和解安神湯對肝郁脾虛證候失眠大鼠模型的影響

成光宇 丁云錄 趙德喜 李曉兵 李馳坤 陳聲武 張永和

(長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，吉林 長春 130103)

和解安神湯對肝郁脾虛證候失眠大鼠模型的影響

成光宇 丁云錄 趙德喜 李曉兵 李馳坤 陳聲武 張永和

(長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，吉林 長春 130103)

目的 探討和解安神湯對復合因素所致肝郁脾虛癥候失眠大鼠行為學、血液流變學和腦內神經(jīng)遞質含量的影響。方法 采用慢性夾尾刺激和腹腔注射對氯苯丙氨酸(PCPA)復合因子造模法建立失眠癥符合中醫(yī)肝郁脾虛證候的大鼠模型，用和解安神湯進行干預，對各組大鼠進行宏觀體征觀察、行為學評價、血液流變學分析以及下丘腦組織勻漿中5羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲腎上腺素(NE)檢測，明確和解安神湯對其動物模型的藥效學作用，進一步探討和解安神湯改善肝郁脾虛型失眠癥的機制。結果 在給予和解安神湯藥物治療后，顯著改善睡眠剝奪大鼠的精神狀態(tài)，改善失眠大鼠異常行為，可以明顯降低肝郁脾虛癥候失眠大鼠下丘腦中NE、DA含量、提高5-HT含量(P<0.01或P<0.05)。結論 和解安神湯對治療失眠有一定療效，且呈一定量效關系，其改善動物睡眠、治療失眠的作用機制可能與影響腦內單胺類神經(jīng)遞質含量有關。

和解安神湯；失眠；肝郁脾虛

和解安神湯是趙德喜教授擬定的處方。本文通過采用慢性夾尾刺激和腹腔注射對氯苯丙氨酸(PCPA)復合因子造模法建立符合中醫(yī)肝郁脾虛證候的失眠大鼠模型，用和解安神湯進行干預，明確和解安神湯對該動物模型的藥效學作用，進一步探討和解安神湯改善肝郁脾虛型失眠癥的機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 清潔級雄性Wistar大白鼠，體重180～220 g。購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司，動物合格證號：SCXK-(吉)2011-0004。藥品試劑：和解安神湯，由長春中醫(yī)藥大學實驗研究中心制備。地西泮，規(guī)格：2.5 mg/片，批號：1412018，天津力生制藥股份有限公司產品。PCPA，規(guī)格：25 g/瓶，批號：65628MJ，五羥色胺(5-HT)試劑盒，規(guī)格：96T/盒，批號：20150501A；多巴胺(DA)試劑盒，規(guī)格：96T/盒，批號：20150601A；去甲腎上腺素(NE)試劑盒，規(guī)格：96T/盒，批號：20150401A，均購自美國RD公司。儀器 Morris水迷宮視頻跟蹤分析系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司產品。BIO680酶標儀，Japan BIO RAD公司產品。LBY-N6B型全自動自清洗旋轉式血黏度儀，北京普利生公司產品。FSH-2可調高速勻漿器，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司產品。BiofugeStratos臺式高速冷凍離心機，德國賀利氏公司產品。

1.2 方法

1.2.1 分組復制模型〔1～3〕動物購入后，適應飼養(yǎng)7 d，隨機分為正常組、模型組、地西泮(0.9 mg/kg)組、和解安神湯高、中、低(1.8 g生藥/kg、0.9 g生藥/kg和0.45 g生藥/kg)劑量組，每組10只。建立失眠模型，采用大鼠慢性夾尾刺激和PCPA腹腔注射復合因素造模法，器械刺激，分別用止血鉗輕夾大鼠尾部，致使大鼠激惹相互打斗，45 min/d，打斗以不破皮流血為宜，持續(xù)20 d，于造模第16天起，對模型組及各給藥組的大鼠予PCPA，PCPA 按300 mg/kg溶于弱堿性生理鹽水中，配置成混懸液，以10 ml/kg腹腔注射，連續(xù)2 d，大鼠晝夜活動不停，睡眠減少直至消失，進食及飲水增多，表示造模成功。

