142例足癬的病原菌及其微環境分析

宋鵬飛 何君 黃芩 陳加媛 賀勤 徐娟 王京

·經驗交流·

142例足癬的病原菌及其微環境分析

宋鵬飛 何君 黃芩 陳加媛 賀勤 徐娟 王京

目的 探討足癬致病真菌的菌種組成及足部微環境。方法 對142例真菌鏡檢及培養陽性的足癬患者使用分離培養及分子生物學手段進行菌種鑒定。利用皮膚生理分析儀檢測足癬患者皮損處的生理指標。觀察真菌菌種鑒定結果及皮膚微環境檢測結果。結果 經培養和分子生物學鑒定, 共鑒定出11種致病菌。其中足底水皰鱗屑型患者的菌種分別為：紅色毛癬菌28株(41.79%), 須癬毛癬菌9株(13.43%), 斷發毛癬菌3株(4.48%), 紫色毛癬菌4株(5.97%), 白念珠菌1株(1.49%), 近平滑念珠菌4株(5.97%), 光滑念珠菌2株(2.99%), 絮狀表皮癬菌5株(7.46%), 小孢子菌屬2株(2.99%), 毛孢子菌屬3株(4.48%), 混合感染6株(8.96%)。趾間浸漬糜爛型患者的菌種分別為：紅色毛癬菌22株(29.33%), 須癬毛癬菌13株(17.33%), 斷發毛癬菌2株(2.67%), 紫色毛癬菌5株(6.67%), 白念珠菌4株(5.33%), 近平滑念珠菌7株(9.33%), 克柔念珠菌5株(6.67%), 光滑念珠菌2株(2.67%), 絮狀表皮癬菌3株(4.00%), 小孢子菌屬4株(5.33%), 毛孢子菌屬4株(5.33%), 混合感染4株(5.33%)。毛癬菌屬中的紅色毛癬菌是兩種類型患者中占比最高的菌種, 為主要致病菌。趾間浸漬糜爛型患者念珠菌屬的分布比例為24.00%(18/75), 顯著高于足底水皰鱗屑型患者的10.45%(7/67), 差異具有統計學意義(P＜0.05)。足底水皰鱗屑型患者皮損處的溫度為(25.99±1.15)℃、濕度為(15.63±4.33)、酸堿度為(5.94±0.60)、油脂含量為(4.84±5.08)；趾間浸漬糜爛型患者皮損處的溫度為(26.12±1.16)℃、濕度為(61.88±19.05)、酸堿度為(6.03±0.99)、油脂含量為(5.77±3.73)。足底水皰鱗屑型患者皮損處溫度、酸堿度和油脂含量與趾間浸漬糜爛型比較差異無統計學意義(P＞0.05)；趾間浸漬糜爛型患者皮損處濕度顯著高于足底水皰鱗屑型患者, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。結論 臨床治療足癬應根據足癬的類型和感染菌株制定個性化的治療方案, 對紅色毛癬菌和念珠菌這類真菌重點防治。在抗真菌治療的同時, 還應注重足部護理工作,保持患病部位清潔干爽。

足癬；病原菌；皮膚微環境

足癬是由致病性真菌引起的足部皮膚病, 具有傳染性。足癬在全世界廣為流行, 在熱帶和亞熱帶地區更為普遍。在我國尤其是華南地區, 足癬的發病率也相當高。足癬大致可分為水皰鱗屑型、角化過度型以及浸漬糜爛型［1］。主要的致病菌種以皮膚癬菌為主, 但是念珠菌等其他致病菌的感染也有明顯增加［2,3］。為了解本院皮膚科門診足癬致病真菌的菌種組成及足部微環境特點, 作者于2017年6～8月對就診的足癬患者進行了觀察研究, 現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2017年6～8月皮膚科門診就診的142例足癬患者作為研究對象, 入組標準：①具有丘疹鱗屑、水皰、角化過度、浸漬糜爛等典型的足癬臨床表現；②皮損取材真菌鏡檢和培養的結果均為陽性。入組患者均閱讀并簽署知情同意書, 填寫信息采集記錄表, 包括性別、年齡、患病類型等信息。142例患者中男82例, 女60例；年齡3～81歲,平均年齡(33.29±16.81)歲；足底水皰鱗屑型67例, 趾間浸漬糜爛型75例。由于角化過度型的直接鏡檢和培養的陽性率過低, 故本次研究未納入分析。

