豬支原體肺炎疫苗免疫效果評價

龔文波，杜德燕，邱文英，朱冬梅，鄒智坤，郭建寶

（華派生物工程集團有限公司，四川 簡陽 641400）

豬支原體肺炎疫苗免疫效果評價

龔文波，杜德燕，邱文英，朱冬梅，鄒智坤，郭建寶

（華派生物工程集團有限公司，四川 簡陽 641400）

本試驗以不同廠家生產的豬支原體肺炎疫苗接種健康仔豬，然后從增重情況、血清抗體效價、肺部病變評分及肺部病變減少率等多個方面對疫苗免疫效果進行評價。結果表明，不同廠家生產的豬支原體肺炎疫苗的免疫效果存在較大差異，單一從某方面評價免疫效果所得出的結果可能存在偏差，如咳嗽指數與肺部評分就無直接相關性。

豬支原體肺炎；商品化疫苗；免疫效果；評價

豬肺炎支原體（Mhp）可引起豬支原體肺炎（MPS），也稱為豬喘氣病。該病具有高傳染性、高發(fā)病率和低死亡率的特點。豬肺炎支原體長期滯留于豬體內且治療效果不佳，造成豬飼料轉化率降低，該病的廣泛性流行給養(yǎng)豬業(yè)造成了很大的經濟損失[1]。疫苗在預防豬支原體肺炎中起著至關重要的作用，如何合理地評價疫苗效果從而指導豬場正確選用豬支原體肺炎疫苗對養(yǎng)豬場戶尤為重要。基于此，本試驗從市場上采購了幾種常見的商品化豬支原體肺炎疫苗，以盲樣方式進行免疫接種及攻毒，然后進行免疫效果比較。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 選用6個廠家生產的商品化豬支原體肺炎疫苗，每種疫苗抽取3瓶混合（至少20 mL），記錄疫苗類型、批號、生產日期等信息，分別標記為疫苗A、疫苗B、疫苗C、疫苗 D、疫苗E及疫苗F，將標記好的盲樣送往相關檢驗小組進行免疫效果評價。

1.1.2 主要試劑盒 豬支原體肺炎（ELISA）抗體檢測試劑盒，批號：HK575，購自IDEXX公司；豬支原體肺炎微量間接血凝（IHA）檢測試劑盒，批號：2016003，由華派生物工程集團有限公司自制。

1.1.3 試驗動物 14日齡健康仔豬，豬繁殖與呼吸綜合征、豬偽狂犬病、豬瘟抗原陰性，豬放射性胸膜肺炎、豬支原體肺炎母源抗體陰性。

1.1.4 攻毒用毒種 豬支原體濟南系凍干肺組織毒，由華派生物工程集團有限公司提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗分組 將80頭14日齡健康仔豬隨機分為8組，每組10頭，分別標記為A組、B組、C組、D組、E組、F組、空白對照組及攻毒對照組。空白對照組仔豬在獨立的環(huán)境中隔離飼養(yǎng)，各組仔豬的環(huán)境條件及飼養(yǎng)管理均保持一致。

1.2.2 免疫 每組仔豬在14日齡接種相同標記的豬支原體肺炎疫苗，接種劑量為每頭豬1頭份（2 mL），接種方式按廠家說明書進行，攻毒對照組每頭接種2mL生理鹽水。首免后14 d加強免疫一次，免疫劑量為1頭份/頭，攻毒對照組每頭接種2mL生理鹽水。

1.2.3 攻毒 加強免疫后4d進行攻毒保護試驗。疫苗接種組及攻毒對照組的每頭仔豬經氣管內接種豬肺炎支原體濟南系凍干肺組織毒5mL（含100MID），攻毒后連續(xù)觀察25d進行剖殺。

1.2.4 免疫效果評價指標

1.2.4.1 日增重 所有試驗豬在免疫當天、攻毒當天及剖殺當天進行稱重，計算各個階段的日增重情況。

1.2.4.2 免疫接種后臨床癥狀觀察 所有試驗豬在免疫后進行臨床癥狀觀察，觀察內容包括：精神、食欲、注射部位反應、全身反應等。

1.2.4.3 血清抗體檢測 于免疫當天（未接種前）及首免后14d、28d、42d分別采血，采用IDEXX抗體檢測試劑盒、自制微量間接血凝檢測試劑盒進行血清抗體檢測。

1.2.4.4 攻毒后臨床癥狀觀察及咳嗽指數 所有試驗豬在攻毒后連續(xù)觀察25d，每天上午、下午各觀察1次，每次至少觀察15min。檢測范圍包括總體健康狀況、活動情況、精神食欲狀況和咳嗽指數。咳嗽指數標記如下：0（沒有咳嗽），1（追趕時輕度咳嗽），2（休息時輕度咳嗽），3（追趕時溫和咳嗽），4（休息時溫和咳嗽），5（追趕時嚴重咳嗽），6（休息時嚴重咳嗽）。計算每組每天的平均咳嗽指數。

