柚皮苷對AB果蠅模型阿爾茨海默病的壽命影響

李靈芝　應曜宇

[摘要]目的：從行為學角度，觀察柚皮苷對轉基因果蠅阿爾茨海默病（AD）模型的影響。方法：采用Ga14/USA系統建立AB果蠅模型；連續給藥后進行行為學實驗，觀察柚皮苷對AD果蠅壽命的影響。對照組和模型組培養基中加入等容積培養菌（酵母菌）后，給藥組分別給予20mm01/L和50mmol/L柚皮苷，抑制劑組分別給予20mmol/L柚皮苷、20mmol/L L-NAME和50mmol/L柚皮苷、40mmol/L L-NAME。通過爬行實驗觀察柚皮苷對阿爾茨海默癥果蠅壽命的影響。結果：與對照組比較，模型組果蠅壽命明顯減少；與模型組相比，柚皮苷治療組能明顯增加果蠅壽命；與治療組相比，抑制劑組能顯著減少果蠅壽命。結論：柚皮苷對AD果蠅模型壽命具有保護作用，其作用機制可能與其激活eNOS表達有關。

[關鍵詞]柚皮苷；阿爾茨海默病；eNOS；壽命

阿爾茲海默癥（Alzheimer's disease，AD）一種表現為認知水平的進行性障礙、記憶力的損害、精神行為的異常表現以及情感的障礙為特征的神經退行性疾病，大腦皮質彌漫性萎縮、神經元的空泡缺失是AD的顯著病理特征，AD的主要致病因素是p一淀粉樣蛋白（Ap）在腦神經元間過量沉積，不同途徑直接或間接誘導產生了相關癥狀。

大量的實驗研究表明，黃烷酮類化合物對AD的治療有效。目前己有報道表明中藥單體柚皮苷，具有獨特的改善線粒體的功能障礙和較強的抗生物氧化的特性。

從行為學角度，研究黃烷酮類藥物柚皮苷對AD果蠅壽命的改善作用，并在AD中對柚皮苷抗氧化作用進行機制初探，為治療AD提供更多藥物靶點。

1材料

1.1動物

轉基因果蠅品系w1118，USA-AB42。

1.2藥物

柚皮苷，L-NAME（sigma公司）。

2方法

2.1AD

正常對照組使用果蠅品系w1118。致病性果蠅USA-AB42分別作為AD組、給藥組及抑制劑組使用。

2.2培養基制作

普通玉米培養基，加熱攪拌均勻后加0.5ml丙酸倒入高壓蒸汽滅菌后的培養瓶中，每瓶加入0.7g酵母粉。

2.3實驗分組

本實驗共設6組，包括實驗對照組、轉基因的AD果蠅模型組、AD+柚皮苷（20mmol/L）、AD+柚皮苷（50mmol/L）、AD+柚皮苷（20mmol/L）+抑制劑L-NAME（20mmol/L）、AD+柚皮苷（50mmol/L）+抑制劑L-NAME（40mmol/L）。

3結果

（1）與正常對照組比較，模型組平均壽命均顯著降低（P<0.001），藥物干預組果蠅平均壽命也降低（P<0.001），抑制劑組果蠅平均壽命也降低（P<0.001）。

（2）與AD果蠅模型組比較，低濃度的柚皮苷組果蠅的壽命提高（P<0.05），高濃度的柚皮苷組果蠅壽命明顯提高（P<0.001）。結果提示柚皮苷對AD果蠅的壽命具有一定的保護作用，且高濃度藥物實驗證明保護效果越明顯。

（3）與低濃度柚皮苷組相比，低濃度藥物抑制劑L-NAME組果蠅壽命降低（P<0.05）。

（4）與高濃度柚皮苷組相比，高濃度藥物抑制劑L-NAME組果蠅壽命明顯地降低（P<0.001）。結果提示柚皮苷對AD果蠅壽命的保護作用可能是通過激活eNOS蛋白來實現的，如表1所示。

4討論

果蠅最早是作為遺傳學研究的工具之一，研究操作的難度要求不高。本研究中，壽命計數被采用來檢測果蠅壽命，在果蠅行為學研究中，該行為范式基礎且應用廣泛。

本實驗結果提示，柚皮苷對AD果蠅壽命的保護作用可能是通過激活eNOS蛋白來實現的。在此之前一部分藥物在有很多相關報道被證實了對AD模型果蠅具有治療作用，但是柚皮苷相關AD治療作用以及該藥通過eNOS表達來發揮作用的相關報道未見。更進一步的形態學實驗研究還需要進行以藥物及機制驗證，以對其藥理作用進行說明和分析，以為臨床阿爾茨海默病的治療提供更多的藥物選擇靶點。