鼻咽癌綜合治療后復(fù)發(fā)或放射性顱底骨壞死患者治療前后EB病毒DNA、病毒衣殼蛋白抗原-IgA和早期抗原-IgA的表達(dá)及意義

黃燕鳳, 梁 盛, 陸雪冬

(1. 廣西壯族自治區(qū)南寧市橫縣中醫(yī)醫(yī)院, 廣西 橫縣, 530300; 2. 廣西壯族自治區(qū)橫縣人民醫(yī)院, 廣西 橫縣, 530300)

鼻咽癌綜合治療后復(fù)發(fā)或放射性顱底骨壞死患者治療前后EB病毒DNA、病毒衣殼蛋白抗原-IgA和早期抗原-IgA的表達(dá)及意義

黃燕鳳1, 梁 盛2, 陸雪冬1

(1. 廣西壯族自治區(qū)南寧市橫縣中醫(yī)醫(yī)院, 廣西 橫縣, 530300; 2. 廣西壯族自治區(qū)橫縣人民醫(yī)院, 廣西 橫縣, 530300)

目的探討鼻咽癌綜合治療后復(fù)發(fā)患者治療前后EB病毒-DNA(EBV-DNA)、病毒衣殼蛋白抗原-lgA(VCA-IgA)和早期抗原-IgA(EA-IgA)的表達(dá)及意義。方法將150例鼻咽癌復(fù)發(fā)患者納入復(fù)發(fā)組，按照是否應(yīng)用鼻內(nèi)鏡手術(shù)分為手術(shù)組93例和放化療組57例。選取36例放射性顱底骨壞死患者為對(duì)照組(無復(fù)發(fā))。比較各組患者治療前后血VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNA陽性率。結(jié)果治療前，復(fù)發(fā)組的血漿EBV-DNA陽性率顯著高于對(duì)照組(P<0.01); 2組的VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。治療前，不同復(fù)發(fā)類型患者其血漿EBV-DNA、VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。臨床分期越高，治療前EBV-DNA陽性率越高(P<0.01); 不同臨床分期患者治療前其血漿VCA-IgA及EA-IgA陽性率組間比較無顯著差異(P>0.05)。治療前，放化療組與手術(shù)組的血漿EBV-DNA、VCA-IgA、EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。治療結(jié)束時(shí)，手術(shù)組的血漿EBV-DNA轉(zhuǎn)陰率為91.30%, 顯著高于放化療組的68.75%(P<0.05)。放化療組患者的血漿EBV-DNA陽性率顯著高于手術(shù)組(P<0.01), 但2組VCA-IgA及EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。結(jié)論鼻內(nèi)鏡手術(shù)治療可明顯降低鼻咽癌患者的EBV水平，檢測(cè)EBV-DNA水平對(duì)于判斷鼻咽癌是否復(fù)發(fā)及臨床分期具有重要意義。

鼻咽癌; EB病毒-DNA; 病毒衣殼蛋白抗原-IgA; 早期抗原-IgA; 鼻內(nèi)鏡

相關(guān)研究[1-2]顯示，由于鼻咽癌大部分為低分化鱗癌，對(duì)放射線敏感，因此鼻咽癌首選放射治療。亦有相關(guān)資料[3]證實(shí)，鼻咽癌局部復(fù)發(fā)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移嚴(yán)重影響放療效果。目前，應(yīng)用鼻內(nèi)鏡手術(shù)治療鼻咽癌殘留和復(fù)發(fā)病灶的療效良好。監(jiān)測(cè)EBV-DNA水平可提示復(fù)發(fā)鼻咽癌患者的臨床療效[4]。本研究探討復(fù)發(fā)鼻咽癌患者治療前后血漿EBV-DNA、VCA-IgA及EA-IgA的表達(dá)情況及臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2013年12月—2016年12月收治的150例鼻咽癌復(fù)發(fā)患者作為復(fù)發(fā)組，包括男115例，女35例，年齡23～71歲，平均(48.55±14.23)歲，中位年齡49歲; 按照是否應(yīng)用鼻內(nèi)鏡手術(shù)，將復(fù)發(fā)組分為手術(shù)組93例和放化療組57例。2組患者除臨床分期外的一般資料比較均無顯著差異(P>0.05)。見表1。選取同期年齡及性別等相匹配的36例放射性顱底骨壞死患者作為對(duì)照組(無復(fù)發(fā))，其中男30例，女6例，年齡22～70歲，平均(50.13±13.89)歲，中位年齡55歲。本研究患者均已簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn): ① 復(fù)發(fā)性鼻咽癌，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移且未經(jīng)治療; ② 卡氏評(píng)分≥70分; ③ 有可評(píng)價(jià)療效的復(fù)發(fā)病灶。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 卡氏評(píng)分<70分; ②首程末次放療結(jié)束至納入研究的時(shí)間不超過3個(gè)月者; ③ 不接受對(duì)治療后復(fù)發(fā)病灶進(jìn)行再治療者。

1.2 實(shí)施方法

表1 2組的一般資料比較[n(%)]

