乙型肝炎病毒PreS1Ag抗HBc-IgM和HBV-DNA聯(lián)合監(jiān)測(cè)相關(guān)性及臨床意義

歐雙余， 葉 輝， 葉仁清

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬寧德市醫(yī)院檢驗(yàn)科， 福建 寧德 352100)

乙型肝炎病毒PreS1Ag抗HBc-IgM和HBV-DNA聯(lián)合監(jiān)測(cè)相關(guān)性及臨床意義

歐雙余， 葉 輝， 葉仁清

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬寧德市醫(yī)院檢驗(yàn)科， 福建 寧德352100)

目的為有效對(duì)乙型肝炎患者進(jìn)行檢查診斷，臨床探究抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA聯(lián)合用于疾病檢查診斷的有效性。方法選取2013年9月至2015年9月間我院門診部門經(jīng)診斷為乙型肝炎病毒的90例患者為觀察組，同時(shí)隨機(jī)選取70例入院進(jìn)行健康檢查肝功能指標(biāo)正常者為對(duì)照組，對(duì)研究對(duì)象抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA指標(biāo)進(jìn)行檢查，對(duì)所得指標(biāo)檢查結(jié)果進(jìn)行分析，探究各指標(biāo)與疾病的相關(guān)性。結(jié)果對(duì)照組PreS1Ag、HBc-IgM、HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性率較觀察組高，P<0.05；HBV-DNA觀察組不同血清分型差值比較無(wú)意義，P>0.05；PreS1Ag、HBc-IgM不同血清分離陽(yáng)性率有差異，P<0.05。結(jié)論臨床對(duì)患者乙肝病毒感染情況進(jìn)行檢查，可使用抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA聯(lián)合進(jìn)行檢查，可早期反應(yīng)患者體內(nèi)病毒活躍、復(fù)制情況。

HBV-DNA； 乙型肝炎病毒； 抗HBc-IgM； PreS1Ag； 臨床意義

乙肝是臨床常見的傳染性疾病，其傳播方式較多如母嬰、性接觸、血液、皮膚黏膜等，此病可致患者肝功能受損，如若不及時(shí)治療病情遷延會(huì)引發(fā)肝硬化甚至?xí)l(fā)展成肝癌，同時(shí)還會(huì)造成腹水、肝性腦病、出血等并發(fā)癥，給患者生活、工作等造成困擾。乙肝主要由乙肝病毒(HBV)感染所致[1]。但并非所有乙肝病毒感染者都會(huì)發(fā)展成乙型肝炎，有的僅僅只是病毒攜帶者無(wú)任何疾病癥狀，我國(guó)約8%～10%為病毒攜帶者，同時(shí)部分感染者體內(nèi)有抗體不會(huì)引發(fā)疾病，因此臨床準(zhǔn)確診斷患者是否患有乙肝疾病得到人們關(guān)注。目前臨床對(duì)HBV感染判斷，多通過(guò)對(duì)患者血清乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗體(抗-HBe)以及病毒表面抗原(HBSAg)等檢查來(lái)判斷，有學(xué)者提出以HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA聯(lián)合HBV檢查，能有效提出診斷準(zhǔn)確率[2]。本文觀察2013年9月至2015年9月間90例乙型肝炎病毒患者采用抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA聯(lián)合檢查診斷的有效性，現(xiàn)報(bào)道如下:

