蜂膠膠囊增強(qiáng)免疫功能的研究

于榮賢　王祖忠　劉兵　余玉芳　張勇

[摘要]目的：探討蜂膠膠囊對(duì)小鼠免疫功能的影響。方法：分別以175、350、700mg/kgBW劑量的蜂膠給小鼠連續(xù)灌胃30d后，對(duì)增強(qiáng)免疫能力的功能評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：蜂膠膠囊能夠明顯提高小鼠細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能以及小鼠單核一巨噬細(xì)胞功能。結(jié)論：蜂膠膠囊具有增強(qiáng)免疫力的功能。

[關(guān)鍵詞]蜂膠；保健食品；免疫功能

蜂膠，工蜂采集的植物樹脂與其上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成的具有粘性的固體膠狀物。近年來(lái)，對(duì)蜂膠的有效成分和生物學(xué)功能的研究取得了很大的進(jìn)展，人們已從蜂膠中分離鑒定出數(shù)百種活性成分，主要功效成分為黃酮類化合物。根據(jù)中國(guó)藥典2015版第一部的介紹，蜂膠主要用于體虛早衰，高脂血癥，外治皮膚皸裂，燒燙傷等。蜂膠作為一種多功能物質(zhì)，已被開發(fā)成多種保健食品。其中代表性的蜂膠膠囊的開發(fā)為蜂膠在功能保健食品中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)蜂膠膠囊的增強(qiáng)免疫力功能學(xué)的研究還不是很多。

本文對(duì)蜂膠膠囊進(jìn)行研究，探討其增強(qiáng)免疫力的功能性。依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版），將蜂膠膠囊設(shè)低、中、高3個(gè)劑量組，分別相當(dāng)于人實(shí)際用量的5、10和20倍，連續(xù)30天經(jīng)口給予小鼠蜂膠膠囊，研究蜂膠膠囊對(duì)小鼠體重、免疫能力的作用，其中免疫力能力包括其對(duì)綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）、免疫器官功能的作用、血清溶血素水平、單核一巨噬細(xì)胞吞噬廓清、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞功能等的影響，并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果分析蜂膠膠囊對(duì)機(jī)體免疫功能的影響，為蜂膠制品在功能保健食品中的應(yīng)用推廣提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料與試劑

蜂膠膠囊（由深圳市榮格保健品有限公司提供）。

SPF健康成年昆明種雄性小鼠160只，體重為18-22g，廣東省醫(yī)學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)為0053395。

綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、生理鹽水、二硝基氟苯（DNFC）、Gimsa染液、硝基氯化四氮唑（TNT）、吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）、氧化型輔酶Ⅰ、0.2mol/L的Tris-HCL緩沖液（PH8.2）、0.1%的Na2C03溶液、1%的NP40、印度墨汁、雞紅細(xì)胞、甲醇等。

1.2儀器與設(shè)備

動(dòng)物臺(tái)秤、電子分析天平、離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、顯微鏡、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（UV-2450）、酶標(biāo)儀等。無(wú)菌手術(shù)器械、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、玻璃平皿、載玻片、潔凈工作臺(tái)、200目篩網(wǎng)、微量注射器、血色素吸管等。

1.3動(dòng)物試驗(yàn)分組與劑量設(shè)定

選用昆明種雄性小鼠，隨機(jī)分為免疫Ⅲ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四組，每組40只。其中免疫Ⅰ組進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（DTH）；免疫Ⅱ組進(jìn)行臟/體比值測(cè)定，血清溶血素測(cè)定；免疫Ⅲ組進(jìn)行碳廓清試驗(yàn)；免疫Ⅳ組進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)。

根據(jù)蜂膠膠囊的人體攝入量（2000mg/人/天，相當(dāng)于33.3mg/kg.bw），設(shè)高、中、低3個(gè)劑量組，分別為666、333、166.5mg/kg.bw，即20、10、5倍人體攝入量，一個(gè)玉米胚芽油對(duì)照組（樣品難溶于水），每組10只小鼠。將蜂膠膠囊根據(jù)不同劑量用玉米胚芽油配成相應(yīng)濃度，經(jīng)口灌胃，灌胃體積為0.4mL/20g.bw，對(duì)照組用等體積玉米胚芽油灌胃，每天一次，連續(xù)飼養(yǎng)30d。

1.4動(dòng)物試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定

依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003版）中的“增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)方法”，分別對(duì)試驗(yàn)小鼠進(jìn)行二硝基氟苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）試驗(yàn)（耳腫脹法），臟/體比值測(cè)定、血清溶血素測(cè)定試驗(yàn)（血凝法），碳廓清試驗(yàn)以及小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)（半體內(nèi)法），并收集相關(guān)試驗(yàn)指標(biāo)數(shù)據(jù)。

1.5數(shù)據(jù)處理方法

應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)上述數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析統(tǒng)計(jì)處理。

2結(jié)果與分析

2.1蜂膠對(duì)小鼠臟器/體重比的影響

在表1中可以看出，經(jīng)口給予小鼠不同劑量的蜂膠膠囊30天，小鼠的胸腺/體重以及脾臟/體重比值與陰性對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

2.2蜂膠對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響

從表2可以看出，樣品的各劑量組小鼠的左右耳片重量差值大于對(duì)照組，其中的高、中劑量組與對(duì)照組相比，有極顯著差異，P<0.01。

2.3蜂膠對(duì)小鼠體液免疫功能的影響

從3表中可以看出樣品各劑量小鼠的溶血素抗體積數(shù)均高于對(duì)照組，其中高、中劑量組與對(duì)照組相比差異極顯著，P<0.01。

2.4蜂膠對(duì)小鼠單核一巨噬細(xì)胞功能的影響

從表4可以看出，樣品的各個(gè)劑量組小鼠的吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組，但相比對(duì)照組差異均無(wú)顯著性（P>0.05），表明該樣品對(duì)小鼠的單核一巨噬細(xì)胞碳廓清功能沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用。

從表5中能夠看到，樣品各個(gè)劑量組小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組，其中高、中劑量組的吞噬率以及吞噬指數(shù)與對(duì)照組的差異具有顯著性（P<0.01或P<0.05），表明該樣品具有促進(jìn)小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能的作用。

3結(jié)論

從上述結(jié)果可以看出，與對(duì)照組相比，蜂膠對(duì)小鼠胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、單核一巨噬細(xì)胞碳廓清功能均無(wú)明顯影響（P>0.05）。高劑量（666mg/kg.bw）與中劑量（333mg/kg.bw）的蜂膠均能明顯提高小鼠細(xì)胞免疫功能（遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)）、體液免疫功能（血清溶血素水平）以及小鼠單核一巨噬細(xì)胞功能（腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力）。根據(jù)保健食品增強(qiáng)免疫力功能評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)所用的蜂膠膠囊具有增強(qiáng)免疫力的功能。

本試驗(yàn)所用劑量水平與張英姿以及韓彥彬分別進(jìn)行的黃蜂膠和黑蜂膠合用對(duì)小鼠免疫功能影響的研究所用基本一致，試驗(yàn)結(jié)果接近，可以說(shuō)明本試驗(yàn)的可靠性。而本試驗(yàn)所驗(yàn)證的增強(qiáng)免疫力功能是蜂膠保健食品眾多功能熱點(diǎn)之一，本試驗(yàn)所使用的的榮格牌蜂膠膠囊也僅是目前熱門研究成果之一，未來(lái)，高效、高品質(zhì)和高安全性的蜂膠產(chǎn)品將不斷涌現(xiàn)。