宮頸癌中STING的表達及意義

鐘柏林，蔡璐，劉二秀，張功亮，王志

（江西省瑞金市婦幼保健院，江西 瑞金 342500；2.贛州市人民醫院，江西 瑞金 342500）

宮頸癌中STING的表達及意義

鐘柏林1，蔡璐2，劉二秀2，張功亮2，王志2

（江西省瑞金市婦幼保健院，江西 瑞金 342500；2.贛州市人民醫院，江西 瑞金 342500）

目的 對宮頸癌患者的癌變部位及其正常的癌旁組織中進行檢測干擾素刺激基因（STING）水平，探討分析對其表達情況及其臨床影響。方法 對醫院篩選納入的60例宮頸癌患者的癌組織及其相應的癌旁組織（癌旁組），采用免疫組織化學法檢測及熒光實時定量PCR技術分別對其組織中STING及下游通路相關基因表達情況進行分析。結果 與矮胖組織相比，在癌變組織中STING表達呈現明顯下降趨勢，組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。在癌部組織中STING下游基因TBK-1及IRF-3的表達均明顯降低于其相應的癌旁正常組織，差異具有統計學意義（P＜0.05）。結論 在癌病灶組織內STING及下游通路相關基因較正常上皮細胞者呈現出低表達狀態，其變化水平可能與癌病變程度有一定相關，在臨床治療中具有參考價值。

STING；基因；宮頸癌；表達；意義

宮頸癌是常見的婦科腫瘤，我國是宮頸癌的高發地區，每年新增約13.15萬例，其中約5.3萬例死于該病，因此宮頸癌是我國重點研究的疾病之一。人乳頭瘤病毒（HPV）是一種重要的致瘤DNA病毒，可引起人生殖道和肛門皮膚、黏膜產生良性和惡性腫瘤，其中與宮頸癌發病密切相關的有HPV16、18等。在對宮頸癌發生和發展因素研究中發現，HPV在宮頸癌發生過程中起著重要作用。干擾素（IFN）一般被認為參與機體的抗病毒固有免疫反應，也可以通過IFN刺激基因在抗微生物感染、抗腫瘤過程中發揮重要作用[1]。而干擾素刺激基因（STING）作為DNA感受路中的重要分支，能夠感受胞質游離的dsDNA，進而調控IFN和多種炎性因子及趨化因子的分泌[2]。

目前國內暫沒有對宮頸癌中STING的研究，故本課題研究探討STING在宮頸癌組織及其對應癌旁組織中的表達及其臨床診斷意義，為宮頸癌早期診斷提供良好標記物檢測。對STING及下游IFN通路相關基因TBK-1和IRF-3在宮頸癌組織中的表達情況分析，探討STING作為宮頸癌腫瘤標記物的潛在診斷意義[3]。因此本文通過測定STING及下游基因在宮頸癌患者體內中的表達狀態，對其臨床治療提供積極的指導意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 依據臨床資料確定為宮頸癌，入選患者均符合診斷標準，經病理科對其病理類型證實，經篩選后納入女性患者60例，年齡19～65歲，平均（53.1±7.3）歲，收集宮頸癌組織和對應癌旁黏膜上皮組織。所有患者經院倫理委員會通過審批，并在知情同意書簽字。本次研究所選取患者均需符合以下要求：研究組患者經取材活檢病理檢查確診為宮頸癌；研究組患者未經手術、放化療。滿若有以下幾項中任一項者均需排除：合并心肝腎等其他系統疾病者；有精神疾患的患者；不愿意參加本次研究的患者。

1.2 方法[4-5]采用免疫組化技術檢測其中STING的表達；

培養宮頸癌細胞系hela細胞和正常角細胞HaCaT細胞；提取其RNA，采用熒光實時定量PCR技術檢測其中STING及下游IFN通路相關基因TBK-1和IRF-3的表達，具體操作如下。

1.2.1 細胞培養 宮頸癌細胞系hela細胞和正常角細胞HaCaT細胞在DMEM/F12培養基，10%的胎牛血清中于37℃、含體積分數為5%二氧化碳（CO2）飽和濕度恒溫細胞培養箱中培養，每天觀察生長情況。待細胞長至對數生長期并傳代至足夠數量時，凍存一管，準備實驗。

1.2.2 免疫組織化學（IHC）染色 收集標本采用對其STING免疫組織化學染色。采用免疫組化法檢測基因的表達。所有標本均采用10%的甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，對切片進行免疫組化，所有操作步驟均嚴格按照說明書進行。

