益氣逐瘀法對AMI/抑郁大鼠神經體液的影響及其機制研究

朱雨玫 胡馨 劉紅旭

摘要 目的：探討參元益氣活血膠囊（參元丹）對急性心肌梗死（AMI）/抑郁大鼠血清5-羥色胺（5-HT）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平的影響，以研究益氣逐瘀法對心梗合并抑郁神經體液的影響機制。方法：將30只Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為正常組、模型組、參元丹高劑量組、參元丹低劑量組、對照組，每組各6只，以冠脈結扎法及慢性輕度不可預知性刺激合并孤養法制作AMI/抑郁模型，分別予參元丹高劑量、參元丹低劑量、氟西汀或蒸餾水灌胃18 d。造模成功3 d后處死，測量各組大鼠血清5-HT、TNF-α水平。結果：血清5-HT濃度比較：與正常組比較，模型組大鼠血清5-HT濃度顯著降低（P<0.05），與模型組比較，參元丹干預組大鼠血清5-HT濃度均顯著升高（P<0.05）。參元丹干預組與對照組比較，血清5-HT濃度均無顯著性統計學意義（P>0.05）。血清TNF-α濃度比較：與正常組比較，模型組大鼠TNF-α濃度無顯著性統計學意義（P>0.05）。同模型組比較，對照組、參元丹干預組大鼠血清TNF-α濃度差異亦未呈現出統計學意義（P>0.05），但L-SYD血清TNF-α較各組明顯升高。結論：參元丹能改善AMI/抑郁的血清5-HT水平下降的情況，但對血清TNF-α水平無顯著影響。

關鍵詞 急性心肌梗死；抑郁；參元丹；5-羥色胺；腫瘤壞死因子-α

Abstract Objective：To observe the effect of Shen Yuan Dan（SYD） on 5-HT in the serum of Sprague-Dawley （SD） rats with acute myocardial infarction（AMI）/depression，and study the mechanisms of the theory Enhancing-qi in Removing-stasis in treating AMI/depression.Methods：Thirty SD rats were allocated into normal group，model group，H-SYD（high dose SYD） group，L-SYD（Low dose SYD） group and control group randomly.The model was estabished by coronary artery ligation with chronic mild unpredictable stimulation and fed alone.Models were given high dose of SYD，low dose of SYD，fluoxetine and distilled water.All the models were put into death 3 days later.The levels of 5-HT and TNF-α in rats serum of different groups were measured.Results：1） Serum 5-HT concentration.Compared with the normal group，5-HT concentration in the model group significantly decreased （P<0.05）； The serum concentration of 5-HT between the SYD group was significantly higher than that of the model group （P<0.05）.The concentration of 5-HT in serum of SYD group and control group had no statistical difference （P>0.05）.2） Serum TNF-α concentration.Compared with the normal group，the serum TNF-α concentration in the model group has no statistical difference （P>0.05），besides，TNF-α in serum of L-SYD group was higher than those of the normal group，control group and H-SYD group but without any significant difference（P>0.05）.Conclusion：SYD can reduce the level of 5-HT in serum but failed to affect TNF-α level.

Key Words AMI； Depression； SYD； 5-HT； TNF-α

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2017.02.004

自1977年生理-心理-社會醫學模式的提出，心理、社會因素在人體疾病發生中的作用逐漸被重視。抑郁障礙是心肌梗死（Myocardialinfarction，MI）患者常見的情緒障礙，2014年2月24日美國心臟協會（AHA）專家組在《Circulation》上發表的科學聲明[1]，正式將抑郁列為與肥胖、糖尿病、高血壓和吸煙有同等地位的急性冠脈綜合征（ACS）危險因素。兩者共病的機制仍不甚清楚，其發病機制可能與血管系統、自主神經系統、下丘腦-垂體-腎上腺軸、免疫系統等人的情緒與心血管系統之間的深層聯系及神經內分泌調節有關[2]。有動物實驗表明心肌梗死后TNF-α在炎性反應級聯反應中起決定性作用。其發病機制包括心肌梗死后免疫系統的激活和TNF-α對BBB的通透性的增加，其中TNF-α破壞BBB的機制有環加氧酶通路的激活、NO的釋放、細胞間粘附分子表達增加3方面[3]。5-HT升高介導的血小板聚集是抑郁合并心梗的另一潛在機制。血小板的聚集與冠心病發病有關，血小板活性增高會增加心梗伴抑郁癥患者心臟病事件發生的幾率。本研究據上述研究成果，對參元丹干預下AMI/抑郁大鼠的5-HT及TNF-α水平進行研究，從而探索益氣逐瘀法對AMI/抑郁大鼠神經體液的影響及機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SD雄性大鼠，SPF級，體質量（200±23）g。北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證編號：SCXK（京）2007-0001。飼養及實驗均在清潔動物房內進行，人工控光（12 h明暗交替，6：00 am—18：00 pm光照）、控溫（20 ℃±3 ℃）。

