龍牡壯骨顆粒對糖皮質激素所致大鼠骨質疏松癥作用研究

胡振波 趙 剛 劉惟莞 夏 純 丁 虹 黃志軍

(1 健民藥業集團藥物研究院，武漢，430052； 2 武漢大學藥學院，武漢，430071)

龍牡壯骨顆粒對糖皮質激素所致大鼠骨質疏松癥作用研究

胡振波1趙 剛1劉惟莞2夏 純1丁 虹2黃志軍1

(1 健民藥業集團藥物研究院，武漢，430052； 2 武漢大學藥學院，武漢，430071)

目的：探討龍牡壯骨顆粒對糖皮質激素所致骨質疏松癥大鼠的治療效果。方法：采用低鈣飼料飼養加肌注氫化潑尼松的方法制備大鼠骨質疏松癥模型。造模成功后，復方組、中藥成分組、化藥成分組、模型組大鼠分別灌胃龍牡壯骨顆粒復方、龍牡壯骨顆粒中藥成分、龍牡壯骨顆粒化藥成分及蒸餾水，正常對照組大鼠給予正常飼料飼養，不予造模。給藥35 d后測定相關指標。結果：復方組大鼠體重、胸腺指數、血鈣、血磷、股骨干重、骨鈣、干骺端皮質外徑、骨密度、骨干髓質密度、皮質密度、骨密度等指標明顯優于模型組，尿鈣含量則顯著低于模型組。結論：龍牡壯骨顆粒對糖皮質激素所致骨質疏松癥大鼠有良好治療效果。

龍牡壯骨顆粒；大鼠；骨質疏松癥；糖皮質激素

龍牡壯骨顆粒是健民藥業集團股份有限公司獨家品種，已上市30余年，主要用于治療和預防小兒佝僂病、軟骨??；對小兒多汗、夜驚、食欲不振、消化不良、發育遲緩等癥以及反復呼吸道感染也有治療作用[1-2]。前期已有大量研究數據驗證了該品種對小兒佝僂病的療效[3-4]，但對骨質疏松癥的治療作用尚無實驗數據，僅有一些臨床觀察報道[5-6]。為了考察龍牡壯骨顆粒對骨質疏松癥的作用情況，本研究采用低鈣飼料飼養加糖皮質激素氫化潑尼松肌注的方式制作大鼠骨質疏松癥模型[7-8]，并考察龍牡壯骨顆粒對骨質疏松癥大鼠各項指標的影響情況，以期探討該產品治療骨質疏松癥的療效。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 龍牡壯骨顆粒、龍牡壯骨顆粒中藥組分、龍牡壯骨顆?；幗M分均由健民藥業集團股份有限公司提供(批號：010825)。氫化潑尼松，上海第九制藥廠生產(批號：010501)。各項生化指標試劑盒均為上海申能-德賽診斷技術有限公司產品，其他試劑均為國產分析純。

1.2 儀器 AEROSET型全自動生化分析儀(美國雅培公司)；LGS-4-1型馬福爐(上海第三實驗電爐廠)；TAS9862型乙炔火焰原子吸收光譜儀(北京普析通用儀器有限公司)；HPIAS-2000型圖像分析系統(千屏影像工程公司)；UV-120型紫外分光光度計(日本島津)。

1.3 實驗動物 SD雄性成年清潔級大鼠，體重(242±27)g，由湖北省衛生防疫站提供，于實驗前飼養5 d，以適應本實驗動物室環境。

1.4 方法 60只大鼠隨機分為五組，每組12只，分別為正常對照組、模型組、復方組、中藥成分組、化藥成分組。其中，正常對照組給予正常飼料(含鈣0.46%)飼養，飲自來水。其他四組均采用低鈣飼料(含鈣0.16%)飼養、飲用蒸餾水，并肌注氫化潑尼松4.5 mg/kg，每周肌注2次，制作骨質疏松模型。在造模的基礎上，復方組灌胃給予龍牡壯骨顆粒，(2.7 g生藥+3.3 μg維生素D2+10 mg葡萄糖酸鈣+2.5 mg乳酸鈣)/kg，1次/d；中藥成分組給予龍牡壯骨顆粒中藥成分(2.7 g生藥/kg)，1次/d；化藥成分組給予(3.3 μg維生素D2+10 mg葡萄糖酸鈣+2.5 mg乳酸鈣)/kg，1次/d；正常對照組和模型組則給予10 mL/kg蒸餾水灌胃。給藥35 d后測定如下指標：