1.2.2 實驗給藥 和解安神湯高、中、低劑量組大鼠于夾尾刺激第7天起，給予和解安神湯混懸液灌胃，1次/d，連續(xù)14 d。每周稱量體重1次。

1.2.3 指標檢測 (1)狀態(tài)觀察：每周觀察大鼠實驗前后皮毛、睡眠、體重、飲食、排泄情況及精神狀態(tài)。實驗結束前，將大鼠置于飼養(yǎng)盒中，適應3 min后，記錄大鼠的自發(fā)活動，記錄2 min內的自由活動時間(走動時間)及前肢離地舉立次數(shù)。(2)行為學評價：Morris水迷宮試驗，實驗水深30 cm，水溫(25±1)℃，將大鼠面向池壁逐一放入水池中，放入位置為第二象限標記處，儀器錄像系統(tǒng)自動記錄大鼠逃避潛伏期(從鼠入水到四肢爬上平臺所需的時間)。如大鼠在3 min內未找到池中平臺，實驗人將其引導至平臺。造模第16天開始，1次/d，連續(xù)訓練5 d。第6天撤除平臺正式測試，以大鼠第1次穿臺所用時間和3 min內穿越原來平臺位置次數(shù)作為評價大鼠學習成績的指標。(3)血液流變學分析：造模第21天，大鼠進行全部行為學測試后，禁食12 h，10%水合氯醛腹腔麻醉后，腹主動脈取血，抗凝，部分離心，測定全血、血漿黏度。(4)下丘腦中DA、NE和5-HT含量的測定：取血后，在低溫下快速取出全腦，分離下丘腦，冰浴下勻漿器破碎制成10%勻漿，3 000 r/min離心10 min，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法測定大鼠下丘腦中DA、NE和5-HT的含量。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS19.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1 一般行為 正常組大鼠在全部實驗過程中，皮毛光滑潤澤，精神活潑，穩(wěn)定，活動如常。模型組大鼠在給予PCPA后，大鼠晝夜節(jié)律消失，白天夜晚活動不停，睡眠減少，出現(xiàn)反應性降低，精神疲憊，萎靡，警覺力下降等現(xiàn)象。在給予和解安神湯藥物干預后，3個劑量組一般行為狀態(tài)均好于模型組。

2.2 和解安神湯對大鼠自主活動的影響 和解安神湯高、中、低劑量組在2 min內走動時間明顯低于模型組(P<0.01或P<0.05)；和解安神湯高、中劑量組在2 min內前肢舉立次數(shù)明顯低于模型組(P<0.01和P<0.05)。見表1。

2.3 各組穿臺時間及次數(shù)比較 正常組、和解安神湯高、中劑

量組第1次穿臺時間與模型組比較顯著縮短(P<0.01,P<0.05)；穿臺次數(shù)顯著增加(P<0.01)。見表2。

2.4 血液流變學分析 和解安神湯對失眠大鼠血液流變學指標無明顯影響。見表3。

表1 和解安神湯對失眠大鼠自主活動的影響±s，n=10)

與模型組比較：1)P<0.05；2)P<0.01，下表同

表2 各組大鼠第1次穿臺時間及穿臺次數(shù)的比較±s，n=10)

表3 和解安神對失眠大鼠血液流變學的影響±s,n=10)

2.5 各組下丘腦5-HT、NE、DA含量比較 模型組下丘腦組織勻漿中5-HT含量顯著低于正常組(P<0.01)，表明模型復制成功。和解安神湯高、中、低劑量組均可顯著提高5-HT含量(P<0.01或P<0.05)；模型組NE含量顯著高于正常組(P<0.01)，和解安神湯高、中劑量組均可顯著降低NE含量(P<0.01，P<0.05)；模型組DA含量顯著高于正常組(P<0.01)，和解安神湯高、中、低劑量組均可顯著降低DA含量(P<0.01，P<0.05)。見表4。