1.2 方法

1.2.1 真菌培養與鑒定 使用消毒的取樣刀刮取患者皮損處的鱗屑, 置于含氯霉素的沙式斜面培養基中, 25～27℃恒溫培養箱內培養, 隔天觀察菌落生長情況, 連續4周。將長出的菌落接種至馬鈴薯瓊脂培養基或尿素瓊脂培養基中, 做進一步分離培養。觀察菌落的形態、大小、生長速度、色素以及對鏡下結構進行鑒定。對于念珠菌使用顯示培養基, 依據顏色不同進行菌種鑒定。

1.2.2 分子生物學鑒定 對于真菌培養未能做出準確鑒定的菌株, 采用分子生物學手段做進一步的物種鑒定。首先,采用十六烷基三甲溴化(CTAB)法對樣本的基因組DNA進行提取。其次, 根據測序區域的選擇, 使用高效和高保真的酶進行聚合酶鏈式反應(PCR), 確保擴增效率和準確性(引物對應區域：ITS1區引物為ITS1F- ITS2；ITS2區引物為ITS2-3F- ITS2-4R)。最后, 對PCR的擴增產物進行Sanger雙向測序, 測序結果在GeneBank數據庫中進行比對鑒定。

1.2.3 皮膚生理分析 在實驗室環境內, 患者保持靜止30 min以上, 再利用皮膚生理分析儀檢測足部皮損處皮膚的溫度、濕度、酸堿度和油脂含量等生理指標, 確定真菌寄生的微環境。

1.3 觀察指標 觀察真菌菌種鑒定結果及皮膚微環境檢測結果(足部皮損處皮膚的溫度、濕度、酸堿度和油脂含量),統計念珠菌屬的分布比例。

1.4 統計學方法 采用SPSS22.0統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 真菌菌種鑒定結果 經培養和分子生物學鑒定, 共鑒定出11種致病菌。其中足底水皰鱗屑型患者的菌種分別為：紅色毛癬菌28株(41.79%), 須癬毛癬菌9株(13.43%), 斷發毛癬菌3株(4.48%), 紫色毛癬菌4株(5.97%), 白念珠菌1株(1.49%), 近平滑念珠菌4株(5.97%), 光滑念珠菌2株(2.99%),絮狀表皮癬菌5株(7.46%), 小孢子菌屬2株(2.99%), 毛孢子菌屬3株(4.48%), 混合感染6株(8.96%)。趾間浸漬糜爛型患者的菌種分別為：紅色毛癬菌22株(29.33%), 須癬毛癬菌13株(17.33%), 斷發毛癬菌2株(2.67%), 紫色毛癬菌5株(6.67%), 白念珠菌4株(5.33%), 近平滑念珠菌7株(9.33%),克柔念珠菌5株(6.67%), 光滑念珠菌2株(2.67%), 絮狀表皮癬菌3株(4.00%), 小孢子菌屬4株(5.33%), 毛孢子菌屬4株(5.33%), 混合感染4株(5.33%)。毛癬菌屬中的紅色毛癬菌是兩種類型患者中占比最高的菌種, 為主要致病菌。見表1。趾間浸漬糜爛型患者念珠菌屬的分布比例為24.00%(18/75),顯著高于足底水皰鱗屑型患者的10.45%(7/67), 差異具有統計學意義(χ2=4.48,P=0.03＜0.05)。

2.2 皮膚微環境檢測結果 足底水皰鱗屑型患者皮損處的溫度為(25.99±1.15)℃、濕度為(15.63±4.33)、酸堿度為(5.94±0.60)、油脂含量為(4.84±5.08)；趾間浸漬糜爛型患者皮損處的溫度為(26.12±1.16)℃、濕度為(61.88±19.05)、酸堿度為(6.03±0.99)、油脂含量為(5.77±3.73)。足底水皰鱗屑型患者皮損處溫度、酸堿度和油脂含量與趾間浸漬糜爛型比較差異無統計學意義(P＞0.05)；趾間浸漬糜爛型患者皮損處的濕度顯著高于足底水皰鱗屑型患者, 差異具有統計學意義(t=19.42,P=0.00＜0.05)。見表2。

