93例女性生殖道感染念珠菌菌種分布及藥敏結果分析

李前輝 李 鶴 林 濤 唐朝貴 姜玉章 江 明

·論著·

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93例女性生殖道感染念珠菌菌種分布及藥敏結果分析

李前輝1李 鶴2林 濤1唐朝貴1姜玉章1江 明2

目的明確93例女性生殖道念珠菌感染菌種分布及藥敏。方法收集93例女性生殖道感染患者分泌物，采用Sabouraud瓊脂培養(yǎng)基進行菌落培養(yǎng)，血清芽管試驗及CHROMagar顯色培養(yǎng)基進行菌株的篩選，DL-96 FUNGUS念珠菌鑒定系統(tǒng)進行念珠菌鑒定及藥敏試驗。結果菌種構成分布依次為白念珠菌81株(87.10%)，光滑念珠菌8株(8.60%)，都柏林念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌、乳酒念珠菌各1株(1.08%)。白念珠菌對兩性霉素B和5-氟胞嘧啶敏感率為100.00%，其它依次為伏立康唑(93.83%)、氟康唑(85.19%)和伊曲康唑(62.96%)。光滑念珠菌對兩性霉素B和5-氟胞嘧啶敏感率為100.00%，其它依次為伏立康唑(87.50%)、氟康唑(62.50%)和伊曲康唑(25.00%)。結論女性生殖道感染的念珠菌主要菌種是白念珠菌，敏感率最高的藥物為兩性霉素B和5-氟胞嘧啶。

女性生殖道； 念珠菌； 藥物敏感試驗

女性生殖道感染念珠菌是引起婦科炎癥常見的原因之一，可導致外陰陰道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis，VVC)。很多VVC經治療后仍容易復發(fā)，給病人帶來困擾和負擔。本研究通過對江蘇淮安及周邊地區(qū)女性患者生殖道感染念珠菌標本進行病原學鑒定及體外藥物敏感試驗，揭示本地區(qū)致病菌種的分布特征和藥敏特點，為臨床診療及合理用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 菌株來源 93例標本來源于南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院2012年6月至2017年3月皮膚科和婦科初診患者。患者年齡18～80歲，平均30.5歲。患者在就診前未接受過抗真菌藥物治療、未合并其它生殖道疾病。患者具有外陰瘙癢、白帶增多、呈豆腐渣樣等典型臨床癥狀。以無菌棉拭子經窺陰器進入陰道，取陰道后穹隆分泌物進行常規(guī)鏡檢，鏡檢見真菌者進一步做真菌培養(yǎng)。

1.2 培養(yǎng)基與試劑 Sabouraud瓊脂培養(yǎng)基購自杭州濱河微生物試劑有限公司，CHROMagar顯色培養(yǎng)基購自鄭州博賽生物科技有限公司，DL-96 FUNGUS念珠菌鑒定與藥敏試驗系統(tǒng)購自珠海迪爾生物工程有限公司。

1.3 菌種培養(yǎng)鑒定及藥敏試驗

1.3.1 標本接種 將采集的標本分區(qū)劃線接種于Sabouraud瓊脂培養(yǎng)基，放置于35℃真菌培養(yǎng)箱孵育24～72 h，菌落白色、奶油樣，軟而光滑、有光澤。

1.3.2 血清芽管實驗 挑取少許菌落混懸在0.2～0.5 mL的健康人血清中，37℃孵育2～4 h，每小時觀察1次，取1滴菌懸液置載玻片上，鏡下見芽管者為白念珠菌。

1.3.3 菌落篩選 將菌落劃線接種于CHROMagar顯色培養(yǎng)基，25℃～30℃培養(yǎng)48～72 h，觀察結果。白念珠菌為綠色菌落；光滑念珠菌為紫色菌落；熱帶念珠菌為藍灰色、鐵藍色菌落；克柔念珠菌為粉紅色菌落；白色至淡粉色為其它種類的念珠菌。

1.3.4 菌種鑒定及藥敏試驗 從培養(yǎng)基上挑取菌落制成濁度為1麥氏單位的菌懸液，利用DL-96 FUNGUS念珠菌鑒定與藥敏試驗系統(tǒng)進行菌種鑒定及藥敏試驗，24 h后讀取結果。

1.3.5 質控菌株 ATCC 90029(白念珠菌)、ATCC 15126(光滑念珠菌)、ATCC 13803(熱帶念珠菌)、ATCC 6258(克柔念珠菌)。

2 結果

2.1 念珠菌的菌種分布特征 念珠菌的菌種培養(yǎng)鑒定特點，見表1。

表1 念珠菌的菌種培養(yǎng)鑒定特點

在93例女性患者生殖道感染念珠菌標本中，病原學鑒定顯示：菌種構成主要為白念珠菌(81株)，其次為光滑念珠菌(8株)，都柏林念珠菌、熱帶念珠菌、克柔念珠菌、乳酒念珠菌各有1株。菌種的構成比，見表2。

表2 93株念珠菌的菌種分布特征

2.2 念珠菌的體外藥敏試驗結果 白念珠菌的體外藥敏試驗結果顯示：敏感率最高的藥物為兩性霉素B和5-氟胞嘧啶(兩者均達100.00%)，其它依次為伏立康唑(93.83%)、氟康唑(85.19%)、伊曲康唑(62.96%)。見表3。

光滑念珠菌的體外藥敏試驗結果顯示：敏感率最高的藥物為兩性霉素B和5-氟胞嘧啶(兩者均達100.00%)，其它依次為伏立康唑(87.50%)、氟康唑(62.50%)、伊曲康唑(25.00%)。見表4。