1.2.4.5 肺臟病變情況 攻毒后25d剖殺試驗豬，采用Goowin氏55分記分法對肺臟病變情況進行評分，記分標準為：每個尖葉、心葉滿分各為10分，膈葉的前三分之一滿分為5分，中間葉滿分為5分。病變記分時，分別對每個肺葉進行記分，根據發(fā)生實質病變的肺葉面積占該肺葉的比例進行打分，如滿分為10分的肺葉有3/10的面積產生實質化病變則該肺葉打3分，如滿分為5分的肺葉有3/10的面積產生實質化病變則該肺葉打1.5分。記分時只對肺葉的一面進行記分，如肺葉兩面均有病變，以病變面積大的一面進行記分。各個肺葉打分總和即為該發(fā)病豬的肺部病變得分。分別對免疫組豬和對照組豬進行記分，按照以下公式計算各組免疫豬的肺部病變減少率：

肺部病變減少率=（對照豬肺炎幾何平均分-免疫豬肺炎幾何平均分）/對照豬肺炎幾何平均分×100%

2 結果

2.1 平均增重 試驗結果表明，在免疫后至攻毒前，D組、E組試驗豬的平均增重及平均日增重優(yōu)于空白對照組及攻毒對照組；A組試驗豬的平均增重和平均日增重與攻毒組相當，略低于空白對照組；B組、C組及E組試驗豬的平均增重、平均日增重相當，均明顯低于空白對照組及攻毒對照組。在攻毒后，由于各組疫苗免疫效果的差異，試驗豬產生的免疫保護力也有所不同，因此其健康狀況所受影響不同，從而導致各組平均體重存在明顯差異。其中D組和F組的平均增重明顯優(yōu)于其余各疫苗組和空白對照組，A組、B組及E組的平均增重較低，顯著低于空白對照組。結果見表1。

表1 各組試驗豬各階段增重情況 kg

2.2 接種后臨床癥狀觀察結果 除A組試驗豬在接種疫苗后有2/10出現精神不振、食欲下降的臨床癥狀外，其余5組試驗豬在接種疫苗后均精神食欲正常，注射部位無紅腫炎癥現象，無局部或全身不良反應。

2.3 各時間點血清抗體檢測 用2種試劑盒進行檢測，結果顯示：C、D組和F組在各時間點測得的抗體水平均明顯優(yōu)于其余各疫苗組；B組、D組和F組首免后6周抗體水平處于上升趨勢，而A組、C組及E組抗體水平在首免后第4周達到高峰，第6周開始呈現下降趨勢；空白對照組及攻毒對照組抗體水平無明顯變化，均為陰性。綜合各組抗體水平試驗結果，D組及F組抗體水平顯著高于其余疫苗組，且其高抗體水平維持時間較其余疫苗組長，說明免疫接種疫苗D及疫苗F的免疫豬更有可能獲得更高的免疫保護力及更長的免疫保護期（結果見表2）。

表2 各時間點血清抗體水平檢測結果

對兩種方法的檢測結果進行分析后發(fā)現：ELISA方法的抗體水平消長趨勢與IHA方法基本一致，兩種檢測方法具有很高的符合率。而采用IHA方法能檢測出試驗豬的具體抗體水平，可以為分析免疫個體及群體的抗體水平提供可靠依據。

2.4 攻毒后臨床癥狀觀察及咳嗽指數 在使用豬肺炎支原體強毒株進行攻毒后，發(fā)現D組和F組各有1頭在追趕時出現輕度咳嗽，D組和F組所有試驗豬未出現其他臨床癥狀；其余免疫組的咳嗽頭數和咳嗽指數均高于D組和F組；空白對照組所有試驗豬未出現咳嗽、氣喘等臨床癥狀；攻毒對照組試驗豬有10頭出現咳嗽、氣喘、食欲下降等癥狀。攻毒后25d觀察期內，最早出現咳嗽癥狀的為攻毒對照組仔豬，部分試驗豬在攻毒后第7d出現咳嗽癥狀，部分免疫豬在攻毒后25d觀察到咳嗽癥狀。

2.5 肺部病變情況 使用豬肺炎支原體強毒進行攻毒后，采用Goodwin氏55分法記分，結果如下：攻毒對照組的肺部病變評分平均為43.75，D組和F組試驗豬的肺部病變評分最低，肺部病變減少率效果相當，表明試驗豬接種疫苗D及疫苗F后能有效抵抗豬肺炎支原體強毒的攻擊。A組肺部病變減少率較低，低于60%，B組、C組及E組的肺部病變減少率均在60%～70%之間（結果見表3）。

