樂山市定點屠宰生豬圓環(huán)病毒2 型感染情況調(diào)查

王鋼，廖娟，喻世剛，張鑫焱，謝能君，姚彩霞

（樂山師范學院生命科學學院，四川 樂山 614004）

樂山市定點屠宰生豬圓環(huán)病毒2 型感染情況調(diào)查

王鋼，廖娟，喻世剛，張鑫焱，謝能君，姚彩霞

（樂山師范學院生命科學學院，四川 樂山 614004）

為了解樂山市定點屠宰生豬的豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）感染情況，本試驗對2016年6月～2017年5月收集的生豬脾臟采用PCR快速檢測方法進行PCV2病毒DNA檢測。結(jié)果顯示：樂山市定點屠宰生豬PCV2的陽性檢出率為68.12%，感染較為嚴重。

屠宰生豬；豬圓環(huán)病毒2型；PCR檢測

豬圓環(huán)病毒（PCV）在分類學上屬圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，其基因組為單股環(huán)狀DNA，由20面體對稱的蛋白衣殼包裹，平均直徑約17±1.3nm，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的動物病毒之一[1-2]。豬圓環(huán)病毒病最早在20世紀90年代初發(fā)現(xiàn)于加拿大，1996年在歐洲一些國家暴發(fā)，現(xiàn)在在世界上普遍流行。2001年我國首次報道PCV2感染，之后該病在我國的流行呈逐年上升趨勢[3]。李瑞香[4]研究表明，種豬對PCV2的感染率達67%，育肥豬感染率為64.71%。本試驗應(yīng)用PCR技術(shù)對2016年6月～2017年5月隨機收集的樂山市某定點屠宰場生豬的脾臟進行PCV2檢測，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 PCV2組織樣品來源 2016年6月～2017年5月期間，從樂山市高新區(qū)車子鎮(zhèn)黎明屠宰場采集160份不同類型豬群的脾臟，每份樣品采集5g，分別置于5mL塑料管中-80℃保存。

1.1.2 試劑 豬圓環(huán)病毒2型PCR檢測試劑盒，購自深圳市康百得生物科技有限公司。

1.1.3 儀器 BD-3000凝膠成像分析系統(tǒng)，Select Cycler 2 Thermerl Cycler、Select Spin17R 微型冷凍離心機。

1.2 方法

1.2.1 病毒DNA的提取和PCR檢測 豬圓環(huán)病毒2型病毒DNA的提取和PCR檢測，按試劑盒說明書方法進行。

1.2.2 電泳 將PCR產(chǎn)物用3%瓊脂糖凝膠電泳后，于紫外線下觀察、拍照并記錄結(jié)果。

1.2.3 TA克隆與轉(zhuǎn)化 隨機將一陽性PCR產(chǎn)物克隆至pEASY-T3 Cloning Vector，并轉(zhuǎn)化至Trans1-T1感受態(tài)細胞中。將經(jīng)PCR鑒定為陽性的克隆產(chǎn)物于4℃冰箱中保存。

1.2.4 PCR產(chǎn)物的序列測定 將PCR陽性克隆產(chǎn)物送至成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司進行序列測定，并將測定的序列與NCBI數(shù)據(jù)庫比對分析。

2 結(jié)果

2.1 PCV2 PCR擴增結(jié)果 豬圓環(huán)病毒2型部分PCR產(chǎn)物凝膠電泳檢測結(jié)果，見圖1、圖2。分析表明，160份樣品中檢出PCV2陽性樣品109份，陽性率為68.12%。

2.2 序列分析 將測得的序列與NCBI數(shù)據(jù)庫進行分析和比較，發(fā)現(xiàn)其與目的基因PCV2相應(yīng)序列的同源性最高（＞99%）。說明本方法檢測可行，結(jié)果基本可信。

圖1 2016年部分臨床組織樣品PCR檢測結(jié)果

圖2 2017年部分臨床組織樣品PCR檢測結(jié)果

3 小結(jié)與分析

3.1 檢測結(jié)果顯示PCV2病毒在四川省樂山市的感染率較高。趙軍等[5]對四川省13市部分豬場的疑似病例進行PCV2病原檢測，陽性率達到71.55%，其中陽性率最高的達88.89%。鄧靜等[6]對2010～2013年四川省11個城市的豬圓環(huán)病毒2型疑似病例進行PCV2病原檢測，陽性率達到70.7%，其中樂山市陽性檢出率高達100%。本研究從樂山市定點屠宰場采集脾臟樣品，檢出PCV2陽性率高達68.12%，明顯高于其他地區(qū)，說明PCV2在樂山地區(qū)感染比較嚴重。

3.2 PCV2的主要易感動物是豬，各種年齡、不同性別的豬都可以感染。由于PCV2對外界環(huán)境抵抗力極強，部分外觀健康的肥豬帶毒但未發(fā)病，成了潛在的重要的傳染源。各級獸醫(yī)主管部門和技術(shù)人員應(yīng)當向養(yǎng)殖戶普及PCV2的防控知識，使養(yǎng)殖戶自覺做好PCV2的免疫工作，這樣才能減少該病的傳播，降低經(jīng)濟損失。■

[1] 楊紅菊，姜艷彬，王海，等.Ⅱ型豬圓環(huán)病毒流行病學研究進展及疾病診斷與防控[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2012，28（4）：101-103.

[2] 劉鴿，張培生，于會舉，等.北疆地區(qū)規(guī)模化豬場豬圓環(huán)病毒2型免疫抗體水平檢測與分析[J].養(yǎng)豬，2016（5）：105-107.

[3] 甘孟侯，楊漢春.中國豬病學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005：440-461.

[4] 李瑞香.規(guī)模化豬場豬圓環(huán)病毒2型的血清流行病學調(diào)查[J].動物醫(yī)學進展，2017，38（3）：129-132.

[5] 趙軍，周桐楓，劉鵬娟，等.四川地區(qū)腹瀉仔豬群豬圓環(huán)病毒Ⅱ型分子流行病學調(diào)查[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學報，2016，38（7）：546-549.

[6] 鄧靜，趙春榮，曹三杰，等.2010～2013年四川地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型的分子流行病學調(diào)查[J].中國獸醫(yī)學報，2014，34（12）：1868-1876.

Infection Investigation of Porcine Circovirus Type 2 in Leshan Pigs Slaughterhouses

Wang Gang，Liao Juan，Yu Shigang，et al.

（College of Life Sciences，Leshan Normal University，Sichuan Leshan 614004，China）

In order to investigate the infection of porcine circovirus type 2（PCV2） in Leshan pigs slaughterhouses，the samples of slaughter pig,s spleen were collected from June 2016 to May 2017.PCR method was used to detect PCV2 DNA.The results showed that the positive rate of PCV2 was 68.12%，its prevalence in Leshan area was serious.

Slaughter pig；Porcine circovirus type 2；PCR detection

S851.313

B

1001-8964（2017）12-0030-02

2017-10-20

四川省教育廳資助科研項目（16CZ0031）；樂山市重點科研項目（15NCXY121）

王鋼（1979-），男，重慶綦江人，副教授，碩士研究生，主要從事預(yù)防獸醫(yī)學與農(nóng)業(yè)廢棄物資源利用研究。