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2013年9月至2015年9月間我院門診部門經(jīng)診斷為乙型肝炎病毒的120例患者為觀察組，其中男性68例，女性52例，患病時(shí)間0.6～9年，平均時(shí)間(4.3±1.7)年，年齡38～67歲，平均年齡(52.1±6.4)歲，所有患者經(jīng)檢查符合《病毒性肝炎防治方案》診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]，可積極配合，同時(shí)根據(jù)觀察組患者乙肝血清標(biāo)志物檢查，可將其分為4類分別為[HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)]17例，[HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)]32例，[HBsAb(+)、HBeAb(+)]38例，[HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)]33例。采用簡(jiǎn)單隨機(jī)法隨機(jī)選取70例入院進(jìn)行健康檢查肝功能指標(biāo)正常者為對(duì)照組，男性38例，女性32例，年齡41～69歲，平均年齡(52.4±6.5)歲，兩組患者一般基線差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05，可以進(jìn)行比較，本研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2儀器與方法：本次指標(biāo)檢查所有相關(guān)儀器有D-37520型高速低溫離心機(jī)Kendro，ABBOTT AXSYM 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀以及試劑盒美國(guó)雅培公司生產(chǎn)，PCR反應(yīng)儀(美國(guó)BIO-RAD公司)，PCR反應(yīng)試劑(Takara公司)，全功能微孔板檢測(cè)酶標(biāo)儀(美國(guó)BioTek公司)，江蘇默樂生物科技有限公司生產(chǎn)0376-2010乙型肝炎病毒DNA定量檢測(cè)儀器以及試劑盒。方法：其中抗HBc-IgM、PreS1Ag指標(biāo)采用定性檢測(cè)，使用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，將所得標(biāo)本、陰性陽(yáng)性對(duì)照品加入待測(cè)孔，加入量為50μL并封板，將板置于37℃恒溫箱內(nèi)孵育30min，后將板用洗板機(jī)清洗5次后拍干，并向板內(nèi)待測(cè)孔(除空白對(duì)照孔)中加入酶結(jié)合物，加入量為50μL，待孔內(nèi)物質(zhì)充分混合均勻后，再次封板。并將其放入37℃恒溫箱內(nèi)孵育30min，用洗板機(jī)清洗5次后拍干，且與每個(gè)待測(cè)孔內(nèi)加入顯色劑A、B，加入量均為50μL，待試劑與孔內(nèi)物質(zhì)充分混合均勻后封板放入37℃恒溫箱內(nèi)孵育15min，最后在向每個(gè)孔內(nèi)加入終止液50μL，混合均勻后使用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)450nm時(shí)讀數(shù)，并將結(jié)果記錄。HBV-DNA檢查采用定量檢測(cè)，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)，取患者靜脈血，并使用離心機(jī)進(jìn)行離心，參數(shù)為1500轉(zhuǎn)/min，離心5min后，取上清液并將其轉(zhuǎn)移到滅菌離心管中，取100μL血清、DNA濃縮液混合均勻，以12000轉(zhuǎn)/min，離心10min后，移去上清液，在沉淀中加入20μLDNA提取液，待液體混合均勻后，放于100℃恒溫箱內(nèi)10min，后以12000轉(zhuǎn)/min，離心5min，取上清液并分別加入PCR反應(yīng)管中，將反應(yīng)管使用PCR反應(yīng)儀進(jìn)行檢測(cè)，使用電腦對(duì)2h擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析，將結(jié)果記錄。

1.3療效評(píng)價(jià)：觀察兩組抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA指標(biāo)值變化情況，同時(shí)對(duì)觀察組不同血清分型HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA指標(biāo)值變化情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其中HBV-DNA定量陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn):≥5.0×102copies/mL。

2 結(jié) 果

2.1兩組PreS1Ag、HBc-IgM和HBV-DNA陽(yáng)性率情況：對(duì)照組PreS1Ag、HBc-IgM、HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性率較觀察組高，P<0.05，具體見表1。

表1 兩組PreS1Ag HBc-IgM和HBV-DNA陽(yáng)性情況統(tǒng)計(jì)n(%)

2.2不同血清分型觀察組PreS1Ag、HBc-IgM和HBV-DNA陽(yáng)性率情況比較：觀察組不同血清分型HBV-DNA陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05；PreS1Ag、HBc-IgM不同血清分型陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，具體見表2。

表2 不同血清分型PreS1Ag陽(yáng)性率HBc-IgM陽(yáng)性率和HBV-DNA陽(yáng)性率n(%)