表3 81株白念珠菌的體外藥物敏感試驗結果 例(%)

表4 8株光滑念珠菌的體外藥物敏感試驗結果 例(%)

3 討論

白念珠菌是人體最重要的機會致病真菌之一[1]，在口腔、呼吸道、腸道、女性陰道均有分布，一般數量較少，不引起疾病，但是當機體免疫力降低時，則會大量繁殖而引起疾病。

有研究表明念珠菌感染已成為陰道感染的第二大病因，僅次于細菌性陰道炎[2]。女性在青春期以后雌激素水平增高，局部皮膚溫暖潮濕，微生態(tài)環(huán)境發(fā)生改變，更適合念珠菌生長[3]，特別是妊娠期女性由于體內雌激素迅速增加而使陰道黏膜充血、水腫、通透性增強，陰道環(huán)境糖原水平較高，同時宮頸腺體分泌明顯增加，導致陰道分泌物明顯增多，這些都有利于念珠菌生長繁殖而引起VVC。妊娠期VVC檢出率為10.0%～44.3%[4]。

有報道顯示VVC占門診陰道炎的30%[5]，有10%的患者為重復感染[6]。近年來由于性傳播疾病的逐漸增多，加之廣譜抗菌藥物的濫用，生殖器念珠菌病(包括女性外陰陰道念珠菌病和男性包皮龜頭炎)的發(fā)病率上升，并且隨著抗真菌藥物的頻繁使用，耐藥現象亦日益嚴重[7,8]，給治療帶來困難。

兩性霉素B和5-氟胞嘧啶抗真菌活性較高，但由于這兩種藥物都具有較大不良反應，包括腎毒性大和肝功能損傷等，臨床使用應謹慎，一般不作首選用藥。伏立康唑為新一代三唑類抗真菌藥，通過競爭性抑制細胞色素P450依賴的14α-脫甲基酶而阻斷細胞膜麥角固醇的生物合成，導致細胞膜的構成和功能障礙，從而抑制真菌的生長和繁殖。

本研究對93例女性患者生殖道感染念珠菌標本進行了菌種培養(yǎng)與鑒定，結果顯示：江蘇淮安及周邊地區(qū)女性患者的致病菌種主要是白念珠菌(占87.10%)，其次為光滑念珠菌(占8.60%)，其它菌種則少見。此項結果與國內外相關報道均一致[9-12]。同時本研究還對主要致病菌種進行了體外藥敏試驗，結果表明：對白念珠菌敏感率最高的藥物為兩性霉素B和5-氟胞嘧啶，其它依次為伏立康唑、氟康唑及伊曲康唑；對光滑念珠菌敏感率最高的藥物也是兩性霉素B和5-氟胞嘧啶，其它依次是伏立康唑、氟康唑，而伊曲康唑對光滑念珠菌作用較差。由于臨床上致病菌種主要是白念珠菌，因此臨床治療抗真菌藥物可優(yōu)先選用伏立康唑、氟康唑。

及時了解本地區(qū)致病菌種的分布特征及其藥敏特點，合理規(guī)范使用相關抗菌藥物，既有利于減輕患者負擔，又有利于醫(yī)療資源優(yōu)化配置。

本次研究僅收集到8株光滑念珠菌，樣本量尚少，且抗真菌藥物的種類亦偏少，其體外藥敏試驗分析還有待進一步補充。

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AnalysisofstraindistributionanddrugsensitivitytestofCandidain93femalepatientswithgenitaltractinfection

LIQianhui1,LIHe2,LINTao1,TANGChaogui1,JIANGYuzhang1,JIANGMing2.

1DepartmentofClinicalLaboratory,Huai'anFirstPeople'sHospital,NanjingMedicalUniversity,Huai'an223300,China; 2DepartmentofDermatology,Huai'anFirstPeople'sHospital,NanjingMedicalUniversity,Huai'an223300,China

LIHe,E-mail:hellomrlqh@163.com

Objective: To determine characteristics of the strain distribution and drug sensitivity test ofCandidain 93 female patients with genital tract infection.MethodsThe genital tract secretion specimens were collected from 93 female patients. TheCandidaisolates were cultured in Sabouraud dextrose agar. The types ofCandidaisolates were identified by CHRO Magar medium, germ tube test with serum and DL-96 FUNGUS System. The drug sensitivity ofCandidaisolates was detected by DL-96 FUNGUS System.ResultsOut of 91 specimens, 81 strains (87.10%) were identified asCandidaalbicans, 8 (8.60%) asCandidaglabrata, one (1.08%) asCandidadublinstrain, one (1.08%) asCandidatropicalis, one (1.08%) asCandidakruseiand one (1.08%) asCandidakefyrstrain. The drug sensitivity test ofCandidaalbicansshowed that the sensitivity rates of amphotericin B and 5-flucytosine were 100.00%, followed by voriconazole (93.83%), fluconazol (85.19%) and itraconazole (62.96%). The drug sensitivity test ofCandidaglabratashowed that the sensitivity rates of amphotericin B and 5-flucytosine were 100.00%, followed by voriconazole (87.50%), fluconazol (62.50%) and itraconazole (25.00%).ConclusionThe mostCandidaspecies in female genital tract infection isCandidaalbicans. The most sensitive drugs were amphotericin B and 5-flucytosine.

female genital tract;Candidaspecies; drug sensitivity test

1南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院檢驗科，江蘇淮安，223300 2南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院皮膚科，江蘇淮安，223300

李鶴，E-mail：hellomrlqh@163.com

(收稿：2017-08-02 修回：2017-09-25)