白芷中2個主要活性成分含量測定

金海燕 張建奇

摘 要：本文采用高校液相測定了白芷藥材中歐前胡素和異歐前胡素的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），以乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）為流動相，檢測波長為304nm；異歐前胡素在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系；歐前胡素在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系。異歐前胡素和歐前胡素的平均回收率分別為99.5%、99.6%，RSD為0.87%（n=6）、0.89%（n=6）；此方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可用于白芷藥材中異歐前胡素和歐前胡素的含量測定。

關鍵詞：白芷藥材；異歐前胡素；歐前胡素

白芷具有祛風濕，活血排膿，生肌止痛的功效。《日華子本草》記載："治目赤胬肉，及補胎漏滑落，破宿血，補新血，乳癰、發(fā)背、瘰疬、腸風、痔瘺，排膿，瘡痍、疥癬，止痛生肌，去面皯疵瘢。白芷常用于頭痛、牙痛、鼻淵、癰疽瘡瘍、皮膚瘙癢等。白芷具有鎮(zhèn)痛、抗菌、平喘、抗腫瘤、保肝、興奮運動和呼吸中樞、光毒性等方面的藥理作用[1-4]。本文采用高校液相測定了白芷藥材中歐前胡素和異歐前胡素的含量。

1 儀器與試藥

LC1620A高效液相色譜儀（河南鄭州南北儀器設備有限公司）；Milli-Q Direct水純化系統(tǒng)（上海力晶科學儀器有限公司）；VWR天平防震墊（北京慧龍環(huán)科環(huán)境儀器有限公司）；CO-1000型色譜柱溫箱（武漢恒信世紀科技有限公司）；U-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。異歐前胡素和歐前胡素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供。乙腈（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、甲醇（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、醋酸鈉（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、三乙胺（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、磷酸（濟南圣和化工有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[5-6]。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）；檢測波長為304nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按歐前胡素峰計算應不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取白芷藥材適量，粉碎成細粉，精密稱取，置錐形瓶中，加甲醇適量，超聲處理三十分鐘，放置至室溫，過濾，將濾液轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶內(nèi)，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3 對照品溶液的制備

分別精密稱取歐前胡素和異歐前胡素對照品2mg、2mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 標準曲線的制備

制備濃度為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的異歐前胡素對照品溶液，制備濃度為5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、30μg·mL-1、40μg·mL-1、50μg·mL-1的歐前胡素對照品溶液。分別按異歐前胡素、歐前胡素的測定參數(shù)繼續(xù)測定。以吸光度為橫坐標，濃度為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程。試驗表明，異歐前胡素在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系；歐前胡素在5～50μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

依照2.3項下制備對照品溶液，分別精密吸取異歐前胡素和歐前胡素對照品溶液重復測定6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD分別為0.66%和0.71%。結(jié)果表明，本實驗精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗

分別稱取同批白芷藥材樣品6份，分別依照2.3項下供試品制備方法制備供試品，按質(zhì)量標準含量測定項下方法測定含量，并計算樣品的RSD值，RSD值為0.77%，0.78%，結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

依照2.3項下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4小時進樣測定，供試品異歐前胡素和歐前胡素峰面積的RSD分別為0.77%和0.79%。結(jié)果表明異歐前胡素和歐前胡素至少在4h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，分精密添加一定量的異歐前胡素和歐前胡素對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量，計算回收率。6次測定的平均回收率分別為99.5%和99.6%，RSD分別為0.87%和0.89%。

2.9 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定五批白芷藥材樣品中異歐前胡素和歐前胡素的含量。

3 討論

分別考察乙腈-甲醇-水（30∶35∶35），乙腈-0.05%磷酸（14：86），甲醇-乙腈-水（40：40：20），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺）不同比例的流動相，結(jié)果以乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-水（30∶35∶35）為流動相。白芷藥材中異歐前胡素和歐前胡素的含量為不少于0.7mg/g和1.1mg/g。

參考文獻

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