3 討 論

乙肝血清標(biāo)志物(HbsAg)檢測(cè)是現(xiàn)今乙肝疾病的常規(guī)檢測(cè)方法，其操作簡(jiǎn)單、方便快速，指標(biāo)中的一種蛋白HbeAg，其一般僅在乙肝病毒檢查陽(yáng)性患者可見，此可溶性蛋白是病毒在機(jī)體內(nèi)復(fù)制的重要指標(biāo)，其檢查陽(yáng)性可表示病毒在人體內(nèi)復(fù)制活躍[4]。但有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)部分HbeAg陰性者其PreS1Ag檢查為陽(yáng)性，我們推測(cè)這是由于HBV與基因重組的前C區(qū)發(fā)生變異，從而逃避宿主免疫反應(yīng)有關(guān)。也可能與HBsAg濃度過(guò)高引發(fā)鉤狀效應(yīng)，HBV處于潛伏期或者HBsAg分泌量不足，以及編碼HBsAg的HBV中S區(qū)發(fā)生基因變異等有關(guān)。因此臨床在使用乙肝血清標(biāo)志物檢查時(shí)HBeAg陰性,并不意味著HBV清除或復(fù)制水平減低，同時(shí)臨床大量實(shí)踐發(fā)現(xiàn)乙肝兩對(duì)半檢查反映的是患者HBV感染后的情況，其只能提示機(jī)體受到感染，不能反映乙肝的治療情況以及療效評(píng)價(jià)，且其采取ELISA檢測(cè)易受到抗體蛋白、抗原蛋白變性等因素影響，出現(xiàn)誤診、漏診情況[5]。PreS1Ag蛋白是HBV外膜蛋白的主要部分，有研究表明此蛋白主要在乙肝病毒Dane顆粒上表達(dá)，其會(huì)與肝細(xì)胞受體結(jié)合并通過(guò)受體結(jié)合，黏附到肝細(xì)胞上從而侵入肝細(xì)胞。近幾年隨著研究深入有學(xué)者發(fā)現(xiàn)PreS1Ag能有效顯示病毒與人體內(nèi)活躍性、復(fù)制情況，能反映病毒侵入肝細(xì)胞情況，且PreS1Ag陽(yáng)性比HbeAg對(duì)病毒感染、復(fù)制的敏感性高，是病毒復(fù)制的標(biāo)志物[6]。臨床通過(guò)檢查PreS1Ag對(duì)早期HBV感染診斷具有重要作用。鑒于PreS1-Ag自身結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及此蛋白在病菌復(fù)制過(guò)程中的所起作用，PreS1-Ag陽(yáng)性提示HBV侵入、患者肝功能損害加重，病情進(jìn)展和惡化，轉(zhuǎn)陰表示病情控制、病毒清除。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)乙肝病毒感染后，機(jī)體會(huì)出現(xiàn)體液免疫反應(yīng)，產(chǎn)生免疫球蛋白其中以抗HBc-IgM為主，隨后IgM抗體滴度下降、IgG效價(jià)迅速上升，此蛋白能有效反應(yīng)乙肝病毒感染情況[7]。同時(shí)檢查指標(biāo)抗HBc-IgM陽(yáng)性則表示病毒在體內(nèi)有活動(dòng)性患者有很強(qiáng)的傳染性，隨著醫(yī)學(xué)水平的進(jìn)步有學(xué)者發(fā)現(xiàn)采用熒光定量PCR法對(duì)乙肝病毒的脫氧核糖核酸(HBV-DNA)定量檢測(cè)可有效反映乙肝病毒是否具有復(fù)制性以及傳染性，其血清中的HBV-DNA高表達(dá)，表明機(jī)體出現(xiàn)肝臟炎癥壞死、轉(zhuǎn)氨酶水平升高，患者病情越嚴(yán)重。

本次我院臨床對(duì)肝功能正常者以及乙肝病毒感染者進(jìn)行抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA指標(biāo)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)對(duì)照組PreS1Ag、HBc-IgM、HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性率較觀察組高，P<0.05，結(jié)果表明抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA對(duì)HBV感染臨床診斷具有一定意義。本次研究中觀察組檢查以HBV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性最高為87.5%，而不同血清分型乙肝病毒感染者進(jìn)行抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA指標(biāo)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)HBV-DNA觀察組不同血清分型差值比較無(wú)意義，P>0.05；PreS1Ag、HBc-IgM不同血清分離陽(yáng)性率有差異，P<0.05，結(jié)果提示HBV-DNA檢查是HBV臨床診斷中靈敏度最高的標(biāo)志物。

綜上所述，臨床對(duì)患者乙肝病毒感染情況進(jìn)行檢查，可使用抗HBc-IgM、PreS1Ag、HBV-DNA聯(lián)合進(jìn)行檢查，可早期反應(yīng)患者體內(nèi)病毒活躍、復(fù)制情況。

[1] 劉勇波,陳燕如.乙型肝炎病毒PreS1Ag、抗HBc-IgM和HBV-DNA聯(lián)合監(jiān)測(cè)相關(guān)性分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(12):1722～1724.

[2] 張春澤,田志新,石栓柱,等.抗HBcIgM陽(yáng)性慢性乙型肝炎臨床特性、病毒學(xué)和血清學(xué)研究[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2007,21(2):138～140.

[3] 朱國(guó)獻(xiàn),駱欣,王琛,等.急性乙型肝炎臨床特征和病毒標(biāo)志物動(dòng)態(tài)變化分析[J].國(guó)際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志,2010,37(3):169～172.

[4] 易偉蓮,崔國(guó)輝,歐超偉,等.乙型肝炎患者PreS1Ag、HBV-DNA以及肝功能聯(lián)合檢測(cè)分析[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010,07(27):71～72.

[5] 鄧芝云,董菊子,朱發(fā)仁,等.乙型肝炎血清前S1抗原與HBV-DNA和HBeAg相關(guān)性分析[J].臨床軍醫(yī)雜志,2011,39(6):1193～1194.

[6] 嚴(yán)明總,符生苗,鄧立群,等.387例慢性乙型肝炎血清標(biāo)志物模式與HBV-DNA檢測(cè)的聯(lián)合分析[J].海南醫(yī)學(xué),2010,21(22):21～22.

[7] 張小丹,任姍,于海濱,等.慢性乙型肝炎病毒感染者前S1抗原和抗體檢測(cè)的臨床意義[J].中華肝臟病雜志,2011,19(9):674～677.

1006-6233(2017)12-2019-03

福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目編號(hào)，(編號(hào)2016J0162)

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.12.024