硝酸酯后處理對心臟缺血再灌注損傷心肌保護的效果分析

朱夢霞　王芳　楊麒玉　黃靚

[摘要]目的：探討硝酸酯后處理在心臟缺血再灌注損傷中的應用價值及對心肌的保護效果。方法選取30只Wistar大鼠，行麻醉處理后，連接并準確對II導聯心電圖記錄，大鼠I/R模型應用改良Pferfer MA推管法予以制備。隨機將動物模型分為3組，各10只。即I/R組、IPostC組、PI-PostC組。結果：IPostC組實驗大鼠和PI-PostC組實驗大鼠心梗面積、心肌細胞凋死指數、心肌缺血面積、血cTnI水平相較I/P組，均呈顯著縮小或降低顯示（P<0.01）。PI-Postc組大鼠相較IPostC組，心肌缺血面積顯著縮小（P<0.01），但心肌細胞凋亡指數、血cTnI水平、心梗面積無差異（P>0.05）。結論：缺血后處理、硝酸酯后處理，均可發揮保護心肌缺血再灌注損傷作用，且可使心肌缺血面積明顯縮小，其中IPostC縮小幅度更為顯著。

[關鍵詞]硝酸酯后處理；心臟缺血；再灌注損傷；心肌保護

研究表示，在心梗發生后，行積極的再灌注處理可使心肌壞死面積明顯減少，但此項操作具一定損傷性，常造成心肌細胞壞死和凋亡程度加重。以往動物實驗表明，采用缺血后處理（IPostC）可促梗死面積縮小，最大程度減輕缺血再灌注（I/R）損傷。但IPostC因具有創性，故應用受限，而采用藥物后處理（PI-PostC）可將相關信號通路直接激活，或對自身內源性保護物質進行模擬，來發揮保護心肌的作用，明顯降低了手術損傷風險。本次研究就硝酸酯后處理價值展開探討，現回顧結果如下。

1材料與方法

1.1實驗材料

選取30只Wistar大鼠，行麻醉處理后，連接并準確對II導聯心電圖記錄，大鼠I/R模型應用改良PferferMA推管法予以制備。隨機將動物模型分為3組，各10只。

（1）I/R組：在對左前降支行結扎處理40min后，將其完全開放，行180min再灌注操作；

（2）IPostC組：在對左前降支行結扎處理40min后，于開始再灌注缺血前，行三個連續的呈循環狀態下30s/30s I/R后處理操作，后將左前降支完全開放，并行180min的再灌注處理；

（3）PI-PostC組：對左前降支行結扎處理40min后，于開始再灌注前，經左頸總動脈，將5mg/kg的硝酸異山梨醇注入，5min后，左前降支再灌注180min，將5mg/kg硝酸異山梨醇持續注入20min。

1.2方法

（1）測定心梗面積：采用雙染法進行測定，即氯化三苯四氮唑（TTC）與Evans blue。經頸動脈，在行再灌注處理3h后，予以取血，后取2%濃度的Evans blue快速經頸靜脈進行推注，將心臟迅速摘取，自心底向心尖，將左心室垂直心臟縱軸方向切為6片，每片最度在2mm左右。于1%TTC溶液中放置，調整水浴溫度為37℃，行15min的避光孵育，取出標本后，采用10%甲酸溶液行1h固定，于自然光下進行拍照。正確記錄染色結果，即梗死心肌組織經觀察表現為白色，正常心肌組織為藍色，缺血心肌組織為磚紅色。各區域面積用圖像分析軟件進行測定，得出總面積。其中左心室面積為藍色、紅色、白色面積之和；梗死面積為白色區域面積；缺血區面積為紅色、白色面積之和。

（2）測定心肌肌鈣蛋白（eTnI）：完成再灌注后，自實驗大鼠右頸動脈分別采血1ml，行15min的離心操作，留取上清，保存于-80℃冰箱中，應用酶聯免疫吸附法對eTnI檢測。

（3）測定心肌細胞凋亡：心肌石蠟標本常規制備，應用TUNEL法原位檢測心肌組織切片中表現出的細胞凋亡情況。光鏡下，細胞核呈棕黃色或棕褐色顆粒，與凋亡細胞形態學特征符合，即可按凋亡細胞判定。自每張切片出現凋亡細胞的區域，取高倍視野10個，對平均每100個細胞中含有的凋亡細胞數進行計算，調亡指數（AD采用百分數（%）表示。

1.3統計學分析

涉及數據均輸入spss13.0，組間計量資料采用（x+s）表示，行t檢驗，P<0.05具統計學差異。

2結果

IPostC組實驗大鼠和PI-PostC組實驗大鼠心梗面積、心肌細胞凋死指數、心肌缺血面積、血cTnI水平相較I/P組，均呈顯著縮小或降低顯示（P<0.01）。PI-PostC組大鼠相較IPostC組，心肌缺血面積顯著縮小（P<0.05），但心肌細胞凋亡指數、血cTnI水平、心梗面積無差異（P>0.05）。見表1。

3討論

多項動物實驗表明，再灌注時取緩激肽、腺苷等應用，可經不同機制，促再灌注損傷改善。本次研究中，相較I/R組，PI-PostC組、IPostC組大鼠cTnI水平、缺血及梗死面積均顯著降低或減小顯示（P<0.01）。表明缺血后處理和采用硝酸酯缺血后處理均可使再灌注損傷減輕，心梗面積縮小。而PI-Postc組相較IPostC組，雖心梗面積無明顯差異，但缺血面積呈更小顯示，表明在保護缺血再灌注心肌損傷方面，酸硝酯后處理同IPostC效果相同，同時可使缺血面積有更大幅度的縮小。本次結果還顯示，在細胞凋亡指數方面，PI-PostC組與IPost組均較I/R組低，表明兩種后處理方式均可使心肌缺血細胞凋亡程度減輕，促再灌注損傷改善。

綜上，缺血后處理、硝酸酯后處理，均可發揮保護心肌缺血再灌注損傷作用，且可使心肌缺血面積明顯縮小，其中IPostC縮小幅度更為顯著。

（通訊作者：黃靚）