MTDH在66例原發性肝癌組織中的表達及臨床意義分析

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(1.衡南縣人民醫學微創中心，湖南 衡陽 421131；2.南華大學附屬第一醫院)

·臨床醫學·

MTDH在66例原發性肝癌組織中的表達及臨床意義分析

廖粵軍1，劉紅光2，李漢賢2

(1.衡南縣人民醫學微創中心，湖南 衡陽 421131；2.南華大學附屬第一醫院)

目的探討異黏蛋白(MTDH)在原發性肝癌組織中的表達及其臨床意義。方法收集原發性肝癌患者手術切除標本66例，用癌旁正常組織作為對照，運用免疫組化技術檢測肝癌組織及對照正常肝組織中MTDH的表達水平，統計學方法分析其與患者臨床參數的關系。結果在66例肝癌組織中MTDH陽性表達率為77.3%(51/66)，對照組MTDH陽性表達率為34.8%(23/66例)，兩者比較，差異有顯著性(P<0.001)；在原發性肝癌組織中，MTDH的表達水平在肝癌患者不同性別、年齡、AST、AFP及腫瘤大小等臨床病理特征中表達差異無顯著性(P>0.05)，MTDH的表達隨著肝癌患者臨床分期進展而呈上升趨勢(P<0.05)；MTDH的表達與肝癌患者HBV感染相關，HBV陽性肝癌患者的MTDH表達高于HBV陰性肝癌患者(P<0.05)。結論MTDH在原發性肝癌組織中表達上調，其可能成為肝癌患者病情進展預測的潛在生物學標志。

MTDH； 原發性肝癌； 免疫組化技術

原發性肝癌(primary hepatocellular carcinoma，PHC)是我國常見的惡性腫瘤之一， 由于其惡性程度高病程發展快，故肝癌的病死率較高，目前肝癌的主要治療方法是手術切除，盡管患者術后長期生存率有所提高，但高的術后復發率及其轉移率，仍是大多數術后肝癌患者的主要死因。據報道，原發性肝癌的發生與病毒性肝炎感染、黃曲霉毒素、酗酒等病因息息相關。目前原發性肝癌的發病機制仍不清楚，病理分型復雜多樣，故肝癌仍然沒有合適的治療方法。異黏蛋白(Metadherin，MTDH)，又稱星形膠質細胞上調基因-1( astrocyte elevated gene-1，AEG-1)，能編碼AEG-1蛋白，首次發現是被人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染或用腫瘤壞死因子-α(TNF-α)或HIV-1糖蛋白gp120誘導人胚胎星形細胞后導致表達升高的一種基因。近來研究發現，AEG-1作為一種癌基因，在多種腫瘤(包括肝細胞癌、膽囊癌、腎細胞癌、乳腺癌、肺癌以及神經膠質瘤、神經母細胞瘤等)中過表達，并在腫瘤細胞增殖、轉化、侵襲、轉移、血管生成和化療耐藥方面起重要作用，成為多種腫瘤預后的獨立危險因素[1-2]。本文主要研究MTDH在原發性肝癌組織中的表達水平，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料選擇本院及南華大學附屬第一醫院2012年3月～2014年3月住院患者手術切除的原發性肝癌標本66例，所有病例診斷均通過病理證實為肝細胞肝癌，術前均未采取放療、化療治療，同一患者手術標本切緣正常組織為陰性對照。其中男性病例數為49例，女性病例數為17例；年齡在39～72歲，平均年齡為55.5歲；按Edmondson標準分級[3]：包括Ⅰ級15例，Ⅱ級17例，Ⅲ級23例，Ⅳ級11例；27例腫瘤小于5 cm，39例腫瘤大于5 cm。

1.2試劑免疫組化試劑盒(武漢博士德)，DAB顯色試劑盒(北京中杉金橋)，MTDH抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司，二抗購自上海長島生物技術有限公司。