與手術(shù)組比較, *P<0.05。

1.2.1 鼻內(nèi)鏡手術(shù): 全麻后，用腎上腺素棉片收縮鼻腔黏膜3次，使用0度鼻內(nèi)鏡常規(guī)切除鼻中隔后1/3，沿腫瘤周邊正常黏膜切開，切除深度達(dá)顱底骨質(zhì)，依據(jù)腫瘤的位置及侵犯情況做相應(yīng)范圍切除。

1.2.2 放療: 采用調(diào)強(qiáng)放療，MRI顯示腫瘤影像邊界，勾畫腫瘤靶區(qū)2.0～2.2 Gy/次，腫瘤靶區(qū)總劑量為50～60 Gy, 計(jì)劃靶區(qū)1.8～2.0 Gy/次，計(jì)劃靶區(qū)總劑量為45～60 Gy, 5 d/周。

1.2.3 化療: TP(紫杉醇+順鉑)方案: 第1天，靜脈滴注多西紫杉醇75 mg/m2，持續(xù)60 min; 第1～3天，靜脈滴注順鉑30 ms/m2, 每21 d為1周期，持續(xù)2～4周期。

1.3 標(biāo)本采集

治療前及治療后，分別取所有研究對(duì)象的肘靜脈血2.0 mL, 分別置于1個(gè)抗凝管和1個(gè)促凝管中，離心半徑10 cm, 3 000 r/min離心5 min, 分離抗凝管中的上層血漿，用于提取DNA，分離促凝管中的血清，冰箱保存，待測(cè)。

1.4 主要儀器及試劑盒

SM600全自動(dòng)酶標(biāo)儀(購(gòu)自上海永創(chuàng)醫(yī)療器械有限公司)和AM5000型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)AmCell公司)。CUSABIO ELISA試劑盒、熒光定量PCR試劑盒(由上海碩盟生物科技有限公司提供)。

1.5 檢測(cè)方法

嚴(yán)格按照說明書操作。VCA-IgA和EA-IgA采用ELISA法測(cè)定，采用酶標(biāo)儀定性檢測(cè)，得吸光度值(A值)。判定為陽性: VCA-IgA比值>1.0, EA-IgA比值>1.1。采用熒光定量PCR測(cè)定EBV-DNA水平，目的基因來自EB病毒的BamHI-W片段。判定為陽性: 擴(kuò)增結(jié)果>0 copy/mL。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)(頻率)表示，采用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法計(jì)算兩組的構(gòu)成比的差異程度。采用趨勢(shì)卡方檢驗(yàn)分析率的變化趨勢(shì)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 復(fù)發(fā)和無復(fù)發(fā)患者治療前各項(xiàng)指標(biāo)的陽性率比較

治療前，復(fù)發(fā)組的血漿EBV-DNA陽性率為51.33%, 顯著高于對(duì)照組(P<0.01); 2組的血清VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2 復(fù)發(fā)組和對(duì)照組治療前各項(xiàng)指標(biāo)比較[n(%)]

與對(duì)照組比較, *P<0.01。

2.2 不同復(fù)發(fā)類型治療前各項(xiàng)指標(biāo)的陽性率比較

治療前，不同復(fù)發(fā)類型患者其血漿EBV-DNA、血清VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05), 見表3。

表3 不同復(fù)發(fā)類型治療前各項(xiàng)指標(biāo)比較[n(%)]

2.3 不同臨床分期的復(fù)發(fā)組患者治療前的各項(xiàng)指標(biāo)比較

治療前血漿EBV-DNA的陽性率由高至低排序?yàn)? Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期，即臨床分期越高，治療前EBV-DNA陽性率越高(P<0.01); 不同臨床分期患者治療前其血清VCA-IgA及EA-IgA陽性率組間比較無顯著差異(P>0.05), 見表4。

表4 不同臨床分期的復(fù)發(fā)組患者治療前的各項(xiàng)指標(biāo)比較[n(%)]

與Ⅰ期比較, **P<0.01; 與Ⅱ期比較, ##P<0.01; 與Ⅲ期比較, △△P<0.01。

2.4 放化療組與手術(shù)組治療前后各項(xiàng)指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化

治療前，放化療組與手術(shù)組的血漿EBV-DNA、VCA-IgA、EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05), 見表5。手術(shù)組患者的術(shù)后血漿EBV-DNA轉(zhuǎn)陰率為91.30%(42/46), 顯著高于放化療組患者放化療后的68.75%(22/32) (P<0.05)。治療結(jié)束時(shí)，放化療組患者的血漿EBV-DNA陽性率顯著高于手術(shù)組(P<0.01), 但2組VCA-IgA及EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05), 見表6。

表6 不同處理方法治療后各項(xiàng)指標(biāo)的陽性率比較[n(%)]

