離子交換法制備硫酸卷曲霉素工藝

王長林

摘 要：本實驗對離子交換法制備硫酸卷曲霉素工藝的進行研究。實驗最佳工藝為：：卷曲霉素的溶液pH為7.0，上樣濃度流速為3BV/h，上樣后靜止一小時， 用6倍樹脂床體積的純化水以1BV/h流速洗脫，收集洗脫液。本實驗方法成本低，適宜用于產業化生產。

關鍵詞：離子交換法；制備；硫酸卷曲霉素

硫酸卷曲霉素為白色或類白色粉末，英文別名為Capreomycin Sulphate； 3，6-diamino-N-[[（8Z）-15-amino-11-（2-iminohexahydropyrimidin-4-yl）-2-methyl-3，6，9，12，16-pentaoxo-8-（ureidomethylene）-1，4，7，10，13-pentazacyclohexadec-5-yl]methyl]hexanamide； sulfuric acid。硫酸卷曲霉素為多肽復合物，適用于肺結核病的二線治療藥物，經一線抗結核藥（如鏈霉素、異煙肼、利福平和乙胺丁醇）治療失敗者[1-3]。利用離子交換劑中的可交換基團與溶液中各種離子間的離子交換能力的不同來進行分離的一種方法。本實驗對離子交換法制備硫酸卷曲霉素工藝的進行研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：LC-3000高效液相色譜儀（北京國譜科技有限公司）；PHB恒溫水浴箱（天津因賽科技發展有限公司）；超聲波清洗機（上海柯祁儀器設備有限公司）；RE-52AA旋轉蒸發儀（東莞康潤儀器設備有限公司）；PH酸度計（上海儀分科學儀器有限公司）；可見分光光度計（上海佑科儀器儀表有限公司）；C1450-230V微型高速離心機（北京晨曦勇創科技有限公司）；DHJF-4002低溫恒溫攪拌反應浴（可打外循環）（杭州庚雨儀器有限公司）；EPED-E-EDI系列超純水機（南京易普易達科技發展有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（284mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對照品：硫酸卷曲霉素購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4 試劑：磷酸二氫鉀（荊州市聯達精細化工有限公司）、磷酸（荊州市聯達精細化工有限公司）、己烷磺酸鈉（荊州市聯達精細化工有限公司）、甲醇（荊州市聯達精細化工有限公司）、乙腈（荊州市聯達精細化工有限公司）、鹽酸（荊州市聯達精細化工有限公司）、氫氧化鈉（荊州市聯達精細化工有限公司）。

1.5 樹脂：大孔吸附樹脂HZ818（河北聚源藍星化工建材有限公司）、大孔吸附樹脂HZ832（河北聚源藍星化工建材有限公司）、大孔吸附樹脂D402（河北聚源藍星化工建材有限公司）、大孔吸附樹脂HZ801（河北聚源藍星化工建材有限公司）、大孔吸附樹脂HZ816、（河北聚源藍星化工建材有限公司）、大孔吸附樹脂D152（河北聚源藍星化工建材有限公司）。

2 分析方法

依據查閱文獻及考查的結果，確定色譜條件如下[4-5]。色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（284mm×4.6mm，5μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（稱取磷酸二氫鉀54.4g，加水至1.5L，溶解，用磷酸調pH至2.5，加入己烷磺酸鈉9.4g，用水稀釋至2.0L）-甲醇-乙腈（84∶8∶8）為流動相，檢測波長：268nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數按硫酸卷曲霉素計算應不得低于2000。

3 實驗方法

3.1 樹脂的預處理

樹脂裝入交換器后，用潔凈水反洗樹脂層，直至出水清晰、無氣味、無細碎樹脂為止。用約8倍樹脂體積的4-5%HCl溶液，以2m/h的流速通過樹脂層。全部通入后，浸泡6小時后用潔凈水沖洗至出水呈中性。用約8倍樹脂體積的2-5%NaOH溶液，以2m/h的流速通過樹脂層。全部通入后，浸泡6小時后用潔凈水沖洗至出水呈中性。

