高血壓伴頸動脈粥樣硬化患者血清ANGPTL2的表達及臨床價值

許宏俊，周春山，黃楚麗，陳蘭香

（廣東普寧華僑醫院，廣東 揭陽 515300）

高血壓伴頸動脈粥樣硬化患者血清ANGPTL2的表達及臨床價值

許宏俊，周春山，黃楚麗，陳蘭香

（廣東普寧華僑醫院，廣東 揭陽 515300）

目的探索高血壓患者血清血管生成素樣蛋白2（ANGPTL2）水平與頸動脈粥樣硬化（CAS）斑塊、頸動脈中膜厚度（IMT）之間的關系。方法 自2014年6月～2015年6月，選擇我院127例高血壓患者和59例健康體檢者作為研究對象。收集各自的血清標本并采用酶聯免疫吸附實驗（ELISA）檢測血清中ANGPTL2的水平。頸動脈粥樣硬化程度根據斑塊風險高低及IMT厚度來進行評價。結果 根據斑塊風險高低分為無斑塊組（47例）、低風險斑塊組（38例）及高風險斑塊組（42例）；根據IMT厚度分T1組（＜0.9 mm，46例）、T2組（0.9～1.1 mm，44例）、T3組（＞1.1 mm，37例）。吸煙史（P=0.042）和總膽固醇（P=0.029）與高風險斑塊顯著相關；總膽固醇（P＜0.001）、低密度脂蛋白（P=0.018）、甘油三酯（P=0.026）和尿酸（P=0.011）與IMT厚度顯著相關。高血壓患者血清ANGPTL2水平顯著高于健康對照者（1944.8±195.3比979.7±155.3，P＜0.001）；不同斑塊風險組及IMT厚度組患者與對照組血清ANGPTL2水平有顯著差異（均P＜0.001），且隨斑塊風險升高及IMT變厚，血清ANGPTL2表現逐漸升高趨勢。Spearman相關性分析顯示血清ANGPTL2水平和總膽固醇（r=0.468，P=0.016）、甘油三酯（r=0.551，P＜0.001）和低密度脂蛋白（r=0.527，P＜0.001）正相關。結論 血清中ANGPTL2的表達水平同高血壓患者血脂指標密切相關，其水平的改變可一定程度反映頸動脈粥樣硬化斑塊的發生發展。

頸動脈粥樣硬化；高血壓；血管生成素樣蛋白2；血清

頸動脈粥樣硬化（CAS）的形成是一種慢性炎癥過程，貫穿于脂質條紋的出現到斑塊的形成的全過程，它已被確定為缺血性腦血管疾病的高危因素[1]。血管生成素樣蛋白（ANGPTL）是近年來發現的與血管發生關系緊密的糖蛋白，目前研究發現主要由內臟脂肪細胞表達分泌的血管生成素樣蛋白2（ANGPTL2）在調節脂肪組織慢性炎癥反應、脂質代謝等過程均發揮重要作用[2-3]；動物實驗也證實高水平的ANGPTL2可以明顯增加動脈粥樣硬化斑塊面積[4]。目前高血壓患者血清ANGPTL2同頸動脈粥樣硬化之間的關系的研究尚無權威文獻報道。因此，本研究將基于血清層面對ANGPTL2與CAS斑塊形成及頸動脈中膜厚度（IMT）之間的關系進行探索。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2014年6 月～2015年6月間選擇就診于我院的伴有頸動脈粥樣硬化的原發性高血壓患者127例為研究對象，其中男性72例，女性55例，平均年齡（61±13.8）歲，年齡31～77歲。所選患者均符合我國2010年修訂版的高血壓診斷標準。患者入選標準需排除繼發性高血壓、各種慢性炎癥、腫瘤、急性冠脈綜合征及免疫系統疾病等。另選取同期我院健康體檢者59名作為對照組，其中男35例，女24例，年齡30～75歲，平均年齡（57.89±11.3）歲。血糖、血脂及肝腎功能等均無明顯異常。本研究通過我院倫理委員會審核，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1）樣本收集

收集所有研究對象清晨空腹時外周靜脈血液標本。本院檢驗科測定血清血糖、尿酸、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白等指標含量。另外每個研究對象再留取全血約4 mL，4℃促凝管下保存2 h后，3000 r/min×10 min條件下進行血清分離，去沉淀，取上層血清轉移至信的1.5 mL無酶EP管內，保存于-80℃冰箱內，待測ANGPTL2含量。