體重：觀察實驗前和實驗結束時體重變化。

胸腺、脾、腎指數：取胸腺、脾臟、腎臟稱重，根據公式計算臟器指數：臟器指數=臟器重量/體重(mg/g)。

尿鈣：實驗結束時，收集每只大鼠24 h尿液，用鄰甲酚肽絡合酮比色法按照試劑盒說明書方法測定尿鈣排泄量[9]。

血清鈣、磷：實驗結束時，以3%戊巴比妥30 mg/kg腹腔注射麻醉動物，頸動脈取血，3 000 r/min分離血清，測定血清鈣含量；以磷鉬酸法按照試劑盒說明書方法測定血清磷含量[10]；以放射免疫法測定血清骨鈣素含量[11]。

股骨X線片采用HPIAS-2000型圖像分析系統進行分析，得出骨密度相關參數。

1.5 統計學方法 所有數據均采用均數±標準差表示，經方差分析進行統計學處理，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 對骨質疏松癥大鼠體重的影響 結果如表1所示，由于皮質激素的負氮平衡作用可致體重不增或下降，模型組大鼠體重增加明顯要低于正常對照組大鼠，但相對于模型組，復方組及中藥成分組大鼠體重增長明顯(P<0.05)，化藥成分組與模型組差異則無統計學意義。

表1 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分 對大鼠體重的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

2.2 對骨質疏松癥大鼠臟器指數的影響 各組動物臟器指數結果見表2。糖皮質激素可明顯降低大鼠脾臟、胸腺和骨指數(與正常對照組比較，P<0.01)，對腎臟則無明顯改變(P>0.05)。復方組及其中藥成分組能逆轉糖皮質激素所致大鼠的胸腺萎縮，對脾臟及骨指數有一定的改善作用，但與模型組比較差異無統計學意義，化藥成分組與模型組則無統計學意義。

2.3 對骨質疏松癥大鼠血清鈣、磷及尿鈣的影響 結果如表3所示。與正常對照組比較，模型組大鼠血鈣及血磷含量明顯降低，尿鈣含量明顯升高。復方組及中藥成分組、化藥成分組均能使糖皮質激素所致骨質疏松癥大鼠血清鈣、磷含量顯著升高，尿鈣顯著降低，表明可明顯減少鈣的丟失，有利于新骨的形成。

2.4 對骨質疏松癥大鼠股骨的影響 糖皮質激素能使大鼠骨干重及骨鈣含量明顯下降(見表4，模型組與正常對照組比較，P<0.01)，復方組及中藥成分組、化藥成分組均能使骨質疏松癥大鼠骨干重及骨鈣含量顯著升高(與模型組比較，P<0.01)。

表2 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分對大鼠脾、胸腺、腎及骨指數的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01

表3 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分對骨質疏松癥 大鼠血清鈣、磷及尿鈣含量的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

表4 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分對骨質疏松癥大鼠股骨的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01

2.5 骨質疏松癥大鼠股骨X線片圖像分析 結果如表5所示。無論干骺端還是骨干糖皮質激素均導致骨密度降低，模型組與正常對照組差異均有統計學意義(P<0.01)。復方組及中藥成分組、化藥成分組均可使干骺端的骨密度、皮質外徑，骨干平均骨密度、平均皮質密度、平均髓質密度有顯著性改善。

表5 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分對骨質疏松癥大鼠股骨密度參數的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

3 討論

龍牡壯骨顆粒由13味中藥及維生素D2、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣等組成，方中黃芪健脾補氣、升陽固表止汗，黨參、白術(炒)、山藥、茯苓、大棗益氣健脾、補血益氣，雞內金(炒)消食健脾，龍骨、牡蠣(煅)鎮驚安神、斂汗固精，五味子(醋制)斂肺滋腎，生津收汗，龜甲(醋制)滋陰潛陽，益腎強骨，輔以麥冬、甘草，以養胃陰，調和脾胃。全方合用，脾腎雙補，共奏健脾益氣，補腎益精，填精益髓，培元固本之功，此外，該品還含有維生素D2及葡萄糖酸鈣、乳酸鈣等成分，適合于骨質疏松癥的治療[1]。

