P16和Ki-67在宮頸上皮內瘤變分級中的臨床應用

馬 艷，丁香平

(江西省婦幼保健院腫瘤科陰道鏡室，南昌 330006)

P16和Ki-67在宮頸上皮內瘤變分級中的臨床應用

馬 艷，丁香平

(江西省婦幼保健院腫瘤科陰道鏡室，南昌 330006)

目的檢測不同級別的宮頸上皮內瘤變(CIN)中P16和Ki-67的表達水平，探討P16和Ki-67對輔助CIN分級的臨床意義。方法選擇不同級別的CIN患者513例(其中CINⅠ263例，CINⅡ131例，CINⅢ119例)，應用免疫組織化學法對其宮頸上皮組織進行P16和Ki-67檢測，分析不同級別CIN所對應的P16和Ki-67表達強度。結果P16表達強度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐漸增高，P16表達強度與CIN分級呈正相關(r=0.621，P<0.01)；Ki-67表達強度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐漸增高，Ki-67表達強度與CIN分級亦呈正相關(r=0.702，P<0.01)；P16和Ki-67兩種方法的表達呈一致性(r=0.834，P<0.01)。結論P16和Ki-67對CIN分級提供十分有用的參考價值，兩者聯合應用有助于病理醫生對CIN診斷的一致性。

P16； Ki-67； 免疫組織化學； 宮頸上皮內瘤變； 分級

宮頸上皮內瘤變(CIN)診斷和分級以病理診斷為金標準，而一份良好的組織學報告取決于臨床病史、病理組織的質量和病理學醫師的專業技能和經驗。相關報道[1-2]表明對于高級別CIN(HSIL)，在不同的病理學醫師之間診斷的可重復性較好，而在診斷低級別CIN(LSIL)時可重復性較差。P16蛋白是由正常細胞產生的蛋白質，可以抑制細胞周期蛋白D的合成，通過免疫組織化學染色檢測可了解其失活狀態；P16蛋白是輔助診斷CIN并鑒別LSIL和HSIL的一個標記物[3]。Ki-67增殖細胞核抗原反映細胞增殖活性，通過免疫組織化學染色檢測標記細胞的抗體水平，可反映正常和病變細胞的增殖活性。有研究[4]認為Ki-67陽性細胞在CIN各級別的差異有顯著性，是有利于CIN分級的標記物。本研究通過檢測不同級別CIN中P16和Ki-67的表達水平，探討P16和Ki-67對輔助CIN分級的臨床意義。

1 對象和方法

1.1 研究對象

選擇2016年1—12月在江西省婦幼保健院門診就診的513例患者，通過了解病史和病理診斷為CIN，其中CINⅠ 263例，CINⅡ 131例，CINⅢ 119例)。宮頸上皮組織標本采用蘇木素-伊紅(HE)染色，由3位高年資病理醫師檢閱切片，選取2位以上醫師一致診斷意見。

1.2 檢測方法及判定標準

試劑：鼠抗P16/MTS1(6H12)抗體和小鼠抗人Ki-67單克隆抗體。組織切片：甲醛溶液固定石蠟切片。采用德國Leica公司生產的BOND-MAX型全自動免疫組織化學染色機檢測。

P16結果判定：陽性細胞比例<5%(-)陰性，陽性細胞比例5%～25%(+)弱陽性，陽性細胞比例26%～75%()陽性，陽性細胞比例>75%()強陽性。Ki-67結果判定：<5%細胞著色(-)陰性，5%～25%細胞著色(+)弱陽性，26%～50%細胞著色()陽性，>50%細胞著色()強陽性。

1.3 統計學方法

應用SPSS19.0建立數據庫，采用非參數檢驗中Spearman檢驗進行相關性分析。

2 結果

2.1 P16在各級別CIN的表達強度

P16表達強度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐級增高，Spearman檢驗，相關系數r=0.621，P<0.01，提示P16表達強度與CIN級別呈正相關。見表1。

表1 P16在各級別CIN的表達強度 例

2.2 Ki-67在各級別CIN的表達強度

Ki-67表達強度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐級增高，Spearman檢驗，相關系數r=0.702，P<0.01，提示Ki-67表達強度與CIN級別呈正相關。見表2。

表2 Ki-67在各級別CIN的表達強度 例

2.3 P16和Ki-67在各級別CIN的表達強度相關性比較

P16和Ki-67兩種檢測方法在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ表達強度呈一致性，相關系數r=0.843，P<0.01。