2）頸動脈超聲檢查

患者取仰臥位，頭部向后仰并偏于檢測面對側，以充分暴露檢查區域。采用PHILIPS IE33彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率7～12 MHz。依次取縱斷和橫斷切面，由下到上依次探查頸總動脈、頸動脈竇部、頸外及頸內動脈顱外段。仔細探查管腔狹窄和斑塊形成情況，尤其要注意斑塊部位、表面特征及回聲特點等。我們界定血管內表面光滑，無突起定義為無斑塊；表面平滑規則、等回聲、高回聲的鈣化的斑塊定義為低風險斑塊；而對于那些表面明顯不規則低回聲、混合回聲的斑塊定義為高風險斑塊。IMT厚度測量選取頸總動脈后壁的內-中膜最厚區域測量內膜內表面至中層表面間的距離。一般選擇理想測量部位是頸總動脈遠端距離分叉部1 cm處，注意測量時候避開有斑塊的部位。根據測量的IMT值分為三分位數，分別為T1組（＜0.9 mm）、T2組（0.9～1.1 mm）和T3組（＞1.1 mm）。

3）血清ANGPTL2含量的檢測

采用酶聯免疫吸附實驗（ELISA）檢測血清中ANGPTL2的水平。實驗操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學方法

實驗數據的分析是采用SPSS 13.0統計學軟件進行。計量資料以平均數±標準差表示。兩組間比較采取t檢驗或卡方檢驗。率的比較采取卡方檢驗、等級資料運用秩和檢驗。運用秩相關的Spearman方法分析ANGPTL2和血糖、血脂等指標間的相關性。P＜0.05為兩組間差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同斑塊風險、頸動脈內中膜厚度的CAS患者臨床資料特點

本研究所有對象根據斑塊風險和IMT將127例患者分別分為三組，結果顯示吸煙史（P=0.042）、總膽固醇（P=0.029）尿酸（P=0.033）和斑塊風險程度間顯著相關；而IMT厚度差異同總膽固醇（P＜0.001）、低密度脂蛋白（P=0.018）、甘油三酯（P=0.026）及尿酸（P=0.011）等血清指標水平顯著相關。未發現年齡、性別、體重指數及糖尿病史等因素與斑塊風險、IMT厚度之間的相關性。見表1。

表1 以斑塊風險及IMT為標準分組的臨床資料特點

2.2 不同斑塊風險、IMT厚度和血清ANGPTL2水平的關系

本研究實驗組高血壓患者血清ANGPTL2的含量顯著高于健康對照組，差異具有統計學意義（1944.8±191.4比979.7±155.3，P＜0.001）。不同的斑塊風險組血清水平比較：無斑塊組、低風險及高風險斑塊組均顯著高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.001）；其中低風險和高風險斑塊組較無斑塊組血清含量要高，高風險組與低風險組比較，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。同理，不同IMT厚度血清水平比較：＜0.9 mm組、0.9～1.1 mm及＞1.1 mm組均顯著高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.001）；其中0.9～1.1 mm及＞1.1 mm組較＜0.9 mm組血清含量要高，0.9～1.1 mm與＞1.1 mm組比較，差異均具有統計學意義（P＜0.001）。見表2。

表2 不同斑塊風險、IMT厚度患者血清ANGPTL2結果比較

2.3 血清ANGPTL2含量與血糖、血脂等指標的相關性

Spearman相關分析結果顯示：CAS患者血清ANGPTL2水平與總膽固醇正相關（r=0.468，P=0.016），與甘油三酯正相關（r=0.551，P＜0.001），與低密度脂蛋白正相關（r=0.527，P＜0.001）。而同年齡、血糖、尿酸及高密度脂蛋白等指標間未發現明顯相關性（P＞0.05）。見表3。

3 討 論

IMT厚度增加及粥樣硬化性斑塊的形成是高血壓靶器官損害的常見原因之一，是心腦血管疾病風險重要的預測指標[5-6]。臨床上高血壓伴有CAS的發病率高，探索該類疾病密切相關的血清標志物對風險評估、預后判斷意義重大。目前對CAS的病理生理機制研究的主流觀點認為是血管組織內持續的慢性炎癥反應，其過程涉及到細胞增殖、胞外基質降解、微血管病變及內皮細胞功能失調等因素[7-8]。ANGPTL2作為心血管系統疾病中研究熱點，目前多項研究證實它不僅廣泛參與上述環節，還可以通過誘導促炎反應、調節血脂代謝（如升高總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平）等方面促進粥樣硬化的病變進程[2，7]。因此，本研究以伴有CAS的高血壓患者為研究對象，基于血清層面探索血清中ANGPTL2的臨床價值。

本研究首先依據斑塊風險及IMT厚度對其與CAS患者臨床資料間關系做一分析。我們觀察到斑塊風險形成、IMT厚度均與總膽固醇、尿酸含量密切相關，而與性別、糖尿病病史等因素無明顯相關性；此外，我們還發現低密度脂蛋白及甘油三酯等指標同IMT厚度高度相關。本研究觀察到的高尿酸和高風險斑塊之間的相關性和Takayama等[9]研究結果較一致，目前對其機制分析是CAS斑塊內的炎癥反應是導致斑塊去穩定性的重要因素，而尿酸剛好也參與血管平滑肌細胞內的促炎反應途徑的調節過程。