表4 各組下丘腦組織勻漿中5-HT、NE及DA含量比較

3 討 論

失眠癥又稱不眠證，屬于中醫(yī)學不寐的范疇，現(xiàn)在診斷學定義為患者對睡眠時間和(或)質量不滿足并影響白天社會功能的一種主觀體驗〔4〕。行為反應是機體的重要功能表現(xiàn)之一，對行為學評估是神經(jīng)疾病的重要指標。在本實驗中，給予和解安神湯藥物治療后，可以明顯改善失眠模型大鼠的自主活動異常狀況。建立大鼠失眠動物模型可致大鼠學習記憶障礙〔5〕，通過Morris水迷宮法，針對大鼠學習記憶行為進行檢測。在給予和解安神湯藥物干預后，可以明顯改善失眠模型大鼠的空間學習記憶能力。丘腦是參與睡眠-覺醒節(jié)律調節(jié)的重要結構之一〔6〕。藥物干預治療可通過降低NE抑制其維持覺醒的作用，減少了對5-HT的抑制，從而使睡眠增加和改善，DA神經(jīng)元胞體主要集中于中腦，起著維持覺醒和行為興奮的作用〔7〕。本研究結果提示和解安神湯可以通過降低大鼠下丘腦勻漿中NE、DA含量、升高下丘腦勻漿中5-HT含量，從而改善大鼠睡眠。

《景岳全書·郁證》曰：實邪在肝，多見氣滿腹脹，所當平也。從而形成肝郁脾虛之虛實夾雜證，氣血虧虛，腦失所養(yǎng)致失眠〔8〕。和解安神湯就是對失眠癥病機進行深入研究所取得的成果，該湯以湯劑形式應用多年，用于肝郁脾虛之不寐，能夠更全面地改善睡眠情況。本實驗的失眠大鼠模型能體現(xiàn)肝郁脾虛癥候，和解安神湯治療失眠有一定療效，且呈一定量效關系，其改善動物睡眠，治療失眠的作用機制可能與影響腦內單胺類神經(jīng)遞質含量有關。

1 朱 潔，申國明，汪遠金，等.肝郁證失眠大鼠模型的建立與評價〔J〕.中醫(yī)雜志，2011;52(8)：689-92.

2 肖成榮，馬增春，李海靜，等.PCPA失眠大鼠模型的制作及其機制〔J〕.毒理學雜志,2007;21(4)：326-7.

3 胡金鳳，王朝輝，齊燕英，等.“針刺五臟俞穴調五臟神”針法對失眠大鼠腦內細胞因子調節(jié)作用及其機制的研究〔J〕.吉林中醫(yī)藥，2008;28(9)：688-9.

4 失眠定義、診斷及藥物治持共識專家組.失眠定義、診斷及藥物治療專家共識(草案)〔J〕.中華神經(jīng)科雜志，2006;39(2)：141.

5 范新六.基于突觸可塑性的加味四逆散對睡眠剝奪大鼠學習記憶障礙的調控機制研究〔D〕.北京：北京中醫(yī)藥大學，2011.

6 張 業(yè)，趙欣紀，楊新年.眠安湯對失眠大鼠行為學及下丘腦單胺類神經(jīng)遞質的影響〔J〕.現(xiàn)代中醫(yī)藥，2015;35(5)：169-71.

7 靳照宇，庫寶善，姚海燕，等.5-HT1A和5-HT2受體功能與覺醒、睡眠成份關系的研究〔J〕.中國藥理學通報，2000;16(2)：208-11.

8 蔡昕宏.針藥結合治療肝郁脾虛型失眠的臨床研究〔D〕.廣州：廣州中醫(yī)藥大學，2013.

〔2017-02-19修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

吉林省中醫(yī)藥科技重點實驗室項目(No.2014-ZDR)

趙德喜(1967-)，男，博士生導師，主任醫(yī)師，主要從事中醫(yī)腦病的臨床治療研究。

成光宇(1971-)，男，副主任藥師，主要從事中藥、天然藥物的藥理活性及作用機制研究。

R285.5

A

1005-9202(2017)13-3160-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.13.017