于榮賢 王祖忠 劉兵 余玉芳 張勇
[摘要]目的:探討蜂膠膠囊對(duì)小鼠免疫功能的影響。方法:分別以175、350、700mg/kgBW劑量的蜂膠給小鼠連續(xù)灌胃30d后,對(duì)增強(qiáng)免疫能力的功能評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:蜂膠膠囊能夠明顯提高小鼠細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能以及小鼠單核一巨噬細(xì)胞功能。結(jié)論:蜂膠膠囊具有增強(qiáng)免疫力的功能。
[關(guān)鍵詞]蜂膠;保健食品;免疫功能
蜂膠,工蜂采集的植物樹脂與其上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成的具有粘性的固體膠狀物。近年來(lái),對(duì)蜂膠的有效成分和生物學(xué)功能的研究取得了很大的進(jìn)展,人們已從蜂膠中分離鑒定出數(shù)百種活性成分,主要功效成分為黃酮類化合物。根據(jù)中國(guó)藥典2015版第一部的介紹,蜂膠主要用于體虛早衰,高脂血癥,外治皮膚皸裂,燒燙傷等。蜂膠作為一種多功能物質(zhì),已被開發(fā)成多種保健食品。其中代表性的蜂膠膠囊的開發(fā)為蜂膠在功能保健食品中的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ),目前國(guó)內(nèi)外對(duì)蜂膠膠囊的增強(qiáng)免疫力功能學(xué)的研究還不是很多。
本文對(duì)蜂膠膠囊進(jìn)行研究,探討其增強(qiáng)免疫力的功能性。依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版),將蜂膠膠囊設(shè)低、中、高3個(gè)劑量組,分別相當(dāng)于人實(shí)際用量的5、10和20倍,連續(xù)30天經(jīng)口給予小鼠蜂膠膠囊,研究蜂膠膠囊對(duì)小鼠體重、免疫能力的作用,其中免疫力能力包括其對(duì)綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)、免疫器官功能的作用、血清溶血素水平、單核一巨噬細(xì)胞吞噬廓清、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞功能等的影響,并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果分析蜂膠膠囊對(duì)機(jī)體免疫功能的影響,為蜂膠制品在功能保健食品中的應(yīng)用推廣提供依據(jù)。
1材料與方法
1.1材料與試劑
蜂膠膠囊(由深圳市榮格保健品有限公司提供)。
SPF健康成年昆明種雄性小鼠160只,體重為18-22g,廣東省醫(yī)學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào)為0053395。
綿羊紅細(xì)胞(SRBC)、生理鹽水、二硝基氟苯(DNFC)、Gimsa染液、硝基氯化四氮唑(TNT)、吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)、氧化型輔酶Ⅰ、0.2mol/L的Tris-HCL緩沖液(PH8.2)、0.1%的Na2C03溶液、1%的NP40、印度墨汁、雞紅細(xì)胞、甲醇等。
1.2儀器與設(shè)備
動(dòng)物臺(tái)秤、電子分析天平、離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱、恒溫水浴箱、顯微鏡、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(UV-2450)、酶標(biāo)儀等。無(wú)菌手術(shù)器械、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、玻璃平皿、載玻片、潔凈工作臺(tái)、200目篩網(wǎng)、微量注射器、血色素吸管等。
1.3動(dòng)物試驗(yàn)分組與劑量設(shè)定
選用昆明種雄性小鼠,隨機(jī)分為免疫Ⅲ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四組,每組40只。其中免疫Ⅰ組進(jìn)行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)(DTH);免疫Ⅱ組進(jìn)行臟/體比值測(cè)定,血清溶血素測(cè)定;免疫Ⅲ組進(jìn)行碳廓清試驗(yàn);免疫Ⅳ組進(jìn)行小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)。