表1 142例患者真菌菌種分類［n(%)］

表2 皮膚微環境檢測結果比較(±s)

表2 皮膚微環境檢測結果比較(±s)

注：與足底水皰鱗屑型患者比較, aP＜0.05

生理指標足底水皰鱗屑型(n=67)趾間浸漬糜爛型(n=75)tP溫度(℃)25.99±1.1526.12±1.160.700.48濕度(%)15.63±4.33 61.88±19.05a19.420.00酸堿度 5.94±0.60 6.03±0.990.650.51油脂含量 4.84±5.08 5.77±3.731.250.21

3 討論

足癬在皮膚科門診是一種常見的淺部真菌病, 好發于溫暖潮濕的環境［4,5］。人的足底和趾間沒有皮脂腺, 從而缺乏抑制皮膚絲狀真菌的脂肪酸, 生理防御機能較差, 而這些部位的皮膚汗腺卻很豐富, 出汗比較多, 加之空氣流通性差、局部潮濕溫暖, 有利于絲狀真菌的生長。此外, 足底部位皮膚角質層較厚, 角質層中的角蛋白是真菌的豐富營養物質,有利于真菌的生長。有研究發現, 足部的真菌群落擁有令人難以置信的多樣性［6］, 足部真菌群落多樣性復雜, 可能是足癬復發率高和足部真菌耐藥性強的原因。

本次研究的足癬類型主要為水皰鱗屑型和浸漬糜爛型,是足癬最為常見的類型［7,8］。研究結果顯示, 共鑒定出11種致病菌, 其中紅色毛癬菌50株, 占比為35.21%, 是主要致病菌, 念珠菌屬25株, 占比為17.61%, 居于第二, 與以往的文獻報道較一致［9］, 提示今后應對這些真菌重點防治。本次研究結果中, 趾間浸漬糜爛型患者念珠菌屬的分布比例為24.00%(18/75), 顯著高于足底水皰鱗屑型患者的10.45%(7/67),差異具有統計學意義(P＜0.05)。趾間浸漬糜爛型患者皮損處的濕度顯著高于足底水皰鱗屑型患者, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。

綜上所述, 念珠菌感染主要見于皮膚微環境更加潮濕的趾間部位, 在今后臨床治療足癬的過程中, 應根據足癬的類型制定個性化的治療方案, 在抗真菌治療的同時, 還應注重足部護理工作, 保持患病部位清潔干爽。

［1］ 張學軍. 皮膚性病學. 第8版. 北京: 人民衛生出版社, 2013:84-85.

［2］ 張偉錚, 陳力, 趙瑾, 等. 297例淺部真菌病臨床及病原菌菌種分析. 中國真菌學雜志, 2014, 9(1):28-35.

［3］ 費實, 肖常青, 李振潔, 等. 690例淺部真菌病及其病原菌分析.嶺南皮膚性病科雜志, 2008, 15(6):339-341.

［4］ 中華醫學會皮膚性病科分會. 門診就診患者足部真菌感染的調查. 中華皮膚科雜志, 2002.35(5):404-405.

［5］ 蔡順鑫, 黃慶芳. 韶關地區皮膚淺部真菌病及病原菌種分析.中國醫藥指南, 2010, 8(1):118-119.

［6］ Keisha Findley, Julia Oh, Joy Yang, et al. Topographic diversity of fungal and bacterial communities in human skin. Nature, 2013,498(7454):367-370.

［7］ 張道軍, 黃云麗, 張衛衛, 等. 淺部真菌病2600例病原菌分析.中國皮膚性病學雜志, 2012.26(6):501-503.

［8］ 宋應華, 陳丹, 吳紀園. 不同臨床表現類型的足癬回顧性分析.中國真菌學雜志, 2016, 11(6):370-375.

［9］ 張雅潔, 張桂梅, 熊峰, 等. 深圳地區五年皮膚真菌病及致病真菌種類的分布. 中華皮膚科雜志, 2002.35(5):401.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.23.116

深圳市科技計劃項目(項目編號：JCYJ20160428181039686)；深圳市福田區衛生公益性科研項目(項目編號：FTWS2015008)

518033 中山大學附屬第八醫院皮膚科

王京

2017-10-09］