TRPC1在兒童肝母細胞瘤中的表達與臨床病理特征及預后的關系

黃召， 李勇， 劉登輝， 肖雅玲

臨床研究

TRPC1在兒童肝母細胞瘤中的表達與臨床病理特征及預后的關系

黃召， 李勇， 劉登輝， 肖雅玲

目的檢測TRPC1在兒童肝母細胞瘤組織中的表達，分析其與臨床病理特征及預后的關系。方法收集湖南省兒童醫(yī)院普外科自2008年1月至2015年12月行肝臟腫塊切除的16例肝母細胞瘤患兒的病理資料和臨床資料，采用免疫組織化學法檢測TRPC1在兒童肝母細胞瘤組織中的表達情況，并分析其與臨床病理特征(腫瘤組織與非腫瘤組織、腫瘤的大小)的關系，隨訪3～5年分析其與預后的關系。結果TRPC1在16例肝母細胞瘤患兒癌組織中表達程度不同，高表達占62.5%(10/16)，低表達占37.5%(6/16)。TRPC1高表達與肝母細胞瘤臨床病理特征中的腫瘤組織與非腫瘤組織、腫瘤大小比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；患兒3年生存率為72.73%(8/11)，5年生存率為50%(3/6)。TRPC1表達與3年、5年生存率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論TRPC1表達可能與兒童肝母細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展有關，但不一定與預后有關。

肝母細胞瘤； TRPC1； 免疫組織化學； 臨床病理特征； 預后； 兒童

肝母細胞瘤是兒童最常見的肝臟惡性腫瘤，約占15歲以下兒童惡性腫瘤的l%和肝臟原發(fā)惡性腫瘤的79%；肝母細胞瘤總的發(fā)病率是(0.5～1.5)/1 000 000，男孩多見，男女比例為1.2～3.6∶1[1]。現(xiàn)在針對肝母細胞瘤的治療方案是根據(jù)PRETEXT分期系統(tǒng)對腫瘤進行分期，聯(lián)合手術、化療(輔助和新輔助)和肝移植、放射治療、免疫、生物治療等綜合治療[2-4]。

TRPC1是一種廣泛分布于細胞膜及細胞質中的非選擇性Ca2+通道蛋白，于1995年由Wes等[5]首次確認其位于人染色體3q11，并與當時已知的其他TRP家族基因有至少38%以上的同源性。TRPC1基因編碼的TRPC1蛋白主要表達在胎兒的大腦、肝臟和腎臟，成人的心臟、肌肉、大腦睪丸及卵巢。TRPC1通道單獨或與其他離子通道共同參與的細胞內Ca2+的變化與機體多種生理功能密切相關，如神經(jīng)信號的傳遞、肌肉的發(fā)育、心肌自律性、細胞分化信號的調控等。TRPC1的異常表達可能與相關疾病的發(fā)生有關。

TRPC1與兒童肝母細胞瘤的關系目前未見相關研究及報道，本研究的目的主要是通過免疫組織化學實驗方法來檢測TRPC1分子在16例兒童肝母細胞瘤患者病理標本的癌組織中的表達，并進一步分析其表達水平與臨床病理特征及預后的關系，對TRPC1在兒童肝母細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后過程中可能的作用進行了初步探討和分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年1月至2015年12月湖南省兒童醫(yī)院行肝葉切除術的肝母細胞瘤患兒16例，其中男9例，女7例；年齡1～7歲，平均(4.0±0.3)歲。所有病理診斷均為肝母細胞瘤，同時收集了腫瘤組織及腫瘤組織邊緣2 cm的正常組織，以及所選病例的相關病理資料和臨床資料，并進行隨訪3～5年。

1.2 主要試劑 TRPC1抗體采用兔抗人多克隆抗體(Santa Cruz CA，Cat.No.sc-50414)，對應二抗采用免疫組織化學SP法二抗試劑盒(Gene Tech，Real EnvisionTMDetection Kit,Rabbit/Mouse. Code No.GK500705)。

1.3 實驗方法 免疫組織化學檢測：石蠟塊標本連續(xù)切片，采用免疫組織化學SP法。一抗?jié)舛葹?∶100。以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定 TRPC1分子主要表達是在肝細胞膜及胞漿，陽性染色為出現(xiàn)黃色、棕黃色、棕褐色著色顆粒，陽性細胞數(shù)≥10%判為TRPC1為高表達，<10%為低表達。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料采用Fisher確切概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 TRPC1表達與組織病理學特征的關系 見表1。

表1 TRPC1表達與組織病理學特征的關系[n(%)]