1.2.3 熒光-定量PCR術 切取1～2 mm大小組織，利用通用型免疫組化試劑盒（上海基因科技），使用磁珠法提取組織mRNA，用試劑盒逆轉錄成cDNA（-20℃儲存備用），再用Light CyclerR480 SYBRGreenⅠMaster進行擴增，采用10μL反應體系SYBR GreenⅠMaster 5μL，上下游引物4.0μL，模板1μL。反應條件為:預變性95℃，1 min；變性95℃，10 s；退火65℃，30 s，共64個循環。每個樣品3個復孔，取平均值。

1.3 統計學方法 對所得結果使用SPSS 14.0統計軟件進行比較分析，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用例數（n）表示，組間率（%）的比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 STING基因在宮頸癌癌組織及其癌旁組織中的表達在篩選出的60例宮頸癌組織及癌旁組織STING基因表達分別為（0.11±0.09）及（0.32±0.14），TBK-1基因表達分別為（0.29±0.12）及（0.74±0.25），可知在癌組織細胞中呈現低表達狀態。與癌旁組織相比，癌組織明顯低于癌旁正常組織中的表達，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 基因的表達結果（x±s）

2.2 在不同組織內IRF-3 mRNA表達 在篩選出的60例宮頸細胞癌及癌旁正常組織IRF-3表達分別為（0.11±0.09）、（0.32±0.14），組間差異具有統計學意義（P＜0.05）。而在正常角細胞系HaCaT細胞及癌細胞系hela細胞中表達水平分別為（0.148±0.023）、（0.092±0.011），見表2。

表2 基因的表達結果（x±s）

3 討論

宮頸癌是作為女性生殖器中最常見的一種惡性腫瘤，其在女性的發病率僅次于乳腺癌，對女性的身心健康和生活造成了嚴重的威脅，也是造成癌癥女性死亡的主要誘因。發病率逐年呈現大幅度增高的趨勢。目前對于宮頸癌的具體發病機制尚不十分清楚，多數學者認為其發生發展的過程受多種因素的共同影響，而宮頸癌的浸潤、轉移是多階段、多因素、多基因綜合作用和長時間的發展而產生的結果[6-7]。宮頸癌為國家大病救治的重點疾病，若能早期在對其作出預測、診斷，對宮頸癌的治療及預后無疑是一項重大的進步，可以為國家節約治療費用，具有良好的經濟效益[8]。尤其中國是宮頸癌的高發國家，側重在農村，惡性腫瘤重在預防，盡快找到宮頸癌早期診斷的指標是關鍵，可以提早發現，達到早期治療宮頸癌的目的，從而提高治愈率，具有良好的社會效益[9]。

在本研究中結果顯示，宮頸癌癌組織與正常癌旁組織的STING基因、TBK-1、IRF-3表達水平比較發現，癌患者的STING基因及INF下游通路相關基因明顯低于正常組織患者（P＜0.05），為后其臨床治療提供一定的指導意義。

[1] 陳盛,泥艷紅,丁亮,等.口腔鱗狀細胞癌中STING的表達及意義[J].臨床與實驗病理學雜志,2014,30(7):744-749.

[2] KarS, Deb M, Sengupta D,et al.Intricaciesof Hedgehogsignalingpathways:a perspective in tumorigenesis[J].Exp Cell Res,2012,318(16):1959-1972.

[3] Belyea B,Kephart JG,Blum J,et al.EmbryonicSignalingPathwaysand rhabdomyosar- coma:contributions to cancer development and opportunities for therapeutic targeting[J].Sarcoma,2012,25(17):2487-2494.

[4] 戴珍珍,陳凱英,朱紅賢.Ang-2及Tie-2在宮頸癌組織中的表達及臨床意義[J].浙江醫學,2017,39(4):266-270.

[5] Xuan ZX,Zhang S,Yuan SJ,et al.Prognostic value of angiopoietin-2 in non-small cell lung cancer patients: a metaanalysis[J]. World J Surg Oncol,2016,14(1):237.

[6] 黃琳玲,吳娟,黎艷.Stat3和TopoⅡα在宮頸癌中的表達以及臨床意義[J].當代醫學,2017,23(28):1-3.

[7] 李虹霖,陳艷萍.宮頸癌患者外周血中干擾素Epsilon的表達及臨床意義[J].標記免疫分析與臨床,2016,23(3):300-304.

[8] 張蕓.青年女性宮頸癌的發病原因及臨床治療研究進展[J].中外醫學研究,2015,13(33):162-164.

[9] 朱超綱.觀察同步放化療在中晚期宮頸癌治療中的療效及安全性[J].當代醫學,2017,23(12):106-108.

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.35.039

贛州市指導性科技計劃項目課題（GZ2016ZSF357）