根據(jù)蜂膠膠囊的人體攝入量(2000mg/人/天,相當(dāng)于33.3mg/kg.bw),設(shè)高、中、低3個(gè)劑量組,分別為666、333、166.5mg/kg.bw,即20、10、5倍人體攝入量,一個(gè)玉米胚芽油對(duì)照組(樣品難溶于水),每組10只小鼠。將蜂膠膠囊根據(jù)不同劑量用玉米胚芽油配成相應(yīng)濃度,經(jīng)口灌胃,灌胃體積為0.4mL/20g.bw,對(duì)照組用等體積玉米胚芽油灌胃,每天一次,連續(xù)飼養(yǎng)30d。
1.4動(dòng)物試驗(yàn)指標(biāo)測(cè)定
依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)中的“增強(qiáng)免疫力功能檢驗(yàn)方法”,分別對(duì)試驗(yàn)小鼠進(jìn)行二硝基氟苯誘導(dǎo)的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)試驗(yàn)(耳腫脹法),臟/體比值測(cè)定、血清溶血素測(cè)定試驗(yàn)(血凝法),碳廓清試驗(yàn)以及小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)(半體內(nèi)法),并收集相關(guān)試驗(yàn)指標(biāo)數(shù)據(jù)。
1.5數(shù)據(jù)處理方法
應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)上述數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析統(tǒng)計(jì)處理。
2結(jié)果與分析
2.1蜂膠對(duì)小鼠臟器/體重比的影響
在表1中可以看出,經(jīng)口給予小鼠不同劑量的蜂膠膠囊30天,小鼠的胸腺/體重以及脾臟/體重比值與陰性對(duì)照組相比,均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
2.2蜂膠對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能的影響
從表2可以看出,樣品的各劑量組小鼠的左右耳片重量差值大于對(duì)照組,其中的高、中劑量組與對(duì)照組相比,有極顯著差異,P<0.01。
2.3蜂膠對(duì)小鼠體液免疫功能的影響
從3表中可以看出樣品各劑量小鼠的溶血素抗體積數(shù)均高于對(duì)照組,其中高、中劑量組與對(duì)照組相比差異極顯著,P<0.01。
2.4蜂膠對(duì)小鼠單核一巨噬細(xì)胞功能的影響
從表4可以看出,樣品的各個(gè)劑量組小鼠的吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組,但相比對(duì)照組差異均無(wú)顯著性(P>0.05),表明該樣品對(duì)小鼠的單核一巨噬細(xì)胞碳廓清功能沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用。
從表5中能夠看到,樣品各個(gè)劑量組小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)雞紅細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)均高于對(duì)照組,其中高、中劑量組的吞噬率以及吞噬指數(shù)與對(duì)照組的差異具有顯著性(P<0.01或P<0.05),表明該樣品具有促進(jìn)小鼠的腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能的作用。
3結(jié)論
從上述結(jié)果可以看出,與對(duì)照組相比,蜂膠對(duì)小鼠胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、單核一巨噬細(xì)胞碳廓清功能均無(wú)明顯影響(P>0.05)。高劑量(666mg/kg.bw)與中劑量(333mg/kg.bw)的蜂膠均能明顯提高小鼠細(xì)胞免疫功能(遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng))、體液免疫功能(血清溶血素水平)以及小鼠單核一巨噬細(xì)胞功能(腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力)。根據(jù)保健食品增強(qiáng)免疫力功能評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),本試驗(yàn)所用的蜂膠膠囊具有增強(qiáng)免疫力的功能。
本試驗(yàn)所用劑量水平與張英姿以及韓彥彬分別進(jìn)行的黃蜂膠和黑蜂膠合用對(duì)小鼠免疫功能影響的研究所用基本一致,試驗(yàn)結(jié)果接近,可以說(shuō)明本試驗(yàn)的可靠性。而本試驗(yàn)所驗(yàn)證的增強(qiáng)免疫力功能是蜂膠保健食品眾多功能熱點(diǎn)之一,本試驗(yàn)所使用的的榮格牌蜂膠膠囊也僅是目前熱門研究成果之一,未來(lái),高效、高品質(zhì)和高安全性的蜂膠產(chǎn)品將不斷涌現(xiàn)。