表3 各組肺部病變評分及肺部病變減少率

2.6 咳嗽指數與肺部病變減少率的相關性分析 在70頭攻毒試驗豬中，有26頭發(fā)生了咳嗽，其中2頭試驗豬的肺部病變減少率大于等于60%，而在未觀察到咳嗽的54頭試驗豬中，有16頭試驗豬的肺部病變減少率小于60%。結果表明：咳嗽指數與肺部病變減少率無直接相關性，因此咳嗽指數只能作為豬支原體肺炎疫苗免疫效果評價的輔助判定指標，不能完全代替肺部病變減少率這一金標準（結果見表4）。

表4 咳嗽指數與肺部病變減少率的相關性 頭

3 小結與分析

雖然使用豬支原體肺炎疫苗并不能阻止豬群感染該病原[2-3]，但進行疫苗免疫接種后能有效減少支原體在呼吸道的定植，同時降低豬群的感染水平[4]。另有研究報道，接種疫苗可減少商品豬的臨床癥狀及肺部損傷，降低治療費用[5]。本試驗采用盲樣法進行檢測，以保證檢驗的公正有效性。在免疫效果評價過程中，分別以增重情況、免疫接種后的臨床癥狀觀察、血清抗體水平檢測、攻毒后咳嗽指數、攻毒后肺部病變評分及肺部病變減少率等作為評價指標，結果表明：免疫接種疫苗D（商品名：支肺通）和疫苗F的試驗豬在日增重、血清抗體效價、攻毒后咳嗽指數、攻毒后的肺部病變減少率等方面均優(yōu)于其余疫苗。

從本次試驗可以看出，在豬支原體肺炎滅活疫苗的免疫效果評價指標中，試驗攻毒后的增重、接種后的血清抗體水平、攻毒后的肺部病變減少率存在正相關性，而咳嗽指數與肺部病變減少率無直接相關性。肺炎病變減少率越高，則增重越明顯。有報道稱，由豬肺炎支原體引起的肺炎每10%的病變區(qū)域可以導致體重少增加23～37 g/d，對日齡小的豬的影響更大，日齡小的豬感染豬肺炎支原體后，對體重的影響是終生的，而肺損傷過程有時并不能觀察到臨床癥狀。因此，養(yǎng)豬場在判定豬只是否感染豬肺炎支原體時，不能僅根據豬只是否有咳嗽而判定。在血清抗體效價檢測中，ELISA方法的抗體水平消長趨勢與IHA方法基本一致，兩種檢測方法具有很高的符合率。采用IHA方法能檢測出試驗豬的具體抗體水平，可以為分析免疫個體及群體的抗體水平提供可靠依據，且操作簡單、成本更加低廉、無需專門的檢測儀器，因此更適用于基層獸醫(yī)部門及養(yǎng)殖場。■

[1] Barbara E，Jeffery J，Sylvie D，et al.Diseases of Swine[M].9th Edition.United States：Wiley Blackwell，2006：785-787.

[2] Maes D，Deluyker H，Verdonck M，et al.Effect of vaccination againstMycoplasma hyopneumoniae in pig herds with an all-in/all-out production system[J].Vaccine，1999，17（9-10）：1024-1034.

[3] Thacker E L，Thacker B J，Boettcher T B，et al.Comparison of antibody production，lymphocyte stimulation and protection induced by four commercial Mycplasma hyopneumoniae bacterins[J].J Swine Health Prod，1998，6（3）：107-112.

[4] Sibila M，Nofrarías M，López-Soria S，et al.Chronological study of Mycoplasma hyopneumoniae infection，seroconversion and asscociated lung lesions in vaccinated and non-caccinated pigs[J].Vet Microbiol，2007，122（1-2）：97-107.

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Evaluation of Immune Effect on Mycoplasma Hyopneumoniae Vaccine

Gong Wenbo，Du Deyan，Qiu Wenying，et al.

（Sichuan Huapai Bioengineering Group Co.,Ltd.，Sichuan Jianyang 641400，China）

The purpose of this research was to evaluate the immune effect of different commercial Mycoplasma hyopneumoniae vaccine.Firstly，healthy piglets were immunized with vaccines from different manufacturers，then the weight gain，serum antibody titer，lung lesion score and lung lesion reduction rate of pigets were detected to evaluate the effect of vaccine.The results showed that the immune effects of different vaccines had large differences，evaluating the immune effect from single aspect may be a deviation，such as cough index score wasn,t associated with lung lesion score.

Mycoplasma hyopneumoniae；Commercial vaccine；Immune effect；Evaluation

S852.4

B

1001-8964（2017）12-0024-04

2017-08-07

龔文波（1965-），男，重慶墊江人，碩士研究生，高級工程師，華派生物工程集團有限公司總經理，主要從事獸用生物制品的研發(fā)及生產管理。