表3 血清ANGPTL2水平與血糖、血脂等指標相關性分析

ANGPTL2是內皮細胞炎癥反應和CAS疾病中斑塊演變的重要調節因子，Farhat等[4]從動物實驗模型上也觀察到高表達的ANGPTL2可以大大地增加CAS斑塊的面積，從而顯著地增加發生心腦血管事件的風險。本研究從血清層面分析ANGPTL2與上述各亞組患者之間的關系，結果顯示CAS患者血清中ANGPTL2不僅顯著高于健康對照組，而且其表達含量的差異與不同斑塊風險組、不同IMT厚度間存在關聯。高風險斑塊組及IMT厚度增加明顯的CAS患者血清ANGPTL2含量均顯著高于其他各亞組。據我們所知這是首個報道高血壓伴有CAS患者血清中ANGPTL2與斑塊風險、IMT厚度之間關系的研究。C-反應蛋白（CRP）是動脈粥樣硬化風險的重要標志物，徐索文等[10]研究者發現ANGPTL2蛋白水平與血清CRP水平呈正相關。類似地，Farhat等[2，11]研究者在觀察冠狀動脈疾病（CAD）中循環ANGPTL2的變化規律時發現，CAD患者ANGPTL2的含量不僅明顯高于健康受試者，而且其表達含量升高的幅度和冠脈病變的嚴重程度成正相關。綜上結果我們認為血清ANGPTL2或可作為理想的標記物去監測伴有CAS高血壓患者斑塊形成的進展和預后的判斷。

本研究觀察到影響CAS患者血清ANGPTL2表達水平的相關因素有總膽固醇、低密度脂蛋白和甘油三酯等指標。近年來研究發現血管病變與血管外周脂肪組織（PVAT）密切相關，PVAT分泌的促炎和抗炎因子均可直接影響動脈粥樣硬化的發生發展[12]。實驗證明PVAT的旁分泌ANGPTL2可以參與血管的重建以及血管損傷誘導的內膜增生的過程[13]。粥樣斑塊的慢性炎癥反應過程中，ANGPTL2參與其中發揮生物學效應主要依賴整合素受體，從而促進細胞間粘附因子的表達上調和介導炎性反應。這點和上述報道的研究者觀察到的結論類似，他們證實了ANGPTL2介導的炎癥反應可以升高血漿總膽固醇、低密度脂蛋白的水平，從而加重粥樣硬化的進程。

綜上所述，伴有CAS的高血壓患者血清中ANGPTL2的表達水平同血脂指標密切相關，其水平的改變可一定程度反映頸動脈粥樣硬化斑塊的發生發展。ANGPTL2參與粥樣硬化發生發展的深入機制還有待后續研究，另外，本研究觀察到血清ANGPTL2的臨床價值還有待更多前瞻性研究給以證實和明確。

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ObjectiveTo explore the relationship between serum vascular angiopoietin-like protein 2(ANGPTL2) in hypertension patients with carotid atherosclerosis (CAS) and plaques,carotid intima-media thickness(IMT).Methods From June 2011 to June 2012,serum ANGPTL2 expression was investigated in 127 patients with CAS and 59 healthy nornlal controls by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) technique.The assessment of the degree of carotid atherosclerosis was based on the risk of plaques and IMT thickness.Results According to the plaque risk,all patients were divided into three groups: non-plaque group (47 cases),lowrisk plaque group (38 cases) and high-risk plaque group (42 cases).According to IMT thickness,all patients were also divided into three groups: T1 group (＜0.9mm,46 cases),T2 group (0.9-1.1mm,44 cases),T3 group (＞ 1.1mm,37 cases).High-risk plaque was signi fi cantly associated witha history of smoking (P = 0.042),uric acid (P = 0.033) and total cholesterol (P = 0.029); IMT thickness was significantly correlated with total cholesterol (P ＜0.001),LDL (P= 0.018),triglycerides (P = 0.026) and uric acid (P = 0.011).Serum ANGPTL2 levels in hypertension patients were signi fi cantly higher than in healthy controls (1944.8 ± 195.3 vs.979.7 ± 155.3,P ＜0.001); There were significant differences betweenfidderent plaque groups,IMT group and control group according to the serum ANGPTL2 levels (all P ＜0.001).With an increased risk of plaque and IMT thickening,serum ANGPTL2 showed gradually increasing trend.Spearman correlation analysis showed that serum ANGPTL2 levels were positively correlated with total cholesterol (r= 0.468,P = 0.016),triglycerides (r = 0.551,P ＜0.001) and LDL (r = 0.527,P ＜0.001).Conclusion The expression levels of serum lipid levels in hypertension patients with CAS are closely related ANGPTL2,the change of serum ANGPTL2 may reflect the development status of carotid atherosclerotic plaques.

Carotid atherosclerosis;Hypertension;Angiopoietin-like protein 2;Serum

R544.1

B

ISSN.2095-8242.2017.065.12748.04

本文編輯：吳玲麗