3.2 靜態吸附實驗

3.2.1 樹脂吸附容量及吸附率的測定

稱取預處理好的大孔吸附樹脂HZ818、大孔吸附樹脂HZ832、大孔吸附樹脂D402、大孔吸附樹脂HZ801、大孔吸附樹脂HZ816、大孔吸附樹脂D152，分別裝入三角瓶中，精密稱取卷曲霉素溶液也裝入三角瓶中，在恒溫水浴振蕩器上振搖十二小時，過濾，測定濾液中卷曲霉素的濃度，計算吸附容量及吸附率.。結果表明D152樹脂對卷曲霉素的吸附量明顯高于其他類型樹脂，故選擇D152樹脂。

3.2.2 樹脂解吸率測定

取上述吸附飽和的樹脂，準確加入一定體積的乙醇溶液，置恒溫水浴振蕩器上振蕩十二小時，過濾，測定解吸液中硫酸卷曲霉素濃度，計算解吸率。

3.3 樹脂的動態吸附和洗脫實驗

3.3.1 吸附流速的確定將卷曲霉素廢液不同流速，流速分別為1BV/h、2BV/h、3BV/h、4BV/h和5BV/h，收集流出液并檢測質量濃度，計算不同流速下樹脂對卷曲霉素的吸附量，從而確定最佳吸附流速，實驗表明，上樣液流速為3BV/h時效果最好。

3.3.2 洗脫劑對卷曲霉素吸效果的影響將有卷曲霉素的廢液（pH7.0）上柱，達到吸附飽和后，分別用純化水、10%乙醇溶液、20%乙醇溶液、30%乙醇溶液，以1BV/h流速進行洗脫，實驗表明純化水的洗脫效果最好。對洗脫液進行含量測定，發現6倍柱體積基本能將卷曲霉素吸洗脫下來。

3.3.3 最佳吸附-洗脫條件下的驗證實驗

連續三次使用卷曲霉素的溶液液pH為7.0，上樣濃度流速為3BV/h，上樣后靜止一小時，用6倍樹脂床體積的純化水以1BV/h流速洗脫，收集洗脫液。處理洗脫液，用稀硫酸解析制得硫酸卷曲霉素洗脫液。測定硫酸卷曲霉素含量。解析濃度分別為93.6%、93.8%、92.8%。實驗結果表明解析濃度都在百分之九十以上，工藝比較穩定。

4 討論

該工藝實現了在低濃度下有效富集卷曲霉素產品的目的，增加了卷曲霉素的收率。實驗最佳工藝為：硫酸卷曲霉素的溶液pH為7.0，上樣濃度流速為3BV/h，上樣后靜止一小時，用6倍樹脂床體積的純化水以1BV/h流速洗脫，收集洗脫液。本實驗方法成本低，適宜用于產業化生產。

參考文獻

[1]陳啟亮，陳亮，尹建軍.含左氧氟沙星及卷曲霉素方案治療耐多藥肺結核近期療效分析[J].中華結核和呼吸雜志，2003（08）.

[2]高三友，伍學強，王庚琴，王國斌，王偉，王國杰，王友誼.新藥靜注型卷曲霉素治療復治菌陽肺結核遠期效果觀察[J].河南醫學研究，2003（01）.

[3]姬寶軍.力克肺疾、氧氟沙星、卷曲霉素、丙硫異煙胺聯合治療耐多藥肺結核的臨床觀察[J].中國防癆雜志，2002（04）.

[4]江勇，錢明，王威，陳濤，李海成，陳燕梅，卓文基，郭卉欣，周琳，鐘球.卷曲霉素在羅氏培養基中的穩定性研究[J].中國防癆雜志，2013（08）.

[5]王立萍，劉英，楊淑先.高效液相色譜法分離測定硫酸卷曲霉素的4個組分[J].藥物分析雜志，2012（07）.