1.3方法所有組織樣本均經4% 中性緩沖甲醛進行固定，常規石蠟包埋。免疫組化采用SP 法。一抗為兔抗人MTDH(稀釋倍數為1∶1 000)，稀釋后滴加于切片上，濕盒4 ℃過夜。第2天以羊抗兔二抗室溫下孵育半個小時，操作嚴格按說明書進行。使用DAB顯色液室溫孵育10 min，再用蘇木精復染，脫水，封片。

1.4結果判定MTDH染色陽性產物均定位于細胞質，為棕黃色顆粒，背景干凈，間質無著色，根據染色強度和陽性細胞數綜合判定如下[4]：光學顯微鏡下觀察陽性染色細胞數占瘤細胞總數比例(5個高倍視野下的均數) 以及染色程度分為：陰性：陽性細胞數小于10%，與背景顏色相同；陽性染色：陽性細胞數在10%～50%之間，背景顏色呈黃色；強陽性染色：陽性細胞數大于等于50%，背景顏色呈棕黃色或褐色。

1.5統計學處理應用SPSS13.0統計軟件進行分析，計數資料的比較采用χ2檢驗，組間比較用方差分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 MTDH在原發性肝癌與正常肝組織中的表達在66例原發性肝癌組織中，其中51例MTDH呈陽性表達，陽性率為77.3%；相應的正常肝組織中MTDH陽性表達僅23例，陽性率為34.8%(表1，P<0.001)。MTDH在原發性肝癌組織中表達上調。

圖1 MTDH在肝癌組織中的表達(400×)

組別nMTDH-+++陽性率(%)P值原發性肝癌組織6615282377.30.000正常肝組織6643111234.8

2.2原發性肝癌組織中MTDH表達與臨床參數的關系在66例原發性肝癌組織中，MTDH的表達與患者的性別、年齡及腫瘤大小無關(P>0.05)。且MTDH水平隨著Edmondson分級的增加而逐漸升高，MTDH的表達隨著肝癌分級進展而上調(P<0.05)。見表2。

2.3 MTDH表達與HBV感染、AFP及AST水平之間的關系66例原發性肝癌患者中，HBV感染者 56例，其中有46例MTDH表達陽性；而在未感染HBV的10例患者中， MTDH表達陽性僅占5例，MTDH表達水平在HBV陽性患者中表達明顯增加(P<0.05)。但MTDH的表達與肝癌患者AFP水平無相關性(表3)。

表2 肝癌組織中MTDH的表達與臨床參數的關系

表3 MTDH表達與HBV感染、AFP及AST水平之間的關系

3 討 論

異黏蛋白(MTDH)是一種含有582個氨基酸的跨膜蛋白,又名星形膠質細胞升高基因1 (Astrocyte elevated gene，AEG-1)，定位于染色體8q22，在多種惡性腫瘤中均有較高的表達，如：乳腺癌、胃癌、結直腸癌、黑色素瘤、非小細胞肺癌、肝細胞肝癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜癌等[5-8]。隨著進一步的研究發現，MTDH不僅與腫瘤的發生發展相關，尤其在腫瘤的侵襲轉移扮演著重要角色，MTDH在90%的肝癌患者中呈現高表達，MTDH的高表達常常提示肝癌病人預后不良[2]。有文獻報道，MTDH可能作為一個潛在的關鍵基因調節腫瘤的各種生物化學表型，如轉移，耐藥，轉化及抗凋亡作用，因此，MTDH作為指示腫瘤預后的關鍵標志物，具有重要潛在的臨床診斷意義[9]。