與手術(shù)組比較, **P<0.01。

3 討 論

相關(guān)研究[5-6]表明，鼻咽癌大部分為低分化鱗癌，并且其發(fā)生、發(fā)展與EB病毒感染有關(guān)。目前, EBV抗原主要包括VCA和EA。亦有相關(guān)研究[7]證實(shí)，持續(xù)監(jiān)測(cè)VCA-IgA對(duì)于診斷早期鼻咽癌具有重要意義。在鼻咽癌中, EA-IgA具有較高的特異性，是機(jī)體EBV復(fù)制的標(biāo)志之一[8-9]。本研究中，復(fù)發(fā)組的血漿EBV-DNA陽性率為51.33%, 而鼻咽癌無復(fù)發(fā)患者中未見檢出EBV-DNA。本研究結(jié)果表明，鼻咽癌治療后無復(fù)發(fā)的患者VCA-IgA和EA-IgA陽性率分別為55.56%和30.56%, 提示不能僅通過檢測(cè)VCA-IgA和EA-IgA判斷患者有無復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[10]。

本研究結(jié)果表明，臨床分期越高，治療前EBV-DNA陽性率越高，提示EBV-DNA水平可能與鼻咽癌患者臨床分期有關(guān)，與國(guó)外相關(guān)研究結(jié)果一致[11]。亦有研究[12]顯示，頸部鼻咽癌復(fù)發(fā)灶的腫瘤負(fù)荷大于局部鼻咽癌復(fù)發(fā)灶，使其EBV-DNA載量水平較高。而目前局部和頸部均復(fù)發(fā)的鼻咽癌發(fā)生率較低。本研究結(jié)果顯示，治療前，不同復(fù)發(fā)類型患者其血漿EBV-DNA、VCA-IgA和EA-IgA陽性率組間比較均無顯著差異(P>0.05)。

目前，鼻咽癌復(fù)發(fā)患者通常進(jìn)行以手術(shù)為主的綜合治療。手術(shù)切除腫瘤可迅速降低機(jī)體EBV-DNA水平，可能是由于腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生量減少，而血液循環(huán)清除率增高，使血漿中EBV水平降低。治療前復(fù)發(fā)性鼻咽癌患者EBV-DNA水平越高，其預(yù)后越差。EBV-DNA的清除率與預(yù)后密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，治療前，放化療組與手術(shù)組的血漿EBV-DNA陽性率組間比較均無顯著差異。手術(shù)組患者的術(shù)后血漿EBV-DNA轉(zhuǎn)陰率為91.30%(42/46), 顯著高于放化療組患者放化療后的68.75%(22/32) (P<0.05)。治療結(jié)束時(shí)，放化療組患者的血漿EBV-DNA陽性率顯著高于手術(shù)組(P<0.01)。

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Expressionofepstein-barrvirusDNA,viralcapsidantigen-lgAandearlyantigen-IgAinpatientswithrecurrenceorradiationnecrosisofskullbaseaftercomprehensivetreatmentofnasopharyngealcarcinomaanditsclinicalsignificance

HUANGYanfeng1,LIANGSheng2,LUXuedong1

(1.HengxianHospitalofTraditionalChineseMedicineinNanningofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Hengxian,Guangxi, 530300; 2.HengxianPeople′sHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Hengxian,Guangxi, 530300)

ObjectiveTo investigate the expression of epstein-barr virus DNA, viral capsid antigen-lgA and early antigen-IgA in patients with recurrence or radiation necrosis of skull base after comprehensive treatment of nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance.MethodsA total of 150 patients with recurrent nasopharyngeal carcinoma (NPC) treated in our hospital were divided into operation group (n=93) and chemoradiotherapy group (n=57). At the same time, 36 patients with skull base necrosis were selected as control group (without recurrence). The positive rates of VCA-IgA, EA-IgA and EBV-DNA in each group before and after treatment were compared.ResultsBefore treatment, the positive rate of plasma EBV-DNA of recurrence group was significantly higher than that of the control group(P<0.01). The positive rate of VCA-IgA and EA-IgA between two groups showed no statistically significant difference (P>0.05). Before treatment, there was no statistical significant difference in the positive rate of plasma EBV-DNA, VCA-IgA and EA-IgA among different groups (P>0.05). The higher clinical stage was, and the higher positive rate of EBV-DNA was before treatment (P<0.01). There was no significant difference in the positive rate of plasma VCA-IgA and EA-IgA among the patients with different clinical stages (P>0.05). After treatment, the negative rate of EBV-DNA was 91.30% in the operation group, which was significantly higher than 68.75% in the chemoradiotherapy group. The positive rate of plasma EBV-DNA in chemotherapy group was significantly higher than that in the surgery group (P<0.01), but the positive rate of VCA-IgA and EA-IgA between groups showed no significant difference (P>0.05).ConclusionEndoscopic sinus surgery can significantly reduce the level of EBV in NPC patients, and the detection of EBV-DNA is of great significance in the diagnosis of recurrence and clinical staging of NPC.

nasopharyngeal carcinoma; epstein-barr virus DNA; viral capsid antigen-lgA; early antigen-IgA; nasal endoscope

2017-07-18

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳基金項(xiàng)目(Z2011236)

R 739.6

A

1672-2353(2017)23-064-04

10.7619/jcmp.201723019