(fā)現(xiàn)：隨著IgA腎病患者腎間質(zhì)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的加重，腎間質(zhì)纖維化程度亦明顯加重，進(jìn)而導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)率下降[5]。有研究證實(shí)，巨噬細(xì)胞本身可以通過(guò)釋放大量的基質(zhì)降解酶抑制劑、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)以及激活肌成纖維細(xì)胞等多種途徑促進(jìn)腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化，進(jìn)一步影響腎小球及腎小管間質(zhì)細(xì)胞的功能，從而進(jìn)展為終末期腎衰竭[6-7]。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，推測(cè)巨噬細(xì)胞可能通過(guò)促腎臟纖維化導(dǎo)致腎小球?yàn)V過(guò)功能下降，加劇腎臟損傷。

自然殺傷細(xì)胞在機(jī)體免疫監(jiān)視過(guò)程中發(fā)揮重要作用，CD56是自然殺傷細(xì)胞的標(biāo)志物。本研究檢測(cè)到腎功能損傷組尿自然殺傷細(xì)胞含量明顯低于腎功能正常組(P<0.05)。我們推測(cè)IgA腎病患者自然殺傷細(xì)胞的水平下降，其抑制B淋巴細(xì)胞增殖、分化的作用減弱，導(dǎo)致多克隆B細(xì)胞活化，引起免疫球蛋白的分泌增加，由此異常的免疫復(fù)合物沉積在腎小球引起病變[8]，并影響腎小球?yàn)V過(guò)功能，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

本研究不僅探討了尿巨噬細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞含量檢測(cè)在IgA腎病中的臨床價(jià)值，而且對(duì)巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞與IgA腎病之間的病理生理關(guān)系提出新的研究方向。

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2017-06-06

(本文編輯：王作利)

TheClinicalsignificanceintestingurinarymacrophagesandnaturalkillercellsinpatientswithIgAnephropathybyflowcytometry

ZHU Guozhen，WANG Lihua，QI Yue，ZHAO Yan

(The Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China)

Objective：To find the correlation among urinary macrophages and natural killer cells and and degree of renal injury in patients with IgA nephropathy(IgAN).Methods：The content of urinary macrophages and macrophages natural killer cells from 36 patients with IgAN was measured by flowcytometry.All the patients were grouped according to the degree of renal injury.Results：Urinary macrophage contents in IgAN with renal injury were significantly higher than those in normal renal function group (P<0.05).Meanwhile，urinary natural killer cells contents in IgAN with renal injury were significantly lower than those in normal renal function group (P<0.05).Conclusion：Testing urinary macrophages and natural killer cells by flowcytometry may provide useful information for evaluating the degree of renal injury in IgAN.

macrophages；natural killer cells；flowcytometry；IgA Nephropathy

R692

A

1671-8631(2017)12-0883-03

〔1〕本課題為山西省國(guó)際科技合作項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：2015081036)

朱國(guó)貞(1974— )，女，河北省遷西縣人，博士學(xué)位，副主任醫(yī)師，主要從事腎內(nèi)科工作。