MTDH/AEG-1可通過多種信號通路如ras,myc,Wnt,PI3K/AKT,NF-kB等介導各種惡性腫瘤的分化、增殖、侵襲和轉移等生物學行為[10]。Huang等[11]發現在乳腺癌、肝癌、前列腺癌和神經母細胞瘤中敲除MTDH后，腫瘤的耐藥性明顯減低，具體機制尚不明確。一系列的研究證實，MTDH具有癌基因的重要作用。例如，在無成瘤能力的永生化大鼠胚胎成纖維細胞中過表達MTDH，正常細胞發生惡性轉化并具有裸鼠體內成瘤的能力，為證明MTDH具有癌基因的功能提供了強有力的證據[12]。Li等[13]通過對225例乳腺癌臨床標本進行免疫組化分析，發現93.3%的乳腺癌臨床標本呈現MTDH表達陽性，其中44.4%為強陽性，而且MTDH的表達與乳腺癌的臨床病理分級和增殖標志物Ki67的表達水平呈正相關，與患者的生存預后呈負相關。隨后，課題組[14]也證實MTDH在170例乳腺癌標本中呈現中度到強陽性的表達，并再次確證其表達水平與乳腺癌患者生存預后的密切關系。而在168例食管癌臨床標本中對MTDH的表達進行分析的研究發現，92.9%的食管癌組織高表達MTDH，MTDH的高表達水平與食管癌患者的不良預后相關[15]。Su等[16]在惡性程度不同的腺癌組織中進行分析，發現MTDH 表達量與惡性程度呈正相關。Yu等[17]對109 例肝癌患者組織進行免疫組化分析，發現MTDH 的過表達與腫瘤的分期及組織分級密切相關。在本文中66例PHC患者組織中MTDH 以高表達為主，而手術標本切緣正常組織中以低表達為主。MTDH 在PHC的高表達與患者的性別、年齡及腫瘤大小無關(P>0.05)，但卻與肝癌患者的臨床病理特征，如Edmondson分級呈正比關系，即Edmondson分級越高則MTDH的表達陽性率越高，提示MTDH 的高表達與原發性肝癌的發生、發展有關，與文獻的報道基本相一致。有研究發現，MTDH的表達與HBV感染呈負相關，HBV感染的患者出現MTDH低表達[18]。而在本文的研究中發現HBV感染的肝癌患者組織中MTDH表達增加(P<0.05)，MTDH表達情況與AFP水平二者無相關性(P>0.05)，其相關的作用機制尚未見文獻報道，需進一步的深入研究。

近年來，越來越多的證據證實MTDH在惡性腫瘤的進展和預后等方面的影響不容小覷，針對MTDH靶點的治療可能是一種極具潛力的抗癌策略。在肝癌細胞中，siRNA MTDH可以顯著下調Hep-AEG1-14細胞MTDH及LEF1蛋白水平[19]。在乳腺癌細胞中，轉染含pcDNA-MTDH-microRNA(miR)4的重組質粒能夠顯著降低MTDH mRNA和蛋白質表達水平69%以上，與對照組相比顯著抑制瘤細胞增殖、侵襲[20]。研究發現通過miRNA-30a抑制MTDH基因可以達到抑制乳腺癌細胞株增殖、遷移和侵襲的目的[18]。RNA干擾技術靶向MTDH基因可能成為克服化療耐藥的新策略[7]。

綜上所述，MTDH表達水平在原發性肝癌分級中發揮了重要作用，其可能與肝癌病情進展密切相關，MTDH可作為預測原發性肝癌病情進展的一個潛在分子標志物，同時也為肝癌的治療及預后提供新的理論依據。

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ExpressionandclinicalsignificanceofMTDHinprimaryhepatocellularcarcinomatissues

LIAO Yuejun

(MinimallyInvasiveCenter,thePeople’sHospitalofHengnanCounty,Hengyang421131,Hunan,China)

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of MTDH in primary hepatocellular carcinoma tissues.Methods66 primary hepatocellular carcinoma tissues and normal liver tissues near the cancer were collected from Mar 2007 to Mar 2014. Immunohistochemistry was used to detect the expression of MTDH.ResultsThe positive expression rate of MTDH was 77.3% in primary hepatocellular carcinoma tissues and 34.8% in normal liver tissues. The upregulation of MTDH expression was associated with the progression of clinical stage and HBV.ConclusionsThe upgrade expression of MTDH is probably a significant event in the primary hepatocellular carcinoma，and it could be regarded as a potential biomarker in predicting the progression in primary hepatocellular carcinoma.

hepatocellular carcinoma； MTDH； immunohistochemistry； clinical significance

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2017.03.020

2016-12-13；

2017-04-08

R735.7

A

蔣湘蓮)