研究結果顯示，龍牡壯骨顆粒可顯著增加糖皮質激素所致骨質疏松癥大鼠的體重、胸腺指數、血鈣、血磷、股骨干重、骨鈣及干骺端的骨密度、皮質外徑，骨干骨密度、皮質密度、髓質密度等，并顯著降低尿鈣含量，由此，該品可顯著增加鈣的利用率，促進新骨的形成與骨生長。此外，龍牡壯骨顆粒中藥成分組也有類似作用，提示該產品中藥成分可獨立治療骨質疏松癥。

龍牡壯骨顆?；幊煞纸M對骨質疏松癥大鼠的體重及脾、胸腺、腎及骨等臟器指數均無影響，因此，僅通過灌胃給予維生素D2+葡萄糖酸鈣+乳酸鈣對于骨質疏松癥的治療效果不明顯，尤其是對體重及臟器指數幾無療效，但對于增加血鈣、血磷含量，降低尿鈣含量，增加股骨干重與骨鈣含量以及增加骨密度等方面有一定效果。然而，龍牡壯骨顆粒相對于化藥成分組在動物整體機能的改善方面表現出了明顯的優勢，尤其是體重的增加及免疫力的提升等方面，顯示出了更為全面的療效。

[1]郭小娟，王玲，趙剛，等.龍牡壯骨顆粒強筋壯骨作用綜述[J].世界中醫藥,2017,12(7):1551-1553.

[2]郭小娟，王玲，趙剛，等.龍牡壯骨顆粒健脾和胃作用綜述[J].世界中醫藥,2017,12(10):2531-2534.

[3]劉秀蘭，向明，李亞洲，等.龍牡壯骨顆粒治療大鼠佝僂病藥效學及其機制[J].中國醫院藥學雜志,2014,34(22):1893-1897.

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[5]戴亦暉，陳瑤.龍牡壯骨顆粒治療原發性骨質疏松癥的臨床觀察[J].中國療養醫學,2012,21(2):152-153.

[6]戴亦暉，黃健，郭堯.龍牡壯骨顆粒治療原發性骨質疏松癥158例[J].沈陽部隊醫藥,2012,25(5):386-387.

[7]梁德，唐晶晶，江曉兵，等.潑尼松灌胃與肌內注射對大鼠骨密度、骨生物力學性能及骨代謝的影響[J].中國實驗動物學報,2014,22(6):85-88.

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[11]陳志勇，應晟.血清骨鈣素、胰島素樣生長因子-1和胰島素生長因子結合蛋白檢測在兒童性早熟早期診斷中的意義[J].現代實用醫學,2017,29(5):605-607.

StudyonEffectsofLongmuZhuangguGranuleinTreatingGlucocorticoid-resultedRatOsteoporosis

Hu Zhenbo1, Zhao Gang1, Liu Weiwan2, Xia Chun1, Ding Hong2, Huang Zhijun1

(1AcademyofPharmaceuticalResearch,JianminPharmaceuticalGroupCo.,LTD,Wuhan430052,China; 2SchoolofPharmacy,WuhanUniversity,Wuhan430071,China)

Objective:To investigate the effects of Longmu Zhuanggu Granule on glucocorticoid-induced osteoporosis rats.MethodsRat osteoporosis models were prepared with low calcium feed and muscle injection with hydride prednisone. Compound group, Chinese medicine group, chemical medicine group, and model group of rats were given Longmu Zhuanggu Granule, its Chinese medicine, its chemical medicine, and distilled water respectively by intragastric administration. Normal control rats were feed with normal fodder. Related indicators were detected after 35 days of administration.ResultsIndicators of the compound group of rats, such as body weight, thymus index, calcium and phosphorus in blood, femoral weight, bone calcium, femoral epiphysis end diameter of the cortex, bone mineral density, the density of backbone medulla, cortical density, bone mineral density, etc, were significantly superior to the model group. Urinary calcium of the compound group of rats was significantly lower than that of the model group.ConclusionLongmu Zhuanggu Granule possesses a well therapeutic effect on glucocorticoid-induced osteoporosis.

Longmu Zhuanggu Granule; Rat; Osteoporosis; Glucocorticoid

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.12.052

武漢市高新技術成果轉化及產業化計劃(201260513159)——中藥兒科系列化新產品的產業化開發

胡振波(1971.01—)，男，碩士，高級工程師，研究方向：中藥藥理學研究

黃志軍(1972.09—)，男，博士，副教授，研究方向：藥理學研究，Tel:(027)84520229，E-mail：542354589@qq.com

(2017-11-10收稿 責任編輯：徐穎)