1.1.2 藥物 參元丹（SYD，制劑名稱：參元益氣活血膠囊，北京市藥監局批準文號99京衛字[056]第F203號）

1.2 方法

1.2.1 模型制備 急性心肌梗死大鼠模型的建立：腹腔注射3%戊巴比妥鈉（30 mg/kg）麻醉后，背位固定，氣管插管，連接小型動物呼吸機行人工呼吸，（呼吸頻率90次/min，潮氣量10～12 mL，呼吸比設為1∶1）。胸骨左旁第3～4肋間切開皮膚，長約1～1.5 cm，逐層鈍性分離皮下組織、肌肉，于2～3肋骨間進胸，向右上方推開胸腺，暴露心臟及大血管根部，剪開心包，用6-0 Prolene線在左心耳與肺動脈圓錐交界稍下2 mm處，結扎前降支血管。正常組不進行手術。慢性輕不可預見性應激抑郁模型的建立：在手術成功第2天開始，對動物進行18 d的隨機輕度應激刺激，包括禁水（24 h）、禁食（24 h）、夾尾（1 min）、熱應激（40 ℃、3 min）、冰水游泳（4 ℃、5 min）、搖晃（每次160 Hz、5 min）、電擊足底（30 V、5 s）、晝夜顛倒24 h、行為限制2 h共9種刺激，隨機安排到18 d內，每日采用1種刺激，平均每種刺激被采用2次，同種刺激不能連續出現，使動物不能預料刺激的發生。正常組不予任何刺激。

1.2.2 分組與給藥方法 30只大鼠隨機分為：1）正常對照組（正常組），2）心肌梗死并抑郁模型對照組[模型組，蒸餾水4.5 mL/（kg·d）]，3）參元丹低劑量試驗組[L-SYD組，生藥1 g/mL的清膏，1.5 g/（kg·d）]，4）參元丹高劑量試驗組[H-SYD組，4.5 g/（kg·d）]，5）氟西汀對照組[對照組，0.04%鹽酸氟西汀液，4.5 mL/（kg·d）]。每組6只術后連續給藥18 d。

1.2.3 檢測指標與方法 各組動物統一于實驗結束后的次日下午3：00，在心尖博動最強處經皮穿刺取血2 mL，放于5 mL無菌EP管中靜置30 min，2 000 r/min離心15 min（離心半徑為15 cm）。分離血清，保存于-80 ℃冰箱，用酶聯免疫吸附法測定血清1）TNF-α；2）5-HT的含量。

1.3 統計學方法 所有的數據均以均數士標準差表示，多組間總體比較方差齊者采用方差分析（ANOVA），兩兩比較采用q檢驗，方差不齊時采用Tamhane檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。統計分析用SPSS 15.0軟件完成。

2 結果

2.1 5組血清5-HT比較 與正常組比較，模型組大鼠血清5-HT濃度顯著降低（P<0.05），與模型組比較，參元丹干預組大鼠血清5-HT濃度均顯著升高（P<0.05）。參元丹干預組與對照組比較，血清5-HT濃度均無統計學意義（P>0.05）。

2.2 5組血清TNF-α比較 與正常組比較，模型組大鼠TNF-α濃度無顯著性統計學意義（P>0.05）。同模型組比較，對照組、參元丹干預組大鼠血清TNF-α濃度差異亦未呈現出統

3 討論

5-HT，是重要的血管調節物質，也是中樞神經系統重要的神經遞質。5-HT對血管的作用主要取決于5-HT受體及內皮功能[4]。生理狀態下，5-HT能夠舒張小血管，能使血管平滑肌和成纖維細胞增殖，血小板聚集，并能放大生長因子的作用。機體應激時，5-HT反應性增高，對外周血管及組織起到保護作用。然而，持續應激作用時，機體處于病理狀態，5-HT過度增高，則會損傷內皮功能，導致機體損傷[5]。Frishman WH[6]等人研究認為，心臟分布有多種5-HT受體，5-HT對心臟有直接的作用，參與了多種心血管疾病的發病。機體處于應激狀態時，5-HT水平增高，進而引起多種心理和行為異常[7]。本研究中模型組的血清5-HT較正常組明顯下降，這表明應激損傷會消耗血清中的5-HT，合并海馬神經遞質生成不足，5-HT遞質系統的功能明顯減退，故5-HT水平下降。對于應用參元丹干預的實驗組與模型組比較，參元丹干預后可顯著提高抑郁大鼠海馬神經遞質的生成并增強5-HT遞質系統功能，而同種藥物干預的高低劑量組間并無明顯統計學意義。

抑郁癥與一定程度的炎性反應激活相伴發生，促炎性細胞因子升高已成為抑郁癥的標志性現象。抗抑郁藥能夠阻斷臨床上應用細胞因子免疫治療的患者出現的抑郁樣癥狀[8]。TNF-α屬于前炎癥細胞因子，是一系列炎性反應中最早產生的細胞因子。研究表明，心理性應激反應能使腦內情感調節區的TNF-α等促炎癥性細胞因子濃度增加[9]。本研究結果未觀察到參元丹干預大鼠血清TNF-α濃度與模型組的統計學意義，但參元丹高劑量組血清TNF-α較各組明顯下降，提示高劑量參元丹干預可能對AMI/抑郁大鼠的炎性反應有所調控。

參考文獻

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