注：與腫瘤旁組織比較，aP=0.029；與腫瘤直徑≥5 cm比較，bP=0.036。

表1可見，TRPC1在肝母細胞瘤組織的高表達顯著多于腫瘤旁組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TRPC1在直徑≥5 cm肝母細胞瘤組織中的高表達顯著高于直徑<5 cm腫瘤組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 TRPC1表達與預后的關系 見表2。

表2 TRPC1表達與3年、5年生存率的關系[n(%)]

本研究16例患兒完成3年隨訪的有11例，其中死亡3例，生存率為72.73%(8/11)。完成5年隨訪的僅6例，生存率為50.0%(3/6)。TRPC1表達與3年、5年生存率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討論

兒童肝母細胞瘤從胚胎期至發(fā)病一般需2年時間，故發(fā)病通常在1～3歲，90%血清甲胎蛋白水平明顯增高，10%～20%病例轉移至肺、肝門、腦和骨[6]。由于其具體發(fā)病機制尚未闡明，目前的治療效果并不理想。歐洲小兒肝臟腫瘤研究者(SIOPEL)報導手術切除率80%，3年生存率85%，5年生存率70%，無瘤生存率67%[7]。國內由于就診晚，治療不規(guī)范，手術完整切除率低，3年生存率低于50%[8]。

一般認為，肝母細胞瘤的發(fā)生，發(fā)展，轉移是一個涉及多個因素，多個環(huán)節(jié)的復雜的生物學過程。隨著分子生物學的發(fā)展，有關生物學治療的研究成為了肝母細胞瘤診治的熱點及新的突破口。人們試圖通過研究細胞的生物學行為，在分子水平解釋其發(fā)生、發(fā)展、轉移的分子生物學活動機制，以參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉移過程的關鍵分子作為靶點，通過靶向藥物或其他手段特異性地將其殺傷，從而達到抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的目的[9]。

瞬時受體電位(transient receptor potential，TRP)通道是位于細胞膜上的一類重要的非電壓依賴性陽離子通道，被激活時允許包括鈣離子在內的陽離子進行跨膜運輸[10]。TRP在多種哺乳動物組織中廣泛表達，主要有TRPA、TRPC、TRPV、TRPM、TRPP、TRPN、TRPML 7個亞族[11]。TRP基因編碼的蛋白是一種能通透Ca2+的陽離子通道，參與機體多種生理功能，如鈣的平衡、痛溫覺的感知等，在維持機體生理功能中發(fā)揮著重要作用。TRPC1是TRPC亞族的一種，是一種非選擇性的Ca2+通道，屬于儲存控制型通道[12]。Ca2+在信號轉到過程中作為第二信使發(fā)揮著廣泛作用，尤其在細胞體積、肌肉收縮、細胞周期調控及細胞凋亡、神經(jīng)傳遞、酶和激素分泌等多種生理活動中發(fā)揮重要作用。細胞增殖的各個階段都有鈣離子的參與[13]。

TRPC1通道激活開放后，對鈣的進出細胞過程產生影響，可能導致感受器細胞內Ca2+濃度升高和細胞膜的去極化，促使動作電位的發(fā)生及信號轉導，從而達到調控細胞生理功能的作用。TRPC1通道蛋白的異常表達，可能會影響機體的正常生理過程，導致疾病的發(fā)生。

TRPC1在腫瘤中的研究已取得不少進展，但與兒童肝母細胞瘤的關系目前未見相關研究及報道。本研究結果顯示，TRPC1在肝母細胞瘤腫瘤組織及非腫瘤組織中，以及在直徑<5 cm和直徑≥5 cm的腫瘤組織中，表達程度均有顯著差異。因此我們推測，TRPC1的表達差異可能與兒童肝母細胞瘤的發(fā)生和發(fā)展有關。其具體機制可能是TRPC1作為非選擇性Ca2+通道，通過調節(jié)作為第二信使的Ca2+進出細胞，影響細胞體積變化以及增殖分化的信號轉導。TRPC1的異常表達可能使得正常肝細胞的生理活動改變，在其增殖、分化過程中變異，導致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

在有關預后的研究中，TRPC1表達與患兒術后生存率沒有顯著差異。我們不能認為TRPC1表達程度影響了肝母細胞瘤的預后，但并不能斷定TRPC1與其無關。因為樣本數(shù)量較小、隨訪不滿意，而且研究方法簡單，并不能完全說明問題，需進一步研究以確定其相關性。

綜上所述，TRPC1表達可能與兒童肝母細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展有關，但其與預后的關系有待進一步研究。

[1] Bulterys M,Goodman MT,Smith MA,et al.Hepatic tumors[M].Cancer Incidence and Survival among Children and Adolescents:United States SEER Program 1975-1995.National Cancer Institute,SEER Program:Bethesda,USA.1999.