3 討論

P16蛋白能調節細胞周期蛋白E的合成，而細胞周期蛋白E能激活生長周期中DNA的合成，從而抑制細胞周期蛋白D的產生。HPV-E7基因產物可結合視網膜細胞瘤的基因產物和蛋白，并抑制后者的磷酸化過程，因此，P16的過度表達間接顯示了E7蛋白的出現，表明致癌性的人類乳頭瘤病毒(HPV)整合進入了宿主細胞。P16蛋白可通過免疫組織化學染色技術檢測，且應用P16免疫組織化學技術能鑒別LSIL和HSIL，并有較高的敏感性和特異性，P16在預測LSIL的結局也有一定價值[3]。Volgareva等[5]研究顯示P16的表達在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中的陽性率逐漸增加，推薦P16用于子宮頸癌的早期診斷的輔助檢查。Finegan等[6]研究認為P16常在宮頸鱗狀細胞癌組織中表達，在良性病變和低級別病變時陰性，P16可能是從低級別到高級別病變轉化的標志物。O’Neill等[7]認為P16有助于診斷局灶性高級別CIN病變。也有研究[8]表明P16在宮頸病變組織中的表達與組織分化程度呈顯著正相關關系，是宮頸病理和細胞學診斷的良好補充。本研究結果顯示，P16表達強度與CIN級別呈正相關，支持上述結論，同時結果(表2)也顯示有83.65%(220/263)CINⅠ患者P16呈陰性或弱陽性，39.69%(52/131)CINⅡ患者P16呈陰性或弱陽性，11.76%(14/119)CINⅢ患者P16呈弱陽性，提示P16并不能獨立作為CIN級別高低的鑒別。

Ki-67是一種增殖細胞相關的核抗原，反映細胞增殖活性，與很多惡性腫瘤的發展、轉移和預后有關，在宮頸病變中，Ki-67的表達良性病變明顯低于惡性病變，Ki-67有助于CIN診斷、分級和評估預后[9-10]。Korolenkova等[4]認為Ki-67表達指數與CIN相關，并可作為CIN診斷、分級和評估病程的標記物。Calil等[11]認為P16和Ki-67的表達與宮頸病變是否為高危型HPV感染和宮頸高級別病變密切相關。本研究結果顯示Ki-67表達強度在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中逐級增高，表達強度與CIN級別呈正相關，提示Ki-67表達與CIN病變程度呈正相關。張燕等[12]研究認為P16和Ki-67在宮頸組織中的表達一致性具有顯著的正相關性，P16和Ki-67對宮頸良性改變的甄別、CIN的分級判定及宮頸早期浸潤癌的診斷具有重要價值。謝小麗[13]研究認為P16聯合Ki-67可以用于鑒別宮頸良性病變和CIN及CIN病變程度的判定。本研究結果顯示P16和Ki-67兩種檢測方法在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ表達強度呈一致性，提示P16和Ki-67兩種檢測方法聯合應用對CIN分級判斷有重要參考價值。

P16和Ki-67能否對CIN進行預后判定目前尚有爭議。del Pino等[14]對138例P16陽性的CINⅠ患者進行平均29個月的追蹤隨訪，僅10.1%進展為CINⅡ或CINⅢ，47.6%轉陰，42%維持CINⅠ，55.8%患者P16表達繼續保持陽性，提示CINⅠ即使P16表達陽性，也很少進展高級別CIN。Zhong等[15]研究認為P16和Ki-67表達有助于提高CIN病變的診斷準確性，但不能對LSIL的預后進行預測。王榮敏等[16]對P16與CINⅠ病變進展進行Meta分析，認為P16是CINⅠ病變進展的預測因子，對CINⅠ的分流有一定價值，可用于篩查出高危人群重點隨訪。

綜上所述，P16和Ki-67對CIN分級提供十分有用的參考價值，兩者結合應用有助于CIN診斷和分級，兩種方法聯合應用可能對CIN預后判定有幫助，但仍然需要進一步相關研究。

[1] Kato I,Santamaria M,De Ruiz P A,et al.Inter-observer variation in cytological and histological diagnoses of cervical neoplasia and its epidemiologic implication[J].J Clin Epidemiol，1995，48(9)：1167-1174.

[2] Stoler M H,Schiffman M.Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance-Low-grade Squamous Intraepithelial Lesion Triage Study(ALTS) group.Interobserver reproducibility of cervical cytologic and histologic interpretations:realistic estimates from the ASCUS-LSIL Triage Study[J].JAMA,2001,285(11):1500-1505.

[3] 佚名.p16在宮頸病變臨床診治中的作用[J].國際檢驗醫學雜志，2014(19)：2601.

[4] Korolenkova L I,Stepanova E V,Ermilova V D,et al.Ki-67 expression,thymidine phosphorylase and PTEN in intraepithelial cervical carcinoma[J].Vopr Onkol，2011，57(2)：199-203.

[5] Volgareva G M,Zavalishina L E,Andreeva Iu Iu,et al.Cell protein p16INK4a hyperexpression in epithelial malignancies induced by human papillomaviruses[J].Arkh Patol，2008，70(5):57-61.

[6] Finegan M M,Han A C,Edelson M I,et al.p16 expression in squamous lesions of the female genital tract[J].J Mol Histol，2004，35(2):111-114.

[7] O’Neill C J,McCluggage W G.p16 expression in the female genital tract and its value in diagnosis[J].Adv Anat Pathol，2006，13(1):8-15.

[8] 朱梅娟.Ki67、P16和HPV在宮頸病變組織中的表達及臨床意義[J].中國婦幼保健，2013，28(19)：3095-3097.

[9] 李艷東，鄭建云，劉冰.E-cadherin、p16及Ki67在宮頸上皮內瘤變診斷中的應用[J].山西醫科大學學報，2011，42(11)：939-940.

[10] 韓揚，王軍臣，符雪蓮，等.P16、Ki67和MCM5在宮頸上皮內瘤變中的表達及意義[J].同濟大學學報(醫學版)，2011，32(6)：29-33.

[11] Calil L N,Edelweiss M I,Meurer L,et al.p16 INK4a and Ki67 expression in normal,dysplastic and neoplastic uterine cervical epithelium and human papillomavirus(HPV) infection[J].Pathol Res Pract，2014，210(8):482-487.

[12] 張燕，王一，王建華，等.p16、Ki-67在440例宮頸病變中的表達及其病理診斷價值[J].診斷病理學雜志，2013，20(3)：171-175.

[13] 謝小麗.p16、Ki-67在宮頸良性病變與CIN中的表達差異及意義[J].中外醫療，2014(12)：171-172.

[14] del Pino M,Garcia S,Fusté V,et al.Value of p16(INK4a) as a marker of progression/regression in cervical intraepithelial neoplasia grade 1[J].Am J Obstet Gynecol,2009,201(5):488.e1-488.e7.

[15] Zhong P,Li J,Gu Y,et al.P16 and Ki-67 expression improves the diagnostic accuracy of cervical lesions but not predict persistent high risk human papillomavirus infection with CIN1[J].Int J Clin Exp Pathol，2015，8(3):2979-2986.

[16] 王榮敏，尤志學.p16蛋白表達與 CINⅠ病變進展關系的 Meta 分析[J].現代婦產科進展，2015，24(8)：609-610.

ClinicalApplicationofP16andKi-67inGradingofCervicalIntraepithelialNeoplasia

MAYan,DINGXiang-ping

(VaginoscopyRoom,DepartmentofOncology,JiangxiMaternalandChildHealthCareHospital,Nanchang330006,China)

ObjectiveTo detect the expression of P16 and Ki-67 in different grades of cervical intraepithelial neoplasia(CIN),and to investigate their clinical significance in CIN grading.MethodsThe expression of P16 and Ki-67 in cervical epithelium was measured by immunohistochemistry in 513 patients with different grades of CIN(263 cases of CINⅠ,131 cases of CINⅡ,119 cases of CINⅢ).ResultsThe levels of both P16 and Ki-67 expression were positively with the grade of CIN(r=0.621 andr=0.702,respectively;P<0.01).There was a consistency in the expression of P16 and Ki-67(r=0.834,P<0.01).ConclusionThe expression of P16 and Ki-67 provides a reference for CIN classification.The combined detection of P16 and Ki-67 expression is helpful for the consistency of CIN diagnosis.

P16; Ki-67; immunohistochemistry; cervical intraepithelial neoplasia; grading

2017-06-11

馬艷(1982—)，女，學士，主治醫師，主要從事婦幼保健學的研究。

R737.33

A

1009-8194(2017)10-0041-03

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.10.016

鐘榮梅)