[2] Leal-Leal CA,Imaz-Olguín V,Robles-Castro J,et al.Hepatoblastoma.Clinical experience at a single institution using the Siopel staging system[J].Ann Hepatol,2010,9(1):75-79.

[3] Roebuck DJ,Aronson D,Clapuyt P,et al.2005 PRETEXT:a revised staging system for primary malignant liver tumours of childhood developed by the SIOPEL group[J].Pediatr Radiol,2007,37(2):123-132.

[4] Sasaki F.Strategy for the treatment of hepatoblastoma in children[J].Nihon Geka Gakkai Zasshi,2005,106(7):427-430.

[5] Wes PD,Chevesich J,Jeromin A，et al.TRPC1,a human homolog of a Drosophila store-operated channel[J].Proc Natl Acad Sci U S A,1995,92(21):9652-9656.

[6] Herzog CE,Andrassy RJ,Eftekhari F.Childhood cancers:hepatoblastoma[J].Oncologist,2000,5(6):445-453.

[7] Roebuck DJ,Perilongo G.Hepatoblastoma:an oncological review[J].Pediatr Radiol,2006,36(3):183-186.

[8] 張法標,王義,叢文銘,等.兒童期及青春期肝細胞癌臨床病理特點及影響術后生存率的多因素分析[J].中華小兒外科雜志,2006,27(1):1-5.

[9] Daveau M,Scotte M,Fran ois A,et al.Hepatocyte growth factor,transforming growth factor alpha,and their receptors as combined markers of prognosis in hepatocellular carcinoma[J].Mol Carcinog,2003,36(3):130-141.

[10]Faivre S,Le Chevalier T,Monnerat C,et al.Phase I-II and pharmacokinetic study of gemcitabine combined with oxaliplatin in patients with advanced non-small-cell lung cancer and ovarian carcinoma[J].Ann Oncol,2002,13(9):1479-1489.

[11]Huang CL.The transient receptor potential superfamily of ion channels[J].J Am Soc Nephrol,2004,15(7):1690-1699.

[12]Vaca L,Sinkins WG,Hu Y,et al.Activation of recombinant trp by thapsigargin in Sf9 insect cells[J].Am J Physiol,1994,267(5 Pt 1):C1501-1505.

[13]Berridge MJ,Lipp P,Bootman MD.The versatility and universality of calcium signalling[J].Nat Rev Mol Cell Biol,2000,1(1):11-21.

RelationshipoftheexpressionofTRPC1withclinicopathologicalparameterandprognosisofhepatoblastomainchildren

HUANGZhao，LIYong，LIUDenghui，XIAOYaling.

HunanChildren'sHospital,Changsha410007,China

ObjectiveTo defect the expression of TRPC1 in the tissues of hepatoblastoma and to analyze its relationship with clinicopathological features and prognosis.MethodsThe pathological data and clinical data of 16 children with hepatoblastoma(HB) were collected, who underwent hepatectorny in Hunan Children's Hospital from Jan. 2008 to Dec. 2015. The expression of transient receptor potential channel-related protein 1(TRPC1) in HB tissues was detected by immunohistochemistry, its relationship with clinicopathological features(neoplastic tissues and non-neoplastic tissues, the sizes of neoplasm) was analyzed, and its relationship with prognosis was analyzed in the 3 to 5 years of follow-up.ResultsThe expression of TRPC1 in the 16 HB children was different, with high expression accounting for 62.5%(10/16) and low expression 37.5%(6/16).The high expression of TRPC1 had statistical difference in the neoplastic and non-neoplastic tissues and in the sizes of neoplasms(P<0.05).The 3-year survival rate was 72.73%(8/11),and the 5-year was 50%(3/6).There was no statistical significance in TRPC1 expression comparing 3-year with 5-year survival rate(P>0.05).ConclusionThe expression of TRPC1 may be related to the development and progression of HB in children, but it may be irrelevant to prognosis.

Hepatocastoma; TRPC1; Immunohistochemistry; Clinicopathological festures; Prognosis; Child

410007 長沙，湖南省兒童醫(yī)院普外二科

黃召(1986-)，男，醫(yī)學碩士，醫(yī)師。研究方向：小兒胃腸、肝膽、腫瘤疾病的診治

肖雅玲，E-mail：etyypwk@sina.com

10.3969/j.issn.1674-3865.2017.06.011

R725.7

A

1674-3865(2017)06-0495-03

2